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分光光度法是根據(jù)不同濃度溶液對(duì)某一特定光的吸收強(qiáng)度（吸光度）不同從而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析的方法,。其定量基礎(chǔ)為朗伯比爾（定律， 即溶液吸光度＝溶液吸光系數(shù)×溶液層厚度（cm）× 溶液濃度（ｇ/dm３）,。 其中,，吸光系數(shù)與溶液自身性質(zhì)、 測定溫度及波長等因素有關(guān),。 當(dāng)溶液吸光系數(shù)和溶液層厚度固定時(shí),，吸光度與溶液濃度成線性關(guān)系。 根據(jù)此定律,，可實(shí)現(xiàn)溶液中物質(zhì)的定量分析,。分光光度計(jì)，又稱光譜儀,，是測定溶液吸光度值最為常見的科學(xué)儀器,。分光光度法是一種成熟的定量分析技術(shù)，有大量文獻(xiàn)作為高中生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課堂開展的理論基礎(chǔ),?？梢杂糜诟咧袑?shí)驗(yàn)教材中(關(guān)注公眾號(hào)，光電比色法拓展實(shí)驗(yàn)課題即將更新....),。  二,、高考鏈接 1.[2017浙江11月選考,7分]回答與釀酒和制醋有關(guān)的問題: (2)大米經(jīng)蒸煮,、紅曲霉菌糖化后,用某釀酒酵母進(jìn)行酒精發(fā)酵,發(fā)酵完畢后得到新鮮紅曲酒,酒中乙醇濃度不超過15%,。其主要原因是當(dāng)發(fā)酵液中的乙醇濃度接近15%時(shí), (A.乙醇氧化逐漸增強(qiáng)直至平衡 B.葡萄糖分解逐漸增強(qiáng)直至平衡 C.乙醇氧化逐漸減弱直至停止 D.葡萄糖分解逐漸減弱直至停止)。 (3)已知葡萄糖與蒽酮試劑反應(yīng)能產(chǎn)生顏色,采用光電比色法測定紅曲酒中的葡萄糖含量的步驟如下:第一步,標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作,。用蒸餾水配制 ,與蒽酮試劑反應(yīng)后,用比色計(jì)測定,并制作反應(yīng) 的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。第二步,樣品處理。將待測酒樣品通過活性炭脫色,其目的是 ,。第三步,樣品測定與計(jì)算,。 (4)影響紅曲酒風(fēng)味的主要因素,除了溫度、pH,、氧氣等環(huán)境因素外,還有 (答出2點(diǎn)即可),。 (5)在紅曲醋生產(chǎn)工藝中,將適量的紅曲酒,、水和醋化醋桿菌等混合,再添加一定量谷殼糠等制成松散的發(fā)酵料,其目的是 ,以利于醋酸發(fā)酵。 答案 (1)單菌落(2)D(3)一系列濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 葡萄糖濃度與光密度值關(guān)系 排除酒原有顏色的干擾(4)不同的菌株,、不同的原料(5)增加透氣性 2.[2017浙江4月選考,7分]回答與泡菜腌制和亞硝酸鹽測定有關(guān)的問題: (2)泡菜腌制過程中,會(huì)產(chǎn)生有機(jī)酸,、醇類和亞硝酸鹽,其中醇類是由 進(jìn)行厭氧呼吸產(chǎn)生的。亞硝酸鹽對(duì)人體有害,為測定泡菜中亞硝酸鹽的含量,從泡菜中提取亞硝酸鹽,與 發(fā)生重氮化反應(yīng),再與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián),形成紫紅色產(chǎn)物,。然后用光程為1 cm的 ,在550 nm光波下測定光密度值,與用已知濃度梯度的亞硝酸鈉制作的 比對(duì),計(jì)算樣品中亞硝酸鹽的含量,。 (3)已知乳酸菌中的亞硝酸還原酶能降解亞硝酸鹽。在一定的腌制時(shí)間內(nèi),隨著腌制時(shí)間的延長,泡菜中亞硝酸鹽含量逐漸降低,這是由于在厭氧和 環(huán)境中亞硝酸鹽被亞硝酸還原酶降解,。 答案 (1)接種環(huán) B(2)假絲酵母 對(duì)氨基苯磺酸 比色杯 標(biāo)準(zhǔn)曲線 (3)酸性 1.(2019浙江臺(tái)州聯(lián)考,7分)某食品公司宣稱其生產(chǎn)的泡菜(每瓶300 mL)中活性乳酸菌的含量高達(dá)320億個(gè),為探究其是否涉及虛假宣傳,工商部門對(duì)該泡菜的活菌數(shù)目和亞硝酸鹽含量進(jìn)行了檢測。 (1)乳酸菌活菌檢測:取1 mL的樣品液,加入99 mL 制備成10-2的樣品稀釋液,并依次制備10-3,、10-4,、10-5、10-6的樣品稀釋液,。再分別取0.1 mL稀釋液用 法接種到多個(gè)LB固體培養(yǎng)基上,。培養(yǎng)一段時(shí)間后,10-6這個(gè)濃度的平均菌落數(shù)為12,則該瓶泡菜中的活菌數(shù) (填“符合”或“不符合”)其宣傳 (2)亞硝酸鹽含量檢測:樣品液處理后加入顯色液,再置于 中用光電比色計(jì)測定其 ,影響其數(shù)值大小的因素有 等。(寫出兩點(diǎn)) 答案 (1)無菌水 涂布分離 符合 (2)比色杯 光密度值(OD值)光程,、波長,、濃度(任答兩點(diǎn),每點(diǎn)1分)
四、亞硝酸鹽的測定（浙科版生物與實(shí)踐實(shí)驗(yàn)10）  |
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