翻譯：塔拉（遼寧丹東中心醫(yī)院）

審校：羅賽群（中南大學(xué)生科院）,，王若光（若光醫(yī)學(xué)研究中心）

MarinePeyneau ^a, Niloufar Kavian ^a,b,c,d, Sandrine Chouzenoux ^a,,Carole Niccoa, Mohamed Jeljeli ^a,b,c, Laurie Toulleca ^a,Jeanne Reboul-Marty^b,e, Camille Chenevier-Gobeaux ^b,f,Fernando M. Reisa ^a, Pietro Santulli ^a,b,g, LudivineDoridota^b,1,Charles Chaprona^a,b,g,1, and Frédéric Batteux^a,b,c,1,2

^a,Institut Cochin, INSERM U1016, UniversitéParis Descartes, Sorbonne Paris Cité, 75679 Paris, France; ^b,AssistancePublique–H?pitaux de Paris, H?pital Universitaire Paris Centre, CentreHospitalier Universitaire Cochin, 75679 Paris, France; ^c,Serviced’immunologie biologique, Université Paris Descartes, Sorbonne Paris Cité,75679 Paris, France; ^d,HKU Pasteur Research Pole, School of PublicHealth, The University of Hong Kong, Hong Kong, China; ^e,Département,Information Médicale, Université Paris Descartes, Sorbonne Paris Cité, 75679Paris, France; ^fService de Diagnostic Biologique Automatisé,Université Paris Descartes, Sorbonne Paris Cité, 75679 Paris, France; and ^g,Départementde Gynécologie Obstétrique II et Médecine de la Reproduction, Université ParisDescartes, Sorbonne Paris Cité, 75679 Paris, France

   子宮內(nèi)膜異位癥的特征是子宮腔外存在異位的內(nèi)膜細(xì)胞,。

   甲狀腺自身免疫與子宮內(nèi)膜異位癥有關(guān)。這項(xiàng)工作調(diào)查了子宮內(nèi)膜異位癥和甲狀腺疾病之間潛在的病理生理聯(lián)系,。子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位和異位內(nèi)膜中,，與甲狀腺代謝相關(guān)分子的mRNA和蛋白表達(dá)失調(diào),，導(dǎo)致異位內(nèi)膜對三碘甲狀腺原氨酸(T3)的抵抗和甲狀腺素(T4)的局部積聚。促甲狀腺激素（TSH）對所有子宮內(nèi)膜均具有促增殖和促氧化作用,，而T3和T4特異性作用于異位內(nèi)膜細(xì)胞,，促進(jìn)內(nèi)膜細(xì)胞增殖和活性氧（ROS）的產(chǎn)生。

   動(dòng)物模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),，當(dāng)甲狀腺素增加時(shí),，子宮內(nèi)膜異位癥的植入物變大，進(jìn)一步證實(shí)了體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,。一項(xiàng)對是否伴隨有甲狀腺疾病的子宮內(nèi)膜異位癥患者的回顧性分析顯示,，伴隨有甲狀腺疾病的子宮內(nèi)膜異位癥患者的慢性盆腔疼痛和疾病評(píng)分增加。

甲狀腺|(zhì)甲狀腺激素|子宮內(nèi)膜異位癥|氧化應(yīng)激|自身免疫

子宮內(nèi)膜異位癥是一種良性婦科疾病,，影響多達(dá)10%的育齡婦女⁽¹⁾,。其特征是宮腔外異位內(nèi)膜的存在⁽²⁾，這是導(dǎo)致盆腔疼痛和不孕的嚴(yán)重炎癥的原因^(3,，4),。子宮內(nèi)膜異位癥的病理生理機(jī)制尚不清楚，人們普遍接受的理論是由于月經(jīng)逆流導(dǎo)致內(nèi)膜細(xì)胞在腹腔內(nèi)釋放⁽⁵⁾,。然而，高達(dá)90%的女性會(huì)發(fā)生月經(jīng)反流,，而僅有10%左右的人會(huì)患子宮內(nèi)膜異位癥,。因此，必定有其他因素影響子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展^(6,，7),。激素失調(diào)和芳香化酶的異位表達(dá)導(dǎo)致局部雌激素的產(chǎn)生,，以及異位組織的孕酮抵抗，是子宮內(nèi)膜異位癥的一個(gè)特征,，并有助于病變的生長,。在炎癥因素中，一些作者認(rèn)為自身免疫是子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生的主要因素⁽⁸⁾,。事實(shí)上，子宮內(nèi)膜異位癥概括了自身免疫性疾病的一些特征,，例如與自身抗體(Ab)的存在相關(guān)的慢性局部炎癥^(9，10),。此外,，子宮內(nèi)膜異位癥經(jīng)常與其他幾種器官特異性自身免疫性疾病相關(guān)⁽¹¹⁾。其中,，自身免疫性甲狀腺疾病(AITD)長期以來一直在子宮內(nèi)膜異位癥患者^(11-13)中被強(qiáng)調(diào)，這表明這兩種病理之間存在致病聯(lián)系,。格雷夫氏病和橋本氏甲狀腺炎是兩種主要的臨床表現(xiàn)⁽¹⁴⁾,，其原因是對甲狀腺特異性抗原的耐受性被打破。橋本甲狀腺炎是一種慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎,，腺體進(jìn)行性破壞導(dǎo)致甲狀腺功能減退⁽¹⁵⁾,。Graves病的特征是存在抗促甲狀腺激素(TSH)受體抗體，導(dǎo)致甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)⁽¹⁶⁾,。

   許多研究表明甲狀腺抗體的存在與子宮內(nèi)膜異位癥之間存在關(guān)聯(lián)^(11-13，17),，AITD導(dǎo)致甲狀腺功能減退或甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)⁽¹³⁾,。由于子宮內(nèi)膜異位癥以慢性炎癥過程為特征，子宮內(nèi)膜異位癥患者中AITD的高患病率可能是子宮內(nèi)膜異位癥女性免疫失調(diào)的結(jié)果^（6,，8）,。另一方面，雖然到目前為止還沒有發(fā)現(xiàn)病理生理聯(lián)系,，AITD和更廣泛的甲狀腺功能障礙也可能對子宮內(nèi)膜異位癥的進(jìn)展產(chǎn)生影響,。研究表明甲狀腺參與了子宮內(nèi)膜和卵巢生理^(18，19),，甲狀腺疾病經(jīng)常與婦產(chǎn)科疾病相關(guān),，如不孕癥、流產(chǎn)或早產(chǎn)⁽²⁰⁾,。此外,，促性腺激素和黃體生成素(LH)在結(jié)構(gòu)上有相似之處和交叉反應(yīng),，黃體生成素受體存在于子宮和卵巢,，并與子宮內(nèi)膜異位病變的生長有關(guān)⁽²¹⁾。本研究的目的是研究子宮內(nèi)膜異位癥與AITD之間的相互作用,，更準(zhǔn)確地說,，利用子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜異位癥的原代細(xì)胞系和組織，以及利用相關(guān)的小鼠甲狀腺炎和子宮內(nèi)膜異位癥模型,，從體內(nèi)體外探討甲狀腺疾病對子宮內(nèi)膜異位癥演變的影響,。最后，對伴或不伴甲狀腺疾病的子宮內(nèi)膜異位癥患者的臨床特點(diǎn)進(jìn)行回顧性分析,。

意義

子宮內(nèi)膜異位癥是一種常見的婦科疾病,，其生理病理機(jī)制尚不清楚。甲狀腺自身免疫長期以來被認(rèn)為與子宮內(nèi)膜異位癥有關(guān),，沒有機(jī)制解釋將這兩種病理聯(lián)系起來,。首先，我們發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞中的甲狀腺激素代謝發(fā)生了改變,。我們的體外研究進(jìn)一步揭示了甲狀腺激素在子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞中的促增殖和促氧化作用,。最后，我們在三種不同的小鼠模型中證實(shí)了甲狀腺激素在子宮內(nèi)膜異位癥演變中的加重作用,。在人類中,，甲狀腺疾病與更嚴(yán)重的子宮內(nèi)膜異位癥有關(guān)。因此,，對子宮內(nèi)膜異位癥患者的護(hù)理應(yīng)考慮甲狀腺功能和甲狀腺激素的使用,。

結(jié)果

1.1.     在子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜中，與甲狀腺素信號(hào)通路,、代謝相關(guān)的分子表達(dá)失調(diào)

   樣本來自13例子宮內(nèi)膜異位癥患者的活檢組織,，在位內(nèi)膜組織和異位內(nèi)膜組織各11例。對人子宮內(nèi)膜組織中TSHR,、THRA1,、THRA2、THRB和THRB1的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平進(jìn)行檢測,，結(jié)果表明,，在mRNA水平，患者異位內(nèi)膜組織中TSHR的表達(dá)水平增高2.5倍（P<0.001）,THRA2的表達(dá)水平增高3.3倍（P<0.01），而在位內(nèi)膜組織中的TSHR和THRA2表達(dá)與正常對照組無差異,。蛋白表達(dá)水平的檢測結(jié)果與mRNA表達(dá)水平結(jié)果一致,，在患者的異位內(nèi)膜組織中TSHR（P<0.05）和THRA2（P<0.05）的表達(dá)水平也增高（圖1-1）。

   與正常對照組相比,，子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜中LH受體LHRa（LHCGR亞型a）, LHRb, LHRc和LHRd的mRNA表達(dá)水平也增高,，分別增加8.2倍（P<0.01）、52.7倍（P<0.01）,、19.2倍（P<0.01）和11.8倍（P<0.01）（圖1-2）,。

   THRA2編碼一個(gè)截短的甲狀腺素受體的異構(gòu)體，它不能與T3結(jié)合,，但可以競爭性地抑制T3的轉(zhuǎn)錄活性,。DIO2是一種可以將T4脫碘形成具有生物活性的T3的酶；而DIO3則可將T4和T3脫碘形成兩種無活性的代謝產(chǎn)物：rT3和T2,。與對照組相比,，子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中DIO2 mRNA表達(dá)分別降低了31.2倍（P<0.01）和21.3倍（P<0.01），蛋白表達(dá)水平結(jié)果與mRNA表達(dá)水平一致,，尤其是在異位內(nèi)膜的上皮細(xì)胞中,，DIO2的蛋白水平顯著降低（P<0.05）?；颊吆驼φ战M之間DIO3的mRNA和蛋白表達(dá)水平?jīng)]有差異,。這些結(jié)果提示，THRA1,、THRA2,、DIO2和DIO3的表達(dá)變化可以導(dǎo)致異位內(nèi)膜組織中T3的生成減少，對T3的核作用產(chǎn)生抵抗,，并使T4在局部積累,。在體外培養(yǎng)的異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞的培養(yǎng)上清中，也檢測到T3生成減少而T4生成增加（圖1-3）,。

   TG是一種糖蛋白,，是合成T3和T4的底物，在正常的子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)[22],，在子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜和病變組織中,，TG的表達(dá)水平?jīng)]有變化。MCT8是將T3和T4轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,，在子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜中表達(dá)水平降低,，與異位內(nèi)膜和正常對照組相比，分別降低2.3倍和2倍（P<0.01）,。

子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜中甲狀腺激素信號(hào)轉(zhuǎn)錄本和甲狀腺激素代謝相關(guān)的轉(zhuǎn)錄本和蛋白表達(dá)異常,。在SI附錄S1中總結(jié)了用于qRT-PCR分析的活檢患者的臨床特征,。我們證實(shí)TSHR、THRA1,、THRA2,、THRB和THRB1在信使RNA(MRNA)和蛋白水平^(19、22)在人子宮內(nèi)膜中表達(dá),。與對照組相比,，異位內(nèi)膜組織中TSHR的表達(dá)平均增加了2.5倍(P<0.001)，THRA2的表達(dá)平均增加了3.3倍(P<0.01),。這些轉(zhuǎn)錄本在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜與對照內(nèi)膜無差異(圖1，1),。與無子宮內(nèi)膜異位癥婦女的子宮內(nèi)膜相比,，異位內(nèi)膜中LHRa（LHCGR亞型a）、LHRb,、LHRc和LHRd的表達(dá)分別增加了8.2倍（P<0.01）,、52.7倍（P<0.01）、19.2倍（P<0.01）和11.8倍（P<0.01）（SI附錄,，S2）,。Western blot分析證實(shí)了qRT-PCR結(jié)果，TSHR(P<0.05)和THRA2(P<0.05)蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜中的表達(dá)明顯高于無內(nèi)異癥患者的異位內(nèi)膜(圖1,，2),。THRA2編碼一種截短的甲狀腺受體亞型，因此不能結(jié)合三碘甲狀腺原氨酸(T3),，并作為T3⁽²³⁾轉(zhuǎn)錄活性的競爭性抑制劑,。DIO2是一種酶，負(fù)責(zé)將原甲狀腺素（T4）脫碘成生物活性T3,而DIO3負(fù)責(zé)將T4和T3脫碘成T3和T4的兩種非活性代謝物三碘甲狀腺原氨酸(Triiodothronine Inverse)和二碘甲狀腺原氨酸(Diiodothronine),。結(jié)果發(fā)現(xiàn),，異位內(nèi)膜組異位內(nèi)膜(P<0.01)和在位內(nèi)膜(P<0.05)中DIO2的表達(dá)分別為對照組的31.2倍和21.3倍。Western blot分析證實(shí)了這種表達(dá)的降低,，尤其是異位病變的上皮細(xì)胞與對照組相比有顯著性（P<0.05）（圖1,、2）；同時(shí),，在qRT-PCR和Western-blot分析中,，DIO3的表達(dá)沒有差異?？傊?，THRA1、THRA2,、DIO2和DIO3的mRNA表達(dá)表明子宮內(nèi)膜異位活檢的異位內(nèi)膜可能顯示出T3的生成減少,，并且可能對T3的核作用產(chǎn)生抵抗，同時(shí)局部積聚T4。與對照子宮內(nèi)膜細(xì)胞(SI Appendex,，S3)相比,，異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞在體外產(chǎn)生的T3減少而T4增加，證實(shí)了這一假說(SIAppendex,，S3),。甲狀腺球蛋白（TG）是一種糖蛋白，作為合成T3和T4的底物,，如前所述,，在正常子宮內(nèi)膜中表達(dá)，但在子宮內(nèi)膜異位癥婦女的子宮內(nèi)膜和病變中也有相同水平的表達(dá),。MCT8是T3和T4的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,，它允許這些激素進(jìn)入細(xì)胞。子宮內(nèi)膜異位癥患者在位子宮內(nèi)膜中MCT8的表達(dá)與異位子宮內(nèi)膜和對照子宮內(nèi)膜相比分別降低了2.3倍和2倍（P<0.01）（圖1）,。

圖1 子宮內(nèi)膜異位癥患者在位和異位內(nèi)膜中甲狀腺激素信號(hào)和代謝相關(guān)的轉(zhuǎn)錄本和蛋白表達(dá)異常,。(A)用qRTPCR方法定量檢測非子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜TSHR、THRA1,、THRA2,、THRB、THRB1,、DIO-2,、DIO3、TG和MCT8的相對轉(zhuǎn)錄水平,。表達(dá)水平以任意單位(A.U. ±SEM)表示,。顯示P值(Kruskal-Wallis和Dunn，s Post hoc檢驗(yàn)),。(B,，a-f)TSHR、THRA1,、THRA2,、THRB1、DIO2和DIO3蛋白的表達(dá)水平采用Westernblot方法檢測來自正常對照組和子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的間質(zhì)和上皮細(xì)胞的TSHR,、THRA1,、THRA2、THRB1,、DIO2和DIO3的蛋白水平,。將顯示代表性斑點(diǎn)的圖像。

ThrA_2和DIO_3是在同一印跡上測定的,，因此β-肌動(dòng)蛋白在兩種情況下是相同的,。TSHR和DIO2以及THRA1和THRB1也是如此,。圖像顯示β-肌動(dòng)蛋白±掃描電鏡的相對表達(dá)(*P<0.001.05；**P<0.0 1,；*P<0.0 1,，經(jīng)Mann-Whitney檢驗(yàn)P<0.0 5)。

1.2. TSH在體外具有促細(xì)胞增殖和促氧化作用

      以TSH（4 μg）處理細(xì)胞,，可以促使細(xì)胞增殖,，其中對照組內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖率為30.1%（P<0.0001），間質(zhì)細(xì)胞為22.9%（P<0.01）,；子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜上皮細(xì)胞為15.6%（P<0.0001）,，間質(zhì)細(xì)胞為7.80%（P<0.0001）；異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖率為12.6%（P<0.0001）,，間質(zhì)細(xì)胞為17.10%（P<0.0001）（圖2A）,。TSH促細(xì)胞增殖的作用呈劑量依賴性，而與細(xì)胞類型無關(guān),。但是TSH對不同組織誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的效應(yīng)相似，對疾病沒有影響,。同時(shí),，TSH對子宮內(nèi)膜細(xì)胞（尤其是上皮細(xì)胞）具有促氧化作用。TSH（4 μg）可分別誘導(dǎo)正常內(nèi)膜,、在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞活性氧（ROS）生成分別增加47.2%（P<0.0001）,、37.1%（P<0.0001）和27.7%（P<0.001）。TSH還可誘導(dǎo)異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的ROS生成增加38.3%（P<0.0001）,，而對正常內(nèi)膜和在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞ROS的生成沒有影響,。

在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入促甲狀腺激素(4μg)后，對照組子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖增加30.1%(P<0.0001),，間質(zhì)細(xì)胞增殖增加22.9%(P<0.01),；子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜上皮細(xì)胞增殖增加15.6%(P<0.0001)，間質(zhì)細(xì)胞增殖增加7.80%(P<0.0001)（圖2A）,。對于子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位內(nèi)膜,，促甲狀腺激素使上皮細(xì)胞增殖增加12.6%(P<0.0001)，間質(zhì)細(xì)胞增殖增加17.10%(P<0.0001),。TSH促進(jìn)細(xì)胞增殖是劑量依賴性的,，與細(xì)胞類型無關(guān)(圖2A)。但TSH在不同組織中誘導(dǎo)的增殖率相似,，對疾病無影響,。有趣的是，TSH對子宮內(nèi)膜細(xì)胞,，特別是上皮細(xì)胞也有促氧化作用(圖2B),。與未刺激的上皮細(xì)胞相比,，促性腺激素(4μg) 可誘導(dǎo)正常子宮內(nèi)膜（P<0.0001）、在位子宮內(nèi)膜（P<0.0001）和異位內(nèi)膜（P<0.001）的上皮細(xì)胞活性氧（ROS）生成分別增加47.2%,、37.1%和27.7%,。4μg促甲狀腺素可使異位間質(zhì)細(xì)胞ROS生成增加38.3%(P<0.0001)，而對照組和在位間質(zhì)細(xì)胞未見明顯的ROS增加,。

甲狀腺激素T3和T4在體外促進(jìn)異位內(nèi)膜細(xì)胞增殖和ROS的產(chǎn)生

  與未刺激細(xì)胞相比,，T4（100nM）可使異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞的增殖率為19.1%（P<0.001），間質(zhì)細(xì)胞為16.4%（P<0.01）,。但是T4對正常內(nèi)膜和內(nèi)位內(nèi)膜的上皮細(xì)胞,、間質(zhì)細(xì)胞的增殖沒有影響。T4（100nM）同時(shí)還可使異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的ROS生成分別增加21.9%（P<0.0001）和23.8%（P<0.01）,。T3（100nM）可使異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞的增殖率增加23.2%（P<0.0001）,，也可使所有上皮細(xì)胞的ROS生成增加。T3對不同細(xì)胞ROS生成的影響分別為：異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞19.6%（P<0.001）,、正常內(nèi)膜上皮細(xì)胞34.1%（P<0.05）,、在位內(nèi)膜上皮細(xì)胞38.6%（P<0.01）和異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞19.8%（P<0.01）。

圖2 用促甲狀腺激素和甲狀腺激素T3和T4培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜和異位內(nèi)膜細(xì)胞的ROS產(chǎn)生和細(xì)胞增殖,。經(jīng)不同劑量的TSH(A,、B)、T3(C,、D),、T4(E、F)處理后,，無病婦女在位內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的細(xì)胞增殖(A,、C、E)和ROS產(chǎn)生(B,、D,、F)。結(jié)果用均值±掃描電子顯微鏡表示,。**P<0.001,；*P<0.001；*P<0.0001,。子宮內(nèi)膜,。

1.3. 在毒性甲狀腺炎小鼠模型中，子宮內(nèi)膜異位植入物減少

   我們發(fā)現(xiàn)TSHR在異位子宮內(nèi)膜中的表達(dá)上調(diào),，TSH對子宮內(nèi)膜細(xì)胞具有促增殖和促氧化作用,。因此，我們首先探討了甲狀腺炎導(dǎo)致的TSH增多是否與子宮內(nèi)膜異位種植體的生長增加有關(guān),。本研究采用甲硫咪唑（MMI）處理誘導(dǎo)產(chǎn)生的毒性甲狀腺功能減退的小鼠模型,，通過子宮角手術(shù)植入誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥（圖3A）,。甲狀腺切片的組織學(xué)檢查顯示MMI治療小鼠的甲狀腺細(xì)胞肥大（圖3B和C），處理組小鼠的甲狀腺細(xì)胞面積/卵泡面積比值顯著增加（P<0.0001）（圖3D）,。與對照組相比,，處理組小鼠的T3和T4激素水平顯著降低[T3:4.79vs 0.85 pg/mL（P<0.0001），T4:30.79vs 0.53 pg/mL（P<0.0001）]（圖3E）,。這與垂體-下丘腦反饋和甲狀腺激素水平的降低相一致,，與對照組小鼠相比，處理組小鼠的促甲狀腺激素顯著增加[53643vs.639pg/mL（P<0.05）]（圖3F）,。處理8周后,，小鼠子宮內(nèi)膜異位癥誘導(dǎo)成功。在誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥21天后,，MMI組小鼠子宮內(nèi)膜異位植入物的體積比對照組小1.9倍(P<0.05),，重量比對照組輕1.8倍(P<0.05)(圖4A和圖4B)。這一結(jié)果并不支持促甲狀腺激素對子宮內(nèi)膜異位癥種植體的營養(yǎng)作用,，但也揭示了甲狀腺激素在子宮內(nèi)膜異位癥疾病演變中可能發(fā)揮作用,。

1.4. 子宮內(nèi)膜異位植入物在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎小鼠模型中的增殖

   為了研究甲狀腺激素在體內(nèi)子宮內(nèi)膜異位癥演變中的潛在作用，我們使用了伴隨有實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)的子宮內(nèi)膜異位癥小鼠模型(圖3G),。免疫小鼠甲狀腺切片顯示單核細(xì)胞浸潤（P<0.001）（圖3H,、I和K）。如圖3J所示,，免疫誘導(dǎo)處理組小鼠產(chǎn)生大量抗TG抗體，而對照組小鼠未檢測到此類抗體(P<0.0001),。免疫誘導(dǎo)后第21天,，免疫小鼠T3和T4水平顯著高于對照組(T3是對照組的1.5倍，P<0.001,；T4是對照組的1.4倍,，P<0.01)(圖3L和M)。但是這些增長僅僅是瞬時(shí)性的,，到第35天時(shí),，兩組之間T3、T4水平?jīng)]有任何差異,。正如預(yù)期的那樣,，治療組小鼠的TSH明顯低于對照組[57.0pg/mL比201pg/mL(第35天時(shí)P<0.05)](圖3n)。在第35天死亡時(shí),，豬甲狀腺球蛋白免疫的小鼠子宮內(nèi)膜異位植入物體積明顯大于對照組[58.2mm³vs 29.8mm³(P<0.0001)],，重量也更大[52.3mg vs 29.7mg (P<0.01)](圖4C，D,，G和H),，并且種植體的大小與T3和T4濃度呈正相關(guān)(P<0.05)(圖4I和J),。這些結(jié)果提示甲狀腺激素能促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位植入物的生長。然而,，我們不能排除甲狀腺自身免疫,，更確切地說，是抗TG抗體在子宮內(nèi)膜異位病變發(fā)生中的潛在作用,。

圖3 甲狀腺炎合并子宮內(nèi)膜異位癥的三種小鼠模型的描述和驗(yàn)證,。合并子宮內(nèi)膜異位癥的三種模型分別為中毒性甲狀腺功能減退癥(Hypo)(A-F)、自身免疫性甲狀腺炎(G-N)和甲狀腺功能正常的TG免疫(O-U),。(A,，G和O)毒性甲狀腺功能減退(A，C57BL6小鼠),，自身免疫性甲狀腺炎(B,，CBA小鼠)和甲狀腺功能正常(O，BALB/c小鼠)甘油三酯免疫的實(shí)驗(yàn)裝置,，所有這些都與子宮內(nèi)膜異位癥模型相結(jié)合(詳細(xì)信息提供在材料和方法中),。組織切片HE染色顯示對照組(B、H,、P)和hTg免疫小鼠(Q)甲狀腺細(xì)胞正常,，甲狀腺功能減退模型(B)甲狀腺細(xì)胞肥大，自身免疫性甲狀腺炎(I)小鼠有單個(gè)核細(xì)胞浸潤,，甲狀腺組織學(xué)染色可見正常小鼠(B,、H、P)和hTg免疫組(Q)小鼠甲狀腺細(xì)胞正常,，甲狀腺功能減退模型(B)甲狀腺細(xì)胞肥大,，自身免疫性甲狀腺炎小鼠(I)有單個(gè)核細(xì)胞浸潤。(D)甲狀腺形態(tài)學(xué)參數(shù)：甲狀腺細(xì)胞面積與濾泡面積之比,。用ELISA(J)和甲狀腺浸潤評(píng)分(K)檢測血清TG Ab,，表明PTG免疫小鼠有甲狀腺炎的特征。(R)ELISA檢測血清TG Ab,，顯示hTg免疫小鼠產(chǎn)生較高水平的抗體,。血清T3、T4濃度(E,、L,、M、S,、T)和促甲狀腺激素血清濃度(F,、N、U)分別為甲減(E,、F),、一過性甲亢(L,、M、N)和甲亢(**P<0.001,；*P<0.001,；*P<0.0001)。

 圖4 甲狀腺炎對子宮內(nèi)膜異位癥演變的影響,。C57BL/6小鼠(A和B,，甲狀腺功能減退模型)，CBA小鼠(C和D,，自身免疫性甲狀腺炎模型),，BALB/c小鼠(E和F，hTG免疫模型)的子宮內(nèi)膜異位植入物的大小和重量,。在自身免疫性甲狀腺炎模型中,，植入物的大小與血清T3濃度(I)和T4濃度(J)相關(guān)(Spearman相關(guān))。顯示了自身免疫性甲狀腺炎小鼠(G)和對照小鼠(H)子宮內(nèi)膜異位植入物的超聲圖像,。(*P<0.0001.0 5,；**P<0.0 1；*P<0.0 1,，經(jīng)Mann-Whitney檢驗(yàn)P<0.0 5),。NS，不重要,。

1.4.  甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)癥TG免疫小鼠模型中子宮內(nèi)膜異位種植體生長未見增加

   為了闡明抗TG-Abs的作用,，使用了第三種小鼠模型^（24），該模型采用人甲狀腺球蛋白（hTg）免疫BALB/c小鼠（圖3O）,。此模型與甲狀腺浸潤和甲狀腺破壞無關(guān)(圖3P和Q),，但在免疫小鼠中可產(chǎn)生高水平的抗TG-Abs，在對照小鼠中則未檢測到（P<0.01）（圖3R）,。免疫小鼠和對照小鼠的T3、T4和TSH水平?jīng)]有顯著差異(圖3S-U),。因此,，該模型使我們能夠特異性地研究抗TG抗體在子宮內(nèi)膜異位植入物進(jìn)化中的作用。有趣的是,，在死亡時(shí),，免疫組和對照組的植入物大小沒有差異(圖4E)，但免疫組的植入物略輕于對照組[分別為40.4mg和61.84mg(P<0.05)](圖4F),。因此,，甲狀腺自身免疫和抗TG抗體不能誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜異位植入物生長增加。

1.5. 甲狀腺功能不全對人子宮內(nèi)膜異位癥嚴(yán)重程度的影響

  為了支持我們的體外和體內(nèi)研究結(jié)果,，我們探討了甲狀腺疾病和子宮內(nèi)膜異位癥在患病率和臨床特征方面的關(guān)系,。首先,，子宮內(nèi)膜異位癥患者的甲狀腺疾病患病率并不高于一般育齡女性人群，甲狀腺功能障礙患者的子宮內(nèi)膜異位癥患病率也不高于一般育齡女性人群,。而伴有甲狀腺功能障礙的子宮內(nèi)膜異位癥患者的慢性盆腔疼痛明顯多于無甲狀腺功能障礙的子宮內(nèi)膜異位癥患者(P=0.006),。這一結(jié)果在兩個(gè)獨(dú)立的患者隊(duì)列中被發(fā)現(xiàn)（表1和SI附錄，S6）,。此外,，在婦科接受手術(shù)的隊(duì)列中，患有甲狀腺疾病的患者的美國生殖醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)嚴(yán)重程度評(píng)分高(P=0.008)于僅患有子宮內(nèi)膜異位癥的患者,。在這兩個(gè)隊(duì)列中,，甲狀腺疾病患者有更多的深層浸潤性病變的趨勢(P=0.078)。

討論

子宮內(nèi)膜異位癥是一種常見的婦科疾病,，其病理生理機(jī)制尚不清楚⁽¹⁾,。幾位作者強(qiáng)調(diào)了甲狀腺功能障礙和子宮內(nèi)膜異位癥之間的聯(lián)系，暗示了這兩種病理之間的潛在聯(lián)系^{(11-13,，25)},。AITD多年來一直與子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)性不孕癥有關(guān)⁽²⁵⁾，但據(jù)我們所知,，甲狀腺功能障礙在子宮內(nèi)膜異位癥演變中的作用機(jī)制尚未闡明,。在這項(xiàng)研究中，我們報(bào)告了甲狀腺激素,、TSHR和甲狀腺激素代謝酶在健康女性子宮內(nèi)膜中的表達(dá),。我們的結(jié)果證實(shí)了Aghajanova等人⁽¹⁹⁾ 和Catalano等人⁽²²⁾的結(jié)論，他們發(fā)現(xiàn)所有與甲狀腺素合成和激活有關(guān)的轉(zhuǎn)錄本都在子宮內(nèi)膜中表達(dá),。后者還報(bào)告了這些轉(zhuǎn)錄本與米非司酮攝入量之間的相關(guān)性,，米非司酮是一種黃體酮拮抗劑⁽²²⁾。由于孕酮抵抗是子宮內(nèi)膜異位癥的一個(gè)特征,，因此可以假設(shè)子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜中的孕酮抵抗可能與患者甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子的失調(diào)有關(guān),。此外，Aghajanova和Giudice^（26）還比較了輕度和重度子宮內(nèi)膜異位癥的微陣列分析,，并報(bào)道了甲狀腺激素穩(wěn)態(tài)和代謝在子宮內(nèi)膜異位癥病理生理學(xué)中的潛在作用,。我們的結(jié)果證實(shí)了這個(gè)假設(shè)。我們發(fā)現(xiàn)TSHR在異位子宮內(nèi)膜中過度表達(dá),，因此對TSH的變化很敏感,。我們還觀察到異位內(nèi)膜中THRA2轉(zhuǎn)錄本和蛋白的表達(dá)增加。THRA2編碼一種不能結(jié)合T3的核受體,，并作為T3轉(zhuǎn)錄活性的競爭性抑制因子⁽²³⁾,。因此，THRA2的增加可能導(dǎo)致異位內(nèi)膜對T3核作用的抵抗。此外,，催化T4轉(zhuǎn)化為生物活性T3的DIO2的減少可能導(dǎo)致T4在異位子宮內(nèi)膜中的積聚,。這些結(jié)果表明，與子宮內(nèi)膜對照細(xì)胞相比,，異位內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)上清液中T3的生物合成減少,，T4在異位內(nèi)膜中的原位蓄積，提示甲狀腺代謝發(fā)生了深刻的改變,。

ASRM,，美國生殖醫(yī)學(xué)會(huì)；BMI,，體重指數(shù),；Endo，子宮內(nèi)膜異位癥,；EndoOnly,，無甲狀腺功能障礙的EndoOnly；EndoThyro,，Endo+甲狀腺功能障礙,；SUP，淺表子宮內(nèi)膜異位癥,；OMA,，子宮內(nèi)膜異位癥；DIE,，深度浸潤性子宮內(nèi)膜異位癥,；VAS，視覺模擬評(píng)分,。重要的P值以粗體顯示,。*患者隊(duì)列：輔助生殖科225人，婦科314人,。?患者隊(duì)列：輔助生殖科18例,，婦科14例。?僅限婦科患者使用,?！霢SRM總分是根據(jù)ASRM分類(修訂的美國生育協(xié)會(huì)分類，1997)的分?jǐn)?shù),。

     我們的結(jié)果與Catalano等人的結(jié)果不同⁽²²⁾。因?yàn)樗麄儼l(fā)現(xiàn)服用米非司酮后,，DIO2表達(dá)和THRB增加,，而THRA1/2降低，這意味著甲狀腺相關(guān)基因在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)不僅受孕酮的調(diào)節(jié)。根據(jù)對子宮內(nèi)膜異位癥患者甲狀腺轉(zhuǎn)錄物的體外研究,，TSH(甲狀腺功能減退癥)或甲狀腺激素T4(甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)癥或T4攝入量)的增加可能是子宮內(nèi)膜異位癥加重的參與因素,。有趣的是，在沒有機(jī)械證據(jù)的情況下,，已經(jīng)證明甲狀腺激素,，尤其是T4與息肉的加重有關(guān)⁽²⁷⁾。甲狀腺激素和雌激素之間的相互作用被認(rèn)為是甲狀腺激素直接刺激子宮內(nèi)膜細(xì)胞上的雌激素受體,，導(dǎo)致細(xì)胞增殖^（28）,。T4的作用可能會(huì)被低估，因?yàn)楫?dāng)它沒有被催化成T3(甲狀腺激素的生物活性形式)時(shí),，它是無效的,。然而，質(zhì)膜上的受體,，如整合素αVβ3,，以及細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器膜上的受體^（29）可以直接與T4（和T3）結(jié)合。

  甲狀腺激素的這些非基因組作用不同于經(jīng)典的甲狀腺激素信號(hào)通路,，涉及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)或有絲分裂原激活的蛋白激酶通路^(29,，30)。因此,，T3和T4能夠通過細(xì)胞外信號(hào)相關(guān)激酶(ERK)和PI3K/Akt激活^{(28,，31-34)}誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和新生血管生成，這是子宮內(nèi)膜異位癥病理生理的兩個(gè)特征,。因此,，我們進(jìn)行了體外研究，以探討TSH,、T3和T4對子宮內(nèi)膜異位癥患者和對照組子宮內(nèi)膜和異位內(nèi)膜細(xì)胞的作用,。我們證明TSH能激活所有子宮內(nèi)膜異位內(nèi)膜細(xì)胞和對照細(xì)胞的增殖，而T4對上皮和間質(zhì)異位內(nèi)膜細(xì)胞有特異性的增殖作用,，而T3只作用于上皮細(xì)胞,。此外，甲狀腺激素促進(jìn)異位內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生ROS,。除了參與子宮內(nèi)膜異位癥特有的炎癥反應(yīng)外,，Ng?等人^（35）還表明，子宮內(nèi)膜異位細(xì)胞產(chǎn)生的ROS通過直接或旁分泌效應(yīng)激活ERK來誘導(dǎo)其增殖,。我們的研究局限于獲得樣本的患者（嚴(yán)重程度和類型,，治療）的qRT PCR和體外數(shù)據(jù)。然而,，通過對子宮內(nèi)膜異位癥患者和來自其他患者的對照子宮內(nèi)膜細(xì)胞系樣本的Western blot分析,，我們的數(shù)據(jù)更加有力,。

  然后在三種小鼠模型中評(píng)估甲狀腺功能對子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生的影響。這些模型使我們能夠研究甲狀腺功能減退,、甲亢和甲亢以及甲狀腺自身免疫對子宮內(nèi)膜異位癥演變的影響,。子宮內(nèi)膜異位癥是一種炎癥性疾病^(1，2,，6),，其特征是異位內(nèi)膜有重要的白細(xì)胞浸潤^(36，37),。子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞中存在高水平的甲狀腺抗原,，如甘油三酯(TG)、甲狀腺激素或促甲狀腺激素受體(TSHR),，可能有利于子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞在免疫刺激環(huán)境中暴露于免疫系統(tǒng),，從而引發(fā)對甲狀腺自身抗原的耐受破壞和自身免疫反應(yīng)。另一方面,，甲狀腺激素的局部合成可以激活中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,，在局部促進(jìn)促炎環(huán)境^(38，39)和ROS的產(chǎn)生,，這可能有利于子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞的增殖⁽⁴⁰⁾,。由于這些原因，我們的子宮內(nèi)膜異位癥模型是自體子宮角移植模型,，它保持了小鼠的免疫活性⁽⁴¹⁾,。我們的子宮內(nèi)膜異位癥模型進(jìn)一步與甲狀腺功能減退模型(40例)、自身免疫性甲狀腺炎合并甲狀腺功能亢進(jìn)癥(42例)和自身免疫性甲狀腺疾病合并甲狀腺功能正常(24例)相結(jié)合,。我們的甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)癥模型是自身免疫性甲狀腺炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，模仿橋本氏病，已知?huì)導(dǎo)致甲狀腺功能減退⁽⁴²⁾,。

  然而,，在這種疾病的第一階段，甲狀腺被大量單個(gè)核細(xì)胞浸潤破壞,，導(dǎo)致過渡性甲狀腺機(jī)能亢進(jìn),，甲狀腺激素增加，促甲狀腺激素(TSH)下降(42),。因此,，在這個(gè)早期階段，這個(gè)模型允許我們研究免疫小鼠中存在抗TG抗體的情況下的甲狀腺自身免疫,，以及甲狀腺激素的增加,。由于子宮內(nèi)膜異位植入物在甲狀腺功能亢進(jìn)時(shí)較大，在甲狀腺功能減退時(shí)較小,，甲狀腺自身免疫功能正常時(shí)稍小,，提示可能是甲狀腺激素而不是TSH參與了子宮內(nèi)膜異位癥病變的生長,。甲狀腺功能障礙通常與子宮內(nèi)膜異位癥患者的自身免疫有關(guān)^(12，25),。使用的小鼠模型中有兩種與抗TG產(chǎn)生相關(guān)，但只有一種與疾病進(jìn)展有關(guān),，這表明抗TG抗體對子宮內(nèi)膜異位癥病變的生長不起作用,。這些結(jié)果并不完全排除抗體對其他甲狀腺抗原的作用，如抗甲狀腺過氧化物酶抗體,，這些抗原在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的患病率大大增加⁽¹²⁾,。為了評(píng)估我們的結(jié)果是否可以應(yīng)用于人類，我們對獲得了大量臨床數(shù)據(jù)的子宮內(nèi)膜異位癥患者進(jìn)行了回顧性分析,。我們發(fā)現(xiàn),，患有甲狀腺疾病的子宮內(nèi)膜異位癥患者比無甲狀腺功能障礙的患者表現(xiàn)出更多的慢性盆腔疼痛，并有更高的臨床評(píng)分,。伴有甲狀腺功能障礙的子宮內(nèi)膜異位癥患者大多患有橋本甲狀腺炎,，并給予相應(yīng)的T4補(bǔ)充治療。根據(jù)我們在橋本甲狀腺炎小鼠模型中獲得的數(shù)據(jù),，其他情況(治療,、甲狀腺功能亢進(jìn)在甲狀腺功能減退之前)可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展和/或進(jìn)展。在我們的隊(duì)列中,，只有橋本甲狀腺炎與子宮內(nèi)膜異位癥有關(guān),，但其他人已經(jīng)描述了與格雷夫病有關(guān)⁽¹³⁾。激活抗TSHR抗體是格雷夫病的病因?qū)W標(biāo)志⁽⁴³⁾,?？紤]到我們的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們可以推測,，激活抗TSHR抗體可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞的增殖和ROS的產(chǎn)生,，從而加重了子宮內(nèi)膜異位癥。此外,，Grave病是一種甲狀腺功能亢進(jìn)癥,，其中T3和T4激素升高，因此我們可以推測Grave病可能是子宮內(nèi)膜異位癥的危險(xiǎn)因素和/或可能與疾病的加重有關(guān),。綜上所述,，如果雌激素和孕激素抵抗的異位產(chǎn)生在病變生長中起關(guān)鍵作用，我們在此證明了子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞甲狀腺激素代謝功能紊亂的影響,，以及在體外和體內(nèi)相關(guān)小鼠模型中對子宮內(nèi)膜異位癥進(jìn)展的影響,。由于橋本甲狀腺炎患者的子宮內(nèi)膜異位癥更為嚴(yán)重，應(yīng)仔細(xì)監(jiān)測這些患者的甲狀腺功能,、T4/左旋甲狀腺素?cái)z入量以及子宮內(nèi)膜異位癥的進(jìn)展情況,。

材料與方法收集患者及組織標(biāo)本

  這項(xiàng)研究得到了當(dāng)?shù)貦C(jī)構(gòu)審查委員會(huì)的批準(zhǔn)(第05-2006號(hào)批準(zhǔn),，由巴黎科欽的人與生物保護(hù)與重建委員會(huì)提供)，所有參與者都給予了書面知情同意書(第05-2006號(hào)批準(zhǔn)書,，由巴黎科欽的Comitéde Protection des Personnes et des Biens dans la Recherche Biomédicale提供),。入選標(biāo)準(zhǔn)在SI附錄S7中提供。使用標(biāo)準(zhǔn)化問卷收集患者的基本臨床特征,。子宮內(nèi)膜異位癥根據(jù)修訂后的美國生育協(xié)會(huì)分類進(jìn)行分類和評(píng)分(44),。根據(jù)腹盆腔的徹底手術(shù)檢查，對照組患者表現(xiàn)為非子宮內(nèi)膜異位癥卵巢囊腫,、輸卵管性不孕或子宮肌瘤,，并且沒有肉眼可見的子宮內(nèi)膜異位病變。子宮內(nèi)膜異位癥患者提供在位和異位子宮內(nèi)膜,，對照組提供在位子宮內(nèi)膜,。

實(shí)時(shí)熒光RT-PCR

  手術(shù)切除子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織11例，在位內(nèi)膜組織11例,，11例對照子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本立即冷凍于液氮中,，采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(SI附錄、S8和S9)進(jìn)行qRT-PCR,。

子宮內(nèi)膜異位癥細(xì)胞的分離和培養(yǎng)

  取自8名無疾病婦女在位內(nèi)膜活檢組織(對照子宮內(nèi)膜細(xì)胞),，獲得8個(gè)原代細(xì)胞系。15例子宮內(nèi)膜異位癥患者提供了子宮內(nèi)膜和(或)異位內(nèi)膜活檢組織：9個(gè)原代細(xì)胞系取自在位內(nèi)膜,，11個(gè)原代細(xì)胞系取自異位內(nèi)膜活檢組織(異位內(nèi)膜細(xì)胞),。細(xì)胞取自子宮內(nèi)膜，子宮內(nèi)膜異位活檢組織和原代子宮內(nèi)膜和子宮內(nèi)膜異位細(xì)胞培養(yǎng)如上文所述(35),，所有的各種試驗(yàn)都進(jìn)行了一式三份,。樣品采集后7~14d進(jìn)行原代培養(yǎng)試驗(yàn)。

Western Blot分析

  用Western blot(SI附錄,，S10)檢測TSHR,、THRA1、THRA2,、THRB1,、DIO2和Dio3在至少4個(gè)無子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜上皮和間質(zhì)原代細(xì)胞系以及4個(gè)子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜和異位內(nèi)膜上皮和間質(zhì)細(xì)胞系中的表達(dá)。

活性氧產(chǎn)生與子宮內(nèi)膜及異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞體外增殖測定,。用2′,，7′-二氯二氫熒光素二乙酸酯熒光法測定ROS的產(chǎn)生。采用UptiBlue增殖試驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖情況,。用0,、0.5、1,、2或4μg/mL重組人促甲狀腺激素(0.9mgTh,；Genzyme),；0、10,、5 0或100 nM T4(Sigma-Aldrich),；或0、10,、50或10 0 nM T3(Sigma-Aldrich)處理細(xì)胞,。SI附錄、S11和S12提供了更多詳細(xì)信息,。

甲狀腺炎和子宮內(nèi)膜異位癥的動(dòng)物模型

  6周齡C57BL/6、CBA/J和BALB/c雌性小鼠購自Janvier實(shí)驗(yàn)室,。巴黎笛卡爾大學(xué)的機(jī)構(gòu)審查委員會(huì)批準(zhǔn)了所有實(shí)驗(yàn)程序和動(dòng)物護(hù)理(許可證編號(hào)2016040716219897),。建立了MMI和高氯酸鉀誘導(dǎo)的小鼠中毒性甲狀腺功能減退模型(40只)、PTG免疫誘導(dǎo)的EAT模型(42只)和HTG免疫誘導(dǎo)的甲狀腺功能亢進(jìn)癥模型(24只),。每個(gè)甲狀腺疾病模型與免疫活性小鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型相結(jié)合,，通過子宮角同種異體移植產(chǎn)生類似子宮內(nèi)膜異位癥的模型(41)(SI附錄，S13和S14),。

篩選小鼠血清進(jìn)行抗TG,、Auto-Ab和甲狀腺功能試驗(yàn)，詳情見SI附錄S15-S17,。

甲狀腺疾病與子宮內(nèi)膜異位癥關(guān)系的臨床研究,，詳細(xì)信息見SI附錄、S18和S19,。

統(tǒng)計(jì)分析：所有的統(tǒng)計(jì)和圖形都是使用Graph Pad Prism 6進(jìn)行的,，更詳細(xì)地出現(xiàn)在SI附錄S20中。在所有的圖中,，誤差條代表SEM,。P<0.001；*P<0.0001,；**P<0.05,；**P<0.01；*P<0.01,；*P<0.0001,，差異均有顯著性(*P<0.05；**P<0.01,；*P<0.05),。

致謝這項(xiàng)工作得到了巴黎笛卡爾大學(xué)、INSERM和Médicale基金會(huì)的資助,。

參考文獻(xiàn)

1. S. E. Bulun Endometriosis. N.Engl. J. Med. 360, 268–279 (2009).

2. L. C. Giudice, L. C. Kao,Endometriosis. Lancet 364, 1789–1799 (2004).

3. D. de Ziegler, B. Borghese, C.Chapron, Endometriosis and infertility: Pathophysiology and management. Lancet376, 730–738 (2010).

4. C. Chapron et al., Deeplyinfiltrating endometriosis: Pathogenetic implications of the anatomicaldistribution. Hum. Reprod. 21, 1839–1845 (2006).

5. J. A. Sampson, Peritonealendometriosis due to the menstrual dissemination of endometrial tissue into theperitoneal cavity. Am. J. Obstet. Gynecol. 14, 422–469 (1927).

6. S. H. Ahn et al.,Pathophysiology and immune dysfunction in endometriosis. BioMed Res. Int. 2015,e795976 (2015).

7. R.O. Burney,L.C.Giudice,Pathogenesisandpathophysiologyofendometriosis.Fertil. Steril. 98,511–519 (2012).

8. V. H. Eisenberg, M. Zolti, D.Soriano, Is there an association between autoimmunity and endometriosis?Autoimmun. Rev. 11, 806–814 (2012).

9. P. V. Taylor et al.,Autoreactivity in women with endometriosis. Br. J. Obstet. Gynaecol. 98,680–684 (1991).

10. H. Hatayama et al., Detectionof antiendometrial antibodies in patients with endometriosis by cell ELISA. Am.J. Reprod. Immunol. 35, 118–122 (1996).

11. N. Sinaii, S. D. Cleary, M. L.Ballweg, L. K. Nieman, P. Stratton, High rates of autoimmune and endocrinedisorders, fibromyalgia, chronic fatigue syndrome and atopic diseases amongwomen with endometriosis: A survey analysis. Hum. Reprod. 17, 2715–2724 (2002).

12. K. Poppe et al., Thyroiddysfunction and autoimmunity in infertile women. Thyroid 12, 997–1001 (2002).

13. J.-S. Yuk et al., Gravesdisease is associated with endometriosis: A 3-year populationbasedcross-sectional study. Medicine (Baltimore) 95, e2975 (2016).

14. E. Fr?hlich, R. Wahl, Thyroidautoimmunity: Role of anti-thyroid antibodies in thyroid and extra-thyroidaldiseases. Front. Immunol. 8, 521 (2017).

15. J. Orgiazzi, Thyroidautoimmunity. Presse Med. 41, e611–e625 (2012).

16. G. Stassi, R. De Maria,Autoimmune thyroid disease: New models of cell death in autoimmunity. Nat. Rev.Immunol. 2, 195–204 (2002).

17. K. Poppe, B. Velkeniers, D.Glinoer, Thyroid disease and female reproduction. Clin. Endocrinol. (Oxf.) 66,309–321 (2007).

18. L. Aghajanova et al., Receptorsfor thyroid-stimulating hormone and thyroid hormones in human ovarian tissue.Reprod. Biomed. Online 18, 337–347 (2009).

19. L. Aghajanova et al.,Thyroid-stimulating hormone receptor and thyroid hormone receptors are involvedin human endometrial physiology. Fertil. Steril. 95, 230–237, 237.e1–237.e2(2011).

20. K. G. Michalakis et al.,Subclinical elevations of thyroid-stimulating hormone and assisted reproductivetechnology outcomes. Fertil. Steril. 95, 2634–2637 (2011).

21. S. Kosugi, H. Sugawa, T. Mori,TSH receptor and LH receptor, 1996. Endocr. J. 43, 595– 604 (1996).

22. S. D. Catalano et al.,Mifepristone induced progesterone withdrawal reveals novel regulatory pathwaysin human endometrium. Mol. Hum. Reprod. 13, 641–654 (2007).

23. T. M. Ortiga-Carvalho, A. R.Sidhaye, F. E. Wondisford, Thyroid hormone receptors and resistance to thyroidhormone disorders. Nat. Rev. Endocrinol. 10, 582 –591 (2014).

24. S.T. Matalon etal.,Thepathogenicroleof anti-thyroglobulin antibody onpregnancy: Evidence from anactive immunization model in mice. Hum. Reprod. 18, 1094–1099 (2003).

25. K. Poppe, B. Velkeniers, Femaleinfertility and the thyroid. Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab. 18,153–165 (2004).

26. L. Aghajanova, L. C. Giudice,Molecular evidence for differences in endometrium in severe versus mildendometriosis. Reprod. Sci. 18, 229–251 (2011).

27. C. Saccardi et al., Endometrialpolyps in women affected by levothyroxine-treated hypothyroidism—Histologicalfeatures, immunohistochemical findings, and possibleexplanationofetiopathogenicmechanism:Apilot study.BiomedRes.Int. 2013,503419(2013).

28. S. A. Mousa et al., Theproangiogenic action of thyroid hormone analogue GC-1 is initiated at anintegrin. J. Cardiovasc. Pharmacol. 46, 356–360 (2005).

29. F. Flamant et al., Thyroidhormone signaling pathways: Time for a more precise nomenclature. Endocrinology158, 2052–2057 (2017).

30. M. Bhargava, J. Lei, D. H.Ingbar, Nongenomic actions of L-thyroxine and 3,5,3′triiodo-L-thyronine. Focuson “L-thyroxine vs. 3,5,3′-triiodo-L-thyronine and cell proliferation:Activation of mitogen-activated protein kinase and phosphatidylinositol3kinase”. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 296, C977–C979 (2009).

31. A.Scarlettetal.,Thyroidhormonestimulationof extracellularsignal-regulatedkinaseand cell proliferation in human osteoblast-like cells is initiated at integrinalphaVbeta3. J. Endocrinol. 196, 509–517 (2008).

32. H. Lin et al., Thyroid hormoneinduces activation of mitogen-activated protein kinase in cultured cells. Am.J. Physiol. 276, C1014–C1024 (1999).

33. J. J. Bergh et al., IntegrinalphaVbeta3 contains a cell surface receptor site for thyroid hormone that islinked to activation of mitogen-activated protein kinase and induction ofangiogenesis. Endocrinology 146, 2864–2871 (2005).

34. M. Leconte et al., The mTOR/AKTinhibitor temsirolimus prevents deep infiltrating endometriosis in mice. Am. J.Pathol. 179, 880–889 (2011).

35. C. Ng? et al., Reactive oxygenspecies controls endometriosis progression. Am. J. Pathol. 175, 225–234 (2009).

36. W. Paul Dmowski, D. P. Braun,Immunology of endometriosis. Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. 18,245–263 (2004).

37. G. Izumi et al., Involvement ofimmune cells in the pathogenesis of endometriosis. J. Obstet. Gynaecol. Res.44, 191–198 (2018).

38. P. De Vito et al., Thyroidhormones as modulators of immune activities at the cellular level. Thyroid 21,879–890 (2011).

39. A. H. van der Spek, E. Fliers,A. Boelen, Thyroid hormone metabolism in innate immune cells. J. Endocrinol.232, R67–R81 (2017).

40. J. Yi et al., Decreased painthreshold and enhanced synaptic transmission in the anterior cingulate cortexof experimental hypothyroidism mice. Mol. Pain 10, 38 (2014).

41. L. Marcellin et al., Alterationof Nrf2 and glutamate cysteine ligase expression contribute to lesions growthand fibrogenesis in ectopic endometriosis. Free Radic. Biol. Med. 110,1 –10(2017).

42. J. Charreire, Immune mechanismsin autoimmune thyroiditis. Adv. Immunol. 46, 263– 334 (1989).

43. K. Michalek, S. A. Morshed, R.Latif, T. F. Davies, TSH receptor autoantibodies. Autoimmun. Rev. 9, 113–116(2009).

44. I. A. Brosens, F. Cornillie, P.Koninckx, G. Vásquez, Evolution of the Revised American Fertility Societyclassification of endometriosis. Fertil. Steril. 44, 714–716 (1985).