 介紹 周圍神經(jīng)性疼痛是一種嚴重的慢性疼痛狀態(tài),，可能由周圍神經(jīng)系統(tǒng)的感覺神經(jīng)的創(chuàng)傷引起,。保留神經(jīng)損傷(SNI)模型誘發(fā)神經(jīng)性疼痛的癥狀，如機械性異位痛,，即由觸覺刺激引起的疼痛,，通常不會引起疼痛反應(yīng)。 SNI小鼠模型包括結(jié)扎坐骨神經(jīng)三個分支中的兩個（脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)）,，而腓腸神經(jīng)保持完整的,。病變導致爪子外側(cè)區(qū)明顯的過敏，這是由保留的腓腸神經(jīng)支配的,。 SNI模型的優(yōu)點是反應(yīng)的穩(wěn)健性,，而且它不需要專業(yè)的顯微外科技能。機械性疼痛反應(yīng)的閾值是通過測試vonFrey纖維增加的彎曲力來確定的,，彎曲力反復壓在爪的外側(cè)區(qū)域,。積極的疼痛反應(yīng)被定義為由纖維引起的突然的爪子退縮、退縮和/或舔爪子,。五次重復刺激中有三次的陽性反應(yīng)被定義為疼痛閾值。 大鼠和小鼠操作相似,，下面以小鼠舉例,，為大家參考,。 protocol 一、von Frey術(shù)前的基線測量值 詳見第五部分 二,、麻醉和準備 1.麻醉動物（腹腔注射100mg/kg氯胺酮和15mg/kg甲苯噻嗪的混合物）,。 2.將動物放在一個安靜的地方，直到完全麻醉（例如用紙巾覆蓋）,。 3.用鑷子夾住尾巴的尖端和爪子來檢查反射,。在繼續(xù)行動之前，確保動物沒有反應(yīng),。 4.皮下注射（后肩區(qū)域）0.5ml等滲生理鹽水和抗生素,，如氨芐西林（以避免脫水和防止感染，盡管這是一個較小的外科手術(shù)）,。 5.使用電動剃須刀,，將手術(shù)野從膝蓋以下稍微向下刮到臀部（對于右撇子患者，建議使用左后肢）,。 6.用棉絮芽在眼睛上涂抹眼藥膏,。 7.將動物放在其右側(cè)，并將左后肢放在一個小平臺上,，以保持其升高,。用膠帶固定住腿部。 8.從手術(shù)部位交替用乙醇和碘碘堿消毒手術(shù)野,。 三,、手術(shù)操作 1.用左手的拇指找到膝蓋，用手術(shù)刀制作一個應(yīng)用程序,。膝關(guān)節(jié)近端縱向1cm切口,。 2.用一把無菌剪刀的尖端進行鈍性分離皮膚 3.在靠近大腿骨（股骨）的清晰可見的血管附近，通過鈍性剝離來分離肌肉層,。如果做得正確,，肌肉層將很容易分離，沒有任何出血,，顯示出肌肉正下方的坐骨神經(jīng),。如果發(fā)生出血，例如通過損傷靠近膝蓋的血管,，使用無菌棉絮芽或凝視片來吸收血液,。壓迫出血點，直到出血停止,。 4.將小鼠置于立體顯微鏡下,，用一對無菌鑷子小心地分離肌肉(nr.2)觀察坐骨神經(jīng)，也可以使用牽開器,。 5.確定坐骨神經(jīng)分支的區(qū)域,。腓腸神經(jīng)是三條分支中最小的一條,，在左腿上向右分支。 6.在其他兩個仍然平行運行的分支（脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)）周圍縫合（6-0縫合）,，非常小心不要接觸腓骨分支,。這是一個關(guān)鍵的步驟，因為腓腸神經(jīng)必須保持完全完整,。 7.做一個緊密的手術(shù)結(jié),。如果第一個結(jié)是緊的，將觀察到肢體的收縮,。 8.用一對鑷子抓住縫合線下面的神經(jīng)（nr.5）,。用一把小剪刀切斷鑷子上下的神經(jīng)。首先在鑷子上方切開,，避免了拉動神經(jīng),。 9.用一把微剪刀剪掉縫合線的末端，輕輕地閉合肌肉層,。在傷口上加入一滴利多卡因,，用手術(shù)結(jié)縫合。 四,、術(shù)后護理 1.檢查眼藥膏是否仍然充足,。 2.將老鼠放在一個干凈的籠子里，放在紙巾下,，保持舒適的姿勢,。如果房間很冷，在籠子的一部分下面放一個熱墊（只在籠子的一部分下面,，因為如果動物想到較冷的區(qū)域）,。 3.確保容易獲得的水和食物。 五,、vonFrey測試（基線,，從術(shù)后第一天開始） 1.術(shù)前兩天和一天，將小鼠置于紅色的塑料圓筒中,，放置在金屬絲網(wǎng)桌上,。在測試前，在鋼瓶中習慣15min,。圓柱體的紅色可以幫助老鼠快速放松,，因為它們看不到彼此,，并且在一個較暗的區(qū)域。 2.驗證老鼠平靜和應(yīng)用vonFrey外側(cè)的爪子：從0.02g絲開始,，首先應(yīng)用力左爪五次總共30秒（大約2秒/刺激）和測量每個應(yīng)用程序后鼠標的反應(yīng),。用同樣的纖維和其他老鼠的左爪重復,，然后用第一只老鼠的右爪重新開始，然后繼續(xù)到下一根纖維，例如 · Mouse 1: left paw 5 times with filament 0.02 g · Mouse 2: left paw 5 times with filament 0.02 g etc. · Mouse 1: right paw 5 times with filament 0.02 g · Mouse 2: right paw 5 times with filament 0.02 g etc. · Mouse 1: left paw 5 times with filament 0.04 g · Mouse 2: left paw 5 times with filament 0.04 g etc. 3.五分之三的刺激物的反應(yīng)被認為是一種陽性反應(yīng),。高于閾值的纖維可用于驗證閾值水平。反應(yīng)=突然的爪子退縮,，突然的退縮，突然的舔爪子,。 六,、結(jié)果呈現(xiàn)
七、關(guān)鍵步驟 為了研究脛骨神經(jīng)和腓總神經(jīng)損傷后完整的腓腸神經(jīng)的病理改變,，應(yīng)避免對腓腸神經(jīng)損傷,。腓腸神經(jīng)的附帶損傷可能導致癱瘓，因此可以可視化為手術(shù)后肢的拖動,。只有爪子的外側(cè)受到剩余的腓腸神經(jīng)的支配,，因此，只有這個區(qū)域會發(fā)生神經(jīng)病變,。測試其他由橫斷神經(jīng)支配的區(qū)域,，可以強烈地偏向于對改變的機械閾值的評估。 參考文獻：The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice. |
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