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免疫功能測(cè)定
抗SS-A(Ro)識(shí)別的表位位于細(xì)胞內(nèi)與小核糖核酸hY1,、hY3、hY4,、hY5形成復(fù)合物的兩種蛋白質(zhì)(60×103和52×...[詳細(xì)][收起]
血清抗SS-A(Ro)抗體注意事項(xiàng)抗SS-A(Ro)經(jīng)常能在ANA陰性的SLE患者中查及,許多基質(zhì)特別是常規(guī)甲醇固定的Hep-2細(xì)胞,,在IFT反應(yīng)中,,抗SS-A不以ANA的形式表現(xiàn)。這是因?yàn)槠涞味鹊?,部分抗原位于胞質(zhì)或者在固定的過(guò)程中抗原被洗掉,。如臨床懷疑為SLE,而ANA陰性,,應(yīng)檢測(cè)抗SS-A(Ro)以及抗磷脂抗體,。 雖然已知抗SS-A(Ro)有兩種不同的靶抗原(Ro52、Ro60),,但大多數(shù)檢測(cè)方法,,如免疫擴(kuò)散,、反相免疫電泳,、以純化抗原建立的ELISA法,不能區(qū)分它們,。免疫印跡法和以Ro52,、Ro60兩種重組抗原建立的ELISA法,可以分別檢出兩種抗SS-A(Ro),。根據(jù)免疫印跡法統(tǒng)計(jì)的資料報(bào)道,,Ro52抗體與干燥綜合征有更強(qiáng)的聯(lián)系,而Ro60抗體與SLE相關(guān)性更密切,。但由于30%的Ro陽(yáng)性血清免疫印跡法為陰性,,所以該結(jié)論有局限性,,特別是由于Ro60抗原表位是部分構(gòu)象性的,在免疫印跡法中被破壞,。如采用足夠靈敏的方法,,絕大多數(shù)Ro陽(yáng)性血清可以檢測(cè)到兩種抗體。 血清抗SS-A(Ro)抗體指標(biāo)解讀結(jié)果
陰性:
陽(yáng)性: 導(dǎo)致該異常結(jié)果可能疾病為: 干燥綜合征神經(jīng)系統(tǒng)損害 血清抗SS-A(Ro)抗體相關(guān)疾病血清抗SS-A(Ro)抗體相關(guān)癥狀血清抗SS-A(Ro)抗體檢查作用抗SS-A(Ro)抗體對(duì)干燥綜合征等自身免疫疾病的診斷有作用,。40%-90%原發(fā)性干燥綜合征患者,。約75%先天性心臟病和新生兒狼瘡患者??筍S-A陽(yáng)性/抗SS-B陰性患者相比,,抗SS-A和抗SS-B陽(yáng)性的SLE患者,較少腎臟損傷,,抗dsDNA也較少陽(yáng)性,,這種抗體模式也常在遲發(fā)性SLE患者中見(jiàn)到。 血清抗SS-A(Ro)抗體檢查過(guò)程抗SS-A(Ro)抗體的測(cè)定原理:用間接免疫熒光法檢測(cè)時(shí),,抗SS-A/Ro,、抗SS-B/La陽(yáng)性結(jié)果表現(xiàn)為核的細(xì)斑點(diǎn)型免疫熒光,但抗SS-A/Ro引起的熒光亮度較弱,。其操作與原理均與抗核抗體檢測(cè)相同,。雙向免疫擴(kuò)散法仍為抗SS-A/Ro、抗SS-B/La的常用檢測(cè)方法,,但敏感性不高,。目前常用免疫印跡法,其原理可參看抗Sm抗體測(cè)定,。最近也有人用基因重組的52kD和60kD蛋白質(zhì)建立ELISA法測(cè)定抗SSA/Ro抗體,,用重組48kD蛋白質(zhì)建立ELISA法測(cè)抗SS-A/La抗體,其敏感性較之免疫擴(kuò)散法約高千倍,,但因特異性問(wèn)題(重組抗原中常含有細(xì)菌產(chǎn)物)未廣泛應(yīng)用,。一種敏感性和特異性都很高的方法是放射免疫沉淀法,此法是用放射性36S-蛋氨酸或32P-正磷酸鹽標(biāo)記組織培養(yǎng)細(xì)胞,,標(biāo)記上36S的代表所有蛋白質(zhì),,標(biāo)記上32P的代表磷酸化蛋白,此外,,細(xì)胞內(nèi)RNAs也標(biāo)記上32P,。將待測(cè)血清與標(biāo)記上放射性核素的組織細(xì)胞提取物混合,抗體與標(biāo)記抗原反應(yīng),,形成免疫復(fù)合物,,用葡萄球菌A蛋白使免疫復(fù)合物沉淀,,溶解后行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳、放射自顯影,,與自身抗體結(jié)合的放射性標(biāo)記核抗原形成的條帶即可顯現(xiàn)出來(lái),,參照標(biāo)準(zhǔn)品形成的條帶進(jìn)行分析,即可做出診斷,。此法目前還只限于實(shí)驗(yàn)室研究,。 試劑:血清 1ml。 操作方法: ?。?)沉淀法:與抗Sm,、抗RNP或抗SS-B等類(lèi)似的檢測(cè)方法不同,小牛,、兔,、胸腺提取物由于沒(méi)有足夠濃度的Ro抗原,不能用于免疫雙擴(kuò)散和反相免疫電泳,,而主要從人脾組織或人培養(yǎng)細(xì)胞(WI-L2)獲得,。沉淀帶與參考血清相同,核實(shí)為SS-A特異性,。 ?。?)免疫印跡法:抗原采用細(xì)胞培養(yǎng)物如HeLa、MolT-4,。當(dāng)與參考血清有兩條相同典型帶(60×103和52×102)時(shí),,可確證為抗SSA(Ro)陽(yáng)性。 ?。?)ELISA:可用親和純化或重組52×103和60×103蛋白,,或相對(duì)純化的hY-RNP顆粒作抗原。 |
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