高通量測序?qū)嶒炇医ㄔO按其功能可大致分為三部分：樣本準備、文庫構建,、測序分析,。各部分又因其主要工作內(nèi)容可進一步拆分為不同分區(qū)，進行單獨管理,。其后,，我們將針對不同環(huán)節(jié)的具體分區(qū)情況、區(qū)域功能,、注意事項,、配套設備等展開詳細介紹。

樣本準備區(qū)域主要包括試劑儲存和準備區(qū),、樣本前處理區(qū)和樣本制備區(qū),，本區(qū)域功能是為后續(xù)文庫構建環(huán)節(jié)提供合格的樣本材料。

本區(qū)域為潔凈區(qū)域,，區(qū)域功能為：貯存試劑的制備,、試劑的分裝、擴增反應混合液的準備以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備,。^[1]

注意事項：

a. 貯存試劑和用于標本制備的消耗品等材料應當直接運送至試劑貯存和準備區(qū),，不能經(jīng)過擴增檢測區(qū)。^[3]

b. 試劑盒中的陽性質(zhì)控品和對照品不應貯存于此區(qū)域,，應保存在樣本處理區(qū),。^[1]

儀器設備：醫(yī)用冷藏冷凍箱、超凈工作臺,、天平,、渦旋振蕩器、移液器,、純水儀,、掌上離心機和可移動紫外燈。^[2-4]

消耗品：一次性手套,、耐高壓處理的離心管和移液器槍頭,、采血管及實驗所需耗材、專用辦公消耗品,。^[2]

區(qū)域功能為：組織切片,、脫蠟、染色及血液,、尿液,、胸腹水等標本的離心、涂片,、染色等,。

體系突變檢測時，需對組織學或細胞學樣本進行病理質(zhì)控,，目的是進一步明確病變組織或細胞與病理診斷是否一致,；評估腫瘤細胞的比例是否達到檢測要求；確定腫瘤細胞位置,，富集腫瘤細胞,，避免出血、壞死,、間質(zhì)細胞影響DNA質(zhì)量,。^[5]

注意事項：

a. 有保證開展工作的空間，且不影響工作質(zhì)量,、質(zhì)量控制程序和人員安全,。該區(qū)域使用二甲苯等有毒有害物質(zhì)，需做好化學安全防護,，且配有廢液桶,，廢棄的二甲苯等化學污染物統(tǒng)一回收處理。^[5]

b. 應包括切片區(qū)和脫蠟區(qū)，其中脫蠟,、水化及染色須在通風設施中進行。^[4]

c. 血液樣本與組織樣本應分區(qū)處理,。

儀器設備：生物安全柜,、切片機、裱片機,、光學顯微鏡,、可移動紫外燈、電熱恒溫箱,、冰箱,、移液器、高速離心機,。^[4]

消耗品：一次性手套,、耐高壓處理的離心管和移液器槍頭，專用辦公消耗品,。

本區(qū)域為半污染區(qū),，區(qū)域功能為：完成新鮮組織樣本、冰凍樣本,、細胞學樣本,、FFPE樣本、外周血樣本的核酸（RNA,、DNA）提取,、定量及純度測定。^[3]

注意事項：

a. 核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,，可通過在本區(qū)內(nèi)設立正壓條件,，避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,，加入待測核酸后,，必須蓋好含反應混合液的反應管。

b. 在提取不同類型的樣本（新鮮組織,、FFPE,、血液等）核酸時應避免樣本之間的交叉污染，建議在區(qū)域內(nèi)設置不同樣本的獨立生物安全柜,。^[3]

c. 對于涉及臨床樣本的操作,，應符合生物安全二級實驗室防護設備、個人防護和操作規(guī)范的要求,。^[1]

儀器設備：醫(yī)用冷藏冷凍箱,、生物安全柜B級、冷凍高速離心機、掌上離心機,、水浴鍋,、恒溫金屬浴、核酸定量儀,、移液器（2套）,、制冰機/PCR冷凍冰盒、可移動紫外燈,、渦旋振蕩儀和磁力架/真空泵,。^[1],[3]

備注：若有自動核酸提取儀，則此區(qū)域可與文庫制備區(qū)合并,；若有樣本制備,、文庫制備及擴增檢測為一體的自動化分析儀，則此區(qū)域可與文庫制備區(qū),、擴增區(qū)合并,。^[1],[4]

消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和移液器吸頭（帶濾芯）,，專用辦公消耗品,。

參考文獻

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部． 醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法[S]. 2010-12-06.

[2] 臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準[J]. 中國臨床實驗室, 2002.

[3] 李金明.高通量測序技術[M].北京:科學出版社,2018.

[4] 分子病理診斷實驗室建設指南(試行)[J]. 中華病理學雜志, 2015, 000(006):369-371.

[5] 分子病理實驗室設計要求及體會[J]. 診斷病理學雜志, 2018, 25(11):57-58.