截止到2022年3月，全球共批準(zhǔn)了14個(gè)ADC,，考慮到穩(wěn)定性問題,，所有的ADC制劑目前均采用了凍干粉的形式,。上篇我們對(duì)100+抗體的制劑做詳細(xì)介紹和相關(guān)內(nèi)容延伸，本篇我們仔細(xì)梳理一下ADC的制劑,。

一,、14個(gè)ADC結(jié)構(gòu)詳解

首先對(duì)ADC的結(jié)構(gòu)做了文字和結(jié)構(gòu)圖梳理，Seagen目前已經(jīng)上市了3款以mc-VC-PABC為linker,，MMAE為payload的ADC,，有意思的是榮昌生物用了完全一樣的linker-payload,最后還被Seagen買走了權(quán)益，我個(gè)人盲猜是mc-VC-PABC-MMAE沒有專利的問題,，那解決其中的工藝問題就很關(guān)鍵,。

典型的抗體配方包含1,、ADC,；2、賦形劑（糖或鹽）,；3,、緩沖液；4,、表面活性劑（吐溫）,；5、其他（金屬離子螯合劑）,。下圖仔細(xì)列舉了14個(gè)ADC的制劑配方,。

可以發(fā)現(xiàn)，即使相同的linker-payload,，不同的抗體最終用的制劑buffer也會(huì)有差異,。下面我們按照配方如何篩選、如何評(píng)價(jià)逐一介紹,。

三,、ADC制劑篩選過程及評(píng)價(jià)指標(biāo)分析

3.1 PH和緩沖buffer

已上市的14個(gè)ADC中，制劑PH在6.0-6.9之間的最多,，達(dá)到7個(gè)；5.0-5.9和7.0-7.9之間的分別有3個(gè),；此外有一個(gè)PH值用的8,。

在緩沖buffer種類選擇時(shí)，以組氨酸鹽最多,，14個(gè)中有5個(gè)為組氨酸,，3個(gè)磷酸鹽，2個(gè)檸檬酸鹽,，2個(gè)琥珀酸鹽,，氨丁三醇,、MES各一個(gè)。

那么問題來了,，緩沖buffer種類繁多,，能緩沖的PH范圍也不盡相同，那以什么指標(biāo)來評(píng)價(jià)哪種buffer是該ADC最合適的buffer呢,？

通用做法是這樣的,，根據(jù)不同緩沖對(duì)的緩沖范圍，從4.0-8.0設(shè)置pH梯度,，配成臨床打算用的ADC濃度（比如愛地希10mg/ml）,，25℃&40℃放置7天，分別于第0天,，第1天,，第3天，第7天觀察,、取樣,。肉眼觀察澄清度情況、BCA檢測(cè)濃度,、SEC-HPLC檢測(cè)純度,、DSC檢查熱穩(wěn)定性等。

當(dāng)確定好適宜pH范圍后,，可以選擇該PH下的兩種緩沖劑,，比如適宜pH為6.0，就可以選擇30mM組氨酸或者20mM檸檬酸作為制劑的緩沖劑,，然后進(jìn)行下一步的篩選,。

3.2 表面活性劑

表面活性劑主要通過降低表面張力來減少聚體的產(chǎn)生。14個(gè)ADC中,，有7個(gè)用了0.01-0.02%（W/V）的吐溫80,有3個(gè)用了0.01-0.02%（W/V）的吐溫20,1個(gè)用了0.03%的吐溫80,，1個(gè)用了0.1%的吐溫20，另外2個(gè)則未添加表面活性劑,。

那么表面活性劑通常采用什么手段篩選,，什么指標(biāo)評(píng)價(jià)呢？

通常處理方法：在25℃下,，將樣品在軌道振蕩器上以250-300rpm的速度水平攪拌8小時(shí)或更長,，攪拌后，部分樣品會(huì)產(chǎn)生聚集,，溶液變渾濁,。

參考檢測(cè)方法：肉眼觀察溶液澄清度，濃度測(cè)定,，SEC-HPLC檢測(cè)聚集體含量,，濁度計(jì)檢測(cè)濁度,，HIAC自動(dòng)液體顆粒計(jì)數(shù)器檢測(cè)粒子數(shù)。

 3.3 賦形劑篩選

14個(gè)ADC制劑中,，主要通過添加各種糖或者鹽作為賦形劑,。

設(shè)置不同的糖和鹽時(shí)，組合和種類也非常多,，可以先取10%的海藻糖,，9%的蔗糖，5%山梨醇等作為初步篩選基礎(chǔ)配方,，如果要組合,，則二者含量各自減半設(shè)置。4℃,、25℃&40℃放置14天后,，肉眼觀察澄清度情況、BCA檢測(cè)濃度,、SEC-HPLC檢測(cè)純度,、DSC檢查熱穩(wěn)定性、CIEF檢測(cè)酸堿峰含量變化等,。

4,、凍干工藝

配方篩選完成后，進(jìn)行最后一步凍干,，對(duì)于凍干我只能說,，我自己還沒做過，中間有哪些門道和注意事項(xiàng)暫時(shí)不好評(píng)論,，先貼上Tivdak和愛地希的凍干專利的實(shí)施例,，后續(xù)如果有要點(diǎn)再補(bǔ)充。

評(píng)價(jià)指標(biāo)上,，除了上述基礎(chǔ)配方的評(píng)價(jià)指標(biāo)外,，需增加外觀性質(zhì)評(píng)價(jià)和含水量測(cè)試。 

四,、小結(jié)

關(guān)于ADC基礎(chǔ)配方的篩選,，是一個(gè)有規(guī)矩可循，但是每個(gè)人都可以按照自己的進(jìn)度和樣品情況來設(shè)置的操作流程,。比如時(shí)間緊急或者樣品有限的條件下,，可以采用DOE實(shí)驗(yàn)進(jìn)行配方篩選。另外,，熱應(yīng)激的放置條件（40℃or45℃）通過作為緩沖buffer和賦形劑的篩選條件，最常見的為2周,。攪拌應(yīng)激的條件（如250rpm 8h）則通過作為表面活性劑的篩選條件,。

而在評(píng)價(jià)指標(biāo)上,，肉眼觀察澄清度/濁度、SEC-HPLC檢測(cè)聚體含量是常規(guī)通用檢測(cè)項(xiàng),，蛋白濃度的變化大多也都會(huì)進(jìn)行,，在此基礎(chǔ)上，各家檢測(cè)指標(biāo)則不盡相同,，有DSC檢測(cè)Tm值熱穩(wěn)定性變化,，有CIEF檢測(cè)酸堿峰變化，或者HPLC做DAR值檢測(cè)甚至payload雜質(zhì)檢測(cè)等,。確定最終制劑配方后,，加上SDS-PAGE、生物活性的檢測(cè)（結(jié)合活性,、細(xì)胞活性）等也都是可以的,。而在凍干工藝后，通常選擇更長時(shí)間的存放（3個(gè)月,、6個(gè)月甚至1年這種級(jí)別）,，除了以上評(píng)價(jià)指標(biāo)，還需增加水平和外觀形狀的評(píng)價(jià)指標(biāo),。