 在制藥企業(yè)中,，同一設(shè)備可能會用于多種產(chǎn)品的生產(chǎn)，在藥品生產(chǎn)結(jié)束后,，對生產(chǎn)用到的相關(guān)設(shè)備進行有效的清潔,，是防止藥品污染和交叉污染的必要手段。 在GMP條款中一直強調(diào)關(guān)于清潔,、防止交叉污染的的條款,，早在1963年美國頒布GMP條例（133.4）中就寫到“生產(chǎn)設(shè)備必須保持潔凈有序的狀態(tài)”。為了達到相關(guān)法規(guī)規(guī)范的要求，藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)保證產(chǎn)品的殘留可以通過一定的清潔程序從設(shè)備表面清除,，并提供書面證據(jù)證明各種污染和交叉污染已被有效防止,。 設(shè)備的清潔程序取決于殘留物的性質(zhì)、設(shè)備的結(jié)構(gòu),、材質(zhì)和清洗的方法,，對于確定的設(shè)備和產(chǎn)品，清潔效果取決于清洗的方法,，書面的,、確定的清潔方法即所謂的清潔規(guī)程。清潔工藝的運行參數(shù)包括清潔劑種類,、濃度,、接觸時間、溫度等各種參數(shù),。 在制藥工業(yè)中,，清潔的概念是指設(shè)備中各種殘留物（包括微生物及其代謝產(chǎn)物）的總量低至不影響下批產(chǎn)品的規(guī)定的療效、質(zhì)量和安全性的狀態(tài),。通過有效的清洗,，可將上批生產(chǎn)殘留在生產(chǎn)設(shè)備中的物質(zhì)減少到不會影響下批產(chǎn)品的療效、質(zhì)量和安全性的程度,。清潔驗證即對清潔規(guī)程的效力進行確認,，通過科學(xué)的方法采集足夠的證據(jù)，以證實按規(guī)定的方法清潔后的設(shè)備,，能始終如一的達到預(yù)定的清潔標準,。 通常的做法是將清潔驗證分為四個階段，方法開發(fā)階段,、方案準備階段,、方案實施階段、驗證狀態(tài)維護階段,，圖1將各個階段進行流程化,，以下分別對其進行闡述。 1.開發(fā)階段 根據(jù)產(chǎn)品性質(zhì),、設(shè)備特點,、生產(chǎn)工藝及所使用的原輔料等因素進行實驗室模擬，擬定清潔方法并制定清潔規(guī)程,，對清潔人員進行操作培訓(xùn),。 2.方案準備階段 首先應(yīng)該準備清潔驗證計劃，列出清潔驗證的設(shè)計與策略,，對生產(chǎn)設(shè)備進行詳細考察,，確定有代表性的,，難清潔的部位作為取樣點；計算設(shè)備內(nèi)表面積,，根據(jù)產(chǎn)品的相關(guān)性質(zhì)選定某種物質(zhì)作為參照物質(zhì),，確定清潔后允許的最大殘留量為合格標準，驗證中通過檢驗其含量確定設(shè)備清潔的程度,，必要時還要考察清潔劑的殘留量；根據(jù)驗證共同要求制訂并批準驗證方案,，開發(fā)驗證有關(guān)的取樣方法和檢驗方法,，以保證數(shù)據(jù)的準確性，在驗證開始前需要對有關(guān)人員進行培訓(xùn),。 3.方案實施階段 按照批準的驗證方案開展試驗獲取數(shù)據(jù),，評價結(jié)果得出結(jié)論。如驗證的結(jié)果表明清潔程序無法確保設(shè)備清潔達到預(yù)定標準,，則需要查找原因,、修改程序并重新驗證，直至結(jié)果合格,。 4.驗證狀態(tài)維護階段 已經(jīng)通過驗證的清潔方法隨即進行維護階段,，對已投入運行的清潔方法進行監(jiān)控，對清潔方法的變更實行變更管理,，根據(jù)監(jiān)測的結(jié)果來看各種生產(chǎn)活動中,，所采用的清潔方法能達到的實際效果，以確定再驗證的周期進行再驗證,。 圖1 清潔驗證四個階段  按清洗位置對清洗方式分類,，可將清洗方式分為在線清洗與離線清洗兩類,。 按自動/手動清洗方式分類，可將清洗方式分為自動清潔,、手動清潔兩類,。 手動清洗為了確保清潔程序的重現(xiàn)性，需要建立文件進行詳細的過程描述,，操作人員的培訓(xùn),、充分的監(jiān)控、清晰的書面清潔程序有助于確保手動清潔的一致性,。 自動清洗通常不涉及人員介入,，清洗系統(tǒng)通常對不同的清洗行程進行編程，采用自動清潔方式可對自動清洗的行程和參數(shù)進行一致,、穩(wěn)定的監(jiān)控,。 1.在線清潔 大型設(shè)備的清洗可以在設(shè)備的安裝位置進行,，一般與其用于生產(chǎn)時的布局非常相似，在線清潔可以是自動或手動清潔工藝,。 在線清潔系統(tǒng)利用噴灑裝置將清潔劑覆蓋工藝設(shè)備表面,，并通過物理沖擊除去殘留物，噴淋球可以是靜止的或運動的（如旋轉(zhuǎn),、擺動）,，這些系統(tǒng)通常被用來清洗大件的設(shè)備，如混合罐,、流化床,、反應(yīng)器等。 溶劑回流清洗法,，在反應(yīng)器中煮沸一些揮發(fā)性溶劑,，當溶劑的蒸汽在設(shè)備表面冷凝，可以溶解表面上的殘留物,。 安慰劑清潔法這種方法需要選用一種不會對下批產(chǎn)品質(zhì)量造成不利影響的安慰劑,，這種方法的原理是當安慰劑在設(shè)備中流動時，會將上批產(chǎn)品的藥物殘留和工藝殘留清除,，這種方法的優(yōu)點是安慰劑在設(shè)備中的加工過程與實際生產(chǎn)的產(chǎn)品一樣，因此安慰劑與下批產(chǎn)品以同樣的接觸方式接觸表面,，缺點是成本高,，而且難以證明該清潔工藝的有效性。 2.離線清洗 對于安裝后較難清洗的設(shè)備小部件及便攜式工藝設(shè)備,，通常拆卸后轉(zhuǎn)移到另一個指定的清洗間進行自動或手動清洗,，手工操作是離線清洗中不可缺的，一般需要在文件中詳細描述,，并進行相應(yīng)的培訓(xùn),。 不管采用何種清潔方式，都必須制定一份詳細的書面規(guī)程,，規(guī)定每一臺設(shè)備的清洗程序,，從而保證每個操作人員都能以相同的方式實施清洗，并獲得相同的清潔效果,。這是進行清潔驗證的前提,。 從保證清潔重現(xiàn)性及驗證結(jié)果的可靠性出發(fā)，清潔規(guī)程至少應(yīng)對以下方面做出規(guī)定： ⑴ 清潔開始前對設(shè)備必要的拆卸要求和清潔完成后的裝配要求,； ⑵ 所用清潔劑的名稱和主要成分,； ⑶ 清潔劑的配制方法； ⑷ 清潔劑接觸表面的時間,、溫度,、流速等關(guān)鍵參數(shù),； ⑸ 淋洗要求； ⑹ 生產(chǎn)結(jié)束至開始清潔的最長時間,； ⑺ 連續(xù)生產(chǎn)的最長時間,； ⑻ 已清潔設(shè)備用于下次生產(chǎn)前的最長存放時間。 清潔劑應(yīng)能有效溶解殘留物,，不腐蝕設(shè)備,，且本身易被清除，隨著環(huán)境保護標準的提高,，還應(yīng)要求清潔劑對環(huán)境盡量無害或可被無害化處理,，滿足以上要求并且應(yīng)盡量廉價。根據(jù)這些標準,，對于水溶性殘留物,，水是首選的清潔劑。 從驗證的角度,，不同批號的清潔劑應(yīng)當有足夠的質(zhì)量穩(wěn)定性,。因此不宜提倡采用一般家用清潔劑，因其成分復(fù)雜,、生產(chǎn)過程中對微生物污染不加控制,、質(zhì)量波動較大且供應(yīng)商不公布詳細組成。使用這類清潔劑后,，還會帶來另一個問題,，即如何證明清潔劑的殘留達到了標準。 應(yīng)盡量選擇簡單,、成分確切的清潔劑,。根據(jù)殘留物和設(shè)備的性質(zhì)，企業(yè)還可自行配制成分簡單效果確切的清潔劑,，如一定濃度的酸,、堿溶液等。企業(yè)應(yīng)有足夠靈敏的方法檢測清潔劑的殘留情況,，并有能力回收或?qū)U液進行無害化處理,。 一般來說，生產(chǎn)后清潔用到的清潔劑通常分為四類,。 水 水通常用于藥品前淋洗,、淋洗后和使用稀釋液的配制，但是對于水容易清洗的殘留物,，水也可以直接作為清洗劑使用,。清洗用的水包括自來水、軟化水、純化水,、注射用水等,，通常情況下，用于最終淋洗的水質(zhì)至少與藥品生產(chǎn)用水相當,，清潔用水的質(zhì)量還應(yīng)符合適用其用途的化學(xué),、微生物與內(nèi)毒素限度要求。 有機溶劑 有機溶劑一般用于原料藥合成工藝中的清潔,，溶劑的選擇基于殘留物在溶劑中的溶解性,，與水不同之處在于，有機溶劑可以采用溶劑回流清洗法,。但其存在安全環(huán)保等方面的影響,，所以一般工廠會首選水作為清潔劑。 酸和堿 酸堿溶液的強酸堿性會促進水解,，對大分子有機物進行水解破壞,，使殘留物結(jié)構(gòu)簡化易于清除。酸堿清潔劑有組分單一,、價格低廉同時容易清除等優(yōu)點,，但是市售清潔劑中，如氫氧化鈉,，對于強烈吸附或干燥的殘留的清潔效果有限,，并且還有一定的吸潮性和污物懸浮作用。 配方清潔劑 配方清潔劑含多種成分,，利用不同的清洗機制,，因此具有更廣泛有效的清潔作用，除了具有市售堿的堿性作用和水解作用外,，配方洗滌劑可能提供更好的潤濕和污物滲透性，乳化等相互作用,。 應(yīng)在設(shè)備的清潔規(guī)程中規(guī)定一臺設(shè)備需要拆卸的程度,，大多數(shù)設(shè)備，如大容量注射劑的灌裝機,、固體制劑一步制粒機等在清潔前需要預(yù)先拆卸到一定程度,，小針的灌裝機則幾乎可以說是完全拆卸。應(yīng)有書面的,、內(nèi)容清晰完整的拆卸指導(dǎo),，最好附有示意圖，以使操作人員容易理解,。 預(yù)洗的目的是除去大量的（可見的）殘留產(chǎn)品或原料,，為此后的清潔創(chuàng)造一個基本一致的起始條件。 由于清潔規(guī)程往往不是專用的,，它需要適用于生產(chǎn)多種產(chǎn)品和濃度或劑量規(guī)格的通用設(shè)備,，以簡化管理及操作,，因此需要進行預(yù)洗。預(yù)洗的作用是確立一個相對一致的起始點,，以提高隨后各步操作的重現(xiàn)性,。 預(yù)洗所用水質(zhì)不必苛求，通常飲用水或經(jīng)一定程序凈化（如過濾）的飲用水已經(jīng)足夠,，使用水管或手持高壓噴槍以新鮮的流水沖洗設(shè)備以除去殘留物,。對于殘留物物理性質(zhì)差異較大的情況，有的企業(yè)希望制定一份產(chǎn)品與預(yù)洗參數(shù)如水溫,、壓力,、時間等一一對應(yīng)的對照表，由操作人員按實際產(chǎn)品選擇參數(shù),。這種方法在實施時并不十分理想,。由于操作人員的素質(zhì)及習(xí)慣，從一大堆方案中去選擇應(yīng)當采用的方案反而容易造成差錯,，比較簡單而切合實際的方法是讓操作者檢查是否還有可見的殘留物,，讓他們持續(xù)噴洗設(shè)備直至可見殘留物消失，以此作為預(yù)洗的終點,。因此操作者判斷預(yù)洗完成與否的標準必須盡可能的明確,，特別是應(yīng)檢查的部位。例如可在規(guī)程中作出這樣的規(guī)定,，用熱的飲用水持續(xù)噴淋機器的所有表面,，使所有可見的殘留顆粒消失，特別注意檢查不易清潔的部位,。 清洗參數(shù) 清洗程序的操作參數(shù)（如清潔劑種類,、濃度、接觸時間,、殘留物的特性,、污染條件），還包括清洗設(shè)備的特性,，自動化的清洗路徑,，清潔環(huán)境的順序，每步的流速,，在投入使用前都需要確認,。清潔程序每一步均包含4個參數(shù)，分別是時間,、動作,、濃度及溫度。這四個參數(shù)是互相聯(lián)系的，且會對清潔周期中的每一階段的成功存在直接關(guān)系,，比如通過對清潔劑的加熱以提高去污能力,。作為清潔參數(shù)的變量需要確定，清潔參數(shù)的可接受范圍作為清潔程序開發(fā)工作的一部分進行建立,。 時間 被定義為清洗步驟的時間的長短,，在一個清洗步驟中，可以采用兩種方式來進行定義和測量：直接法與間接法,，直接法時可使用作為控制系統(tǒng)中的計時器測量時間,。也可以通過間接法測量時間，例如在淋洗時,，有時通過測量體積來代替測量時間,，因為通過體積和流速可以確定時間。對于最終淋洗水,，普遍會增加測試要求,，如電導(dǎo)率。 動作 被定義為清潔劑的流體動作,。如浸泡,，洗滌，沖擊,，湍流,。攪動能夠提高清潔劑的有效性和清潔工藝的效果。典型的手工清洗包括浸泡和擦洗,，以達到清潔效果,。自動清潔程序通常采用沖擊流或湍流作為清潔動作。清潔程序需明確清潔動作,。流速是清潔劑和清洗水在流經(jīng)設(shè)備時的重要參數(shù),，應(yīng)該在清潔工藝的每個步驟中規(guī)定流速并進行確認。噴淋裝備要具有最大和最小流量的要求,，管道的淋洗流速要確保形成湍流,。 直接影響清潔程序是否能夠成功，化學(xué)清洗劑可以是濃縮型的稀釋后使用,。清潔效果與清潔劑的濃度有關(guān)系，清潔劑使用太少可能達不到清潔效果,，使用太多來自清潔劑的殘留可能難以去除,，并需要使用大量的淋洗。通常,，對于堿性清潔劑達到最佳清潔效果的方法可以是在攪拌狀態(tài)下提高溫度或延長湍流淋洗周期的時間,。 化學(xué)清洗劑在采購和處置方面，均會產(chǎn)生不小的資金投入，因此確定正確的濃度以保證清潔效果是極為重要的,。清潔劑添加的自動系統(tǒng),，必須具有可重現(xiàn)性。不管采用何種添加方式,，確認清潔劑濃度有助于證實該方式的一致性,。對于自動清潔程序，電導(dǎo)率測試是最容易測試強堿或強酸清潔劑濃度的方式,。 應(yīng)能夠通過清潔劑的化學(xué)組成在線測試出清潔劑濃度的異常變化,，例如一些清潔劑添加系統(tǒng)以體積進行控制并采用電導(dǎo)率測試作為確認方法。當電導(dǎo)率超出預(yù)設(shè)值時,，就會報警,，允許的范圍需來自清潔程序開發(fā)的數(shù)據(jù)。 清潔程序中不同步驟的最佳溫度范圍會有所不同,，初始清潔劑典型的溫度為室溫,，目的是最大程度的去除變性或降解產(chǎn)物和最大程度的稀釋產(chǎn)物。清潔劑經(jīng)過加熱以提高效果,，最終清洗水可通過高溫以加快干燥速率和提高任何工藝及清潔劑殘留的溶解性,。 清潔驗證主計劃有助于公司管理層了解驗證活動所涉及時間,、人員的安排，以及進行相關(guān)確認與驗證活動的必要性,，有助于驗證團隊成員了解各自的職責(zé),，此外讓參與這個項目的人員以及檢查人員能夠從全局了解該工廠所使用的驗證方法和所有的驗證活動,。 清潔驗證主計劃包括驗證的一般原則，可接受標準計算,，分組（矩陣）和最差條件產(chǎn)品評估等方面的規(guī)定,。 對驗證過程中各部門的職責(zé)進行詳細規(guī)定與描述。 計算接受殘留限度需考慮的要素如下表（ 計算接受殘留限度考慮因素） ⑵ 二類溶劑 由于其毒性在制劑中應(yīng)予限制,，并嚴格限制允許的每日攝入量,，其名稱如下表 （第二類溶劑濃度限度） ⑶ 第三類溶劑 第三類溶劑屬于低毒，對人體危害很小,，其名稱如下表（ 第三類溶劑濃度限度） ICH《殘留溶劑指南》規(guī)定,，一類、二類溶劑僅在不可替代的情況下用于藥品生產(chǎn),，但不能用作清潔劑,。在無法避免時，三類溶劑可作為清潔劑,，其在下批生產(chǎn)中允許的溶劑殘留濃度不應(yīng)超過初始溶劑濃度的0.5%,。 清潔難清證取樣方法確認可以參見下文取樣方法驗證。 清潔驗證時間計劃表 清潔驗證日常監(jiān)測/維護要求 參考文件 附錄 風(fēng)險評估貫穿于產(chǎn)品整個生命周期,，同樣適用于清潔驗證過程,，合理運用風(fēng)險評估在清潔驗證中能達到如下目的： 選出清潔驗證目標產(chǎn)品，有效的減少清潔驗證工作量,，提高清潔驗證的適用性,； 選出合適的清潔劑，更加高效且節(jié)省成本的達到清洗目的,； 選出合適的檢測方法,，如專屬性與非專屬性的方法分別適用于不同的工藝與設(shè)備,； 選出取樣點位置并選擇合理的取樣方法，從而更高效的開展清潔驗證,。 清潔和清潔驗證可以從相關(guān)的工藝系統(tǒng)知識,，污染物和設(shè)備清潔輔助系統(tǒng)中進行風(fēng)險評估、確認,。這些系統(tǒng)要進行設(shè)計審核，然后根據(jù)相關(guān)的可接受標準確認,，證明已經(jīng)達到系統(tǒng)的相關(guān)要求,。在清潔驗證執(zhí)行的過程中，有很多影響清潔驗證不成功的因素,，每個因素都存在著不同的潛在的風(fēng)險,，必須對每個因素進行充分的分析、評估,，確保清潔驗證順利地進行,，下圖用魚骨圖分析確認所有的影響因素。 圖3 風(fēng)險評估魚骨圖 1.環(huán)境 環(huán)境因素對清潔驗證的影響至關(guān)重要,，一個良好的環(huán)境能夠保證清潔驗證順利的進行,。環(huán)境因素嚴重影響著清潔驗證過程中的微生物殘留項目，不同級別的環(huán)境有不同的微生物和塵埃粒子要求,，在進行清潔驗證之前,，必須確保HVAC的性能確認已完成，環(huán)境的溫濕度已經(jīng)符合要求,。特別是對清潔后的設(shè)備的儲存條件,，清潔后的設(shè)備必須儲存在干燥的環(huán)境中，需要進行干凈設(shè)備保留時間和臟設(shè)備保留時間的驗證,，而這兩個時間驗證主要是針對微生物殘留限度,，因為環(huán)境因素如不能被有效控制，必定導(dǎo)致清潔驗證失敗,。 2.方法 清潔驗證執(zhí)行之前,，必須完成與清潔驗證相關(guān)的分析方法和取樣方法驗證以及所有相關(guān)設(shè)備的清潔SOP。在設(shè)備清潔SOP中必須清楚的描述T.A.C.T（Temperature, Action,Concentration,Time）參數(shù),，確保清潔規(guī)程的可操作性,。 3.人員 對于參與的清潔驗證的相關(guān)人員，特別是與清潔驗證相關(guān)設(shè)備清潔的操作人員,，必須對相關(guān)的清洗規(guī)程進行嚴格的培訓(xùn),，保證設(shè)備清洗的一致性，必要時在清潔驗證過程中可以采用不同的班組人員對設(shè)備進行清洗,，從而證明清潔SOP的耐用性,。執(zhí)行清潔驗證的人員必須全部通過清潔驗證方案的培訓(xùn),，在執(zhí)行過程中，盡量選用有經(jīng)驗的人員,，尤其是取樣操作人員,，必須通過回收率實驗的培訓(xùn)，否則不能進行取樣操作,。 4.材料 為了使設(shè)備的清洗達到一定的潔凈度,，設(shè)備的清洗必須嚴格選用清潔劑和清潔工具，清潔劑必須采用成分單一和制藥行業(yè)允許的清潔劑,，而且在清潔驗證執(zhí)行的過程中要測定清潔劑殘留,，清潔工具一定要選擇沒有任何脫落物質(zhì)的清潔工具，重要的清潔工具的變更可能導(dǎo)致清潔程序重新驗證,。設(shè)備清洗所采用水的質(zhì)量對于最終可接受標準的制定有著很大的影響,，不同的水質(zhì)清潔代表著不同的潔凈要求，比如注射用水一般都是無菌制藥廠房中進行,，而純化水對設(shè)備的清潔一般都在非無菌制藥廠房中進行,，所以最終清潔用水的質(zhì)量好壞決定著清潔驗證微生物限度制訂原則。 藥品生產(chǎn)過程中,，每個公司的每個車間都會有很多品種和劑型藥品,，由于在清潔驗證過程中，要耗費大量的人力和物力,，我們不可能針對每個品種都要單獨的進行清潔驗證,，為了降低成本和將復(fù)雜的清潔驗證簡單化，我們需要對車間所有的品種和劑型進行分組分類,，從中選擇最差條件的產(chǎn)品進行清潔驗證,。 5.測量 清潔驗證過程中涉及的所有的設(shè)備的儀器儀表必須進行校準，確保獲得數(shù)據(jù)的準確性,?？紤]不同人員操作的差異性，取樣操作應(yīng)經(jīng)過嚴格培訓(xùn)并能嚴格遵守規(guī)程的人員進行,，同時為保證樣品具有較好的重現(xiàn)性,，取樣操作應(yīng)由完成回收率實驗的人員進行操作。棉簽使用前用取樣溶劑預(yù)先清洗,，以防止纖維殘留在取樣位置表面,。不同材質(zhì)的回收率實驗在此方案進行前必須完成，應(yīng)由同一人至少進行3次操作,，應(yīng)大于或等于50%,，三次結(jié)果的RSD應(yīng)不大于20%，為確保產(chǎn)品的安全性，在計算殘留量時應(yīng)以最低的回收值代入,，即算得最大可能殘留量,。對于不同材質(zhì)的回收率結(jié)果進行對比，為最大程度地降低污染的風(fēng)險,，采取回收率最低的材質(zhì)作為最終回收率,。 6.設(shè)備 制藥生產(chǎn)中每個公司有不同的劑型，每個劑型使用的設(shè)備也各不相同,，又存在著不同的產(chǎn)品,，在清潔驗證的執(zhí)行過程中，不可能對每個產(chǎn)品的設(shè)備鏈進行驗證,，如果一個公司某劑型的產(chǎn)品非常多,，那么清潔驗證周期會很長，浪費大量的人力和物力資源,。所以我們會根據(jù)產(chǎn)品使用的設(shè)備鏈和產(chǎn)品的相似性對設(shè)備鏈進行分組驗證，對于同一類別的設(shè)備鏈,，只需要選擇最差條件設(shè)備鏈驗證,，只要最差條件設(shè)備鏈通過驗證，那么其余的設(shè)備鏈也就不需要進行驗證了,，大大減輕了清潔驗證的負擔,。 制藥生產(chǎn)過程中，由于設(shè)備的種類非常多,，每個設(shè)備都有不同的幾何形狀,，所以設(shè)備取樣點的選擇是非常重要的，所選擇的取樣點必須有很強的代表性,，最終取樣點結(jié)果的合格證明該設(shè)備的清洗程序是適用的,。 因為在清潔驗證過程中主要的目的是證明上批產(chǎn)品的活性成分對下批產(chǎn)品沒有造成污染，所以對于有些沒有接觸到活性成分的設(shè)備,，我們可以適當?shù)刂贫ㄆ錅y試項目,，并不是所有的測試項目都是一成不變的 1. 專屬性 專屬性是指其他物質(zhì)存在干擾的情況下，被分析物能準確可靠檢測的能力,。對于清潔驗證來說,，干擾物包括降解物、輔料,、取樣溶劑,、取樣棉簽、清潔劑等干擾,。 2. 準確度 準確度也稱為真實度,，指真實值或認可的參考值與測量值之間的相近程度，一般用回收率表示,，綜合回收率要求不低于75%,，回收率的RSD要求不大于10%，將測定的回收率中最低值作為校正因子f,，樣品的測定結(jié)果除以校正因子表示樣品的實際量,。 3. 精密度 指在規(guī)定條件下對均質(zhì)樣品多次取樣進行一系列檢測結(jié)果的接近程度，精密度可從三個層次考查：重復(fù)性,、中間精密度,、重現(xiàn)性，精密度考察應(yīng)使用均質(zhì)的,、可信的樣品,，如果得不到，可人為配制樣品溶液進行研究,。 4. 線性 分析方法的線性是指在給定的范圍內(nèi),，檢測結(jié)果與樣品中被分析物的濃度（量）成比例關(guān)系的能力。范圍指能達到一定的準確度,、精密度和線性,，測試方法適用的試樣中被測物的高、低限濃度或量,。 5. 范圍 分析方法的范圍是指樣品中被分析物的較高濃度和較低濃度的一個區(qū)間,，并已證實在此區(qū)間內(nèi)，該方法具有合適的準確性,、精密度和線性,。濃度范圍應(yīng)達到殘留物限度的50%~150%。 6. 檢測限與定量限 檢測限是指樣品中的被分析物能被檢測到的最低量,，定量限是指能定量檢測樣品中被分析物的最低量,。檢測限和定量限可采用直觀評價和信噪比的方法，或者采用響應(yīng)值的標準差和斜率的方法進行驗證,。 7. 耐用性 耐用性是指試驗參數(shù)適當?shù)陌l(fā)生細小改變時,，測量保持不受影響的能力，可用于說明正常使用時的可靠性。 耐用性測試是在改變其分析參數(shù)的條件下,，分析方法的適用性,，以HPLC方法為例典型變化的參數(shù)如下：流動相PH值變化、流動相組分變化,、柱溫和流速變化 8. 溶液穩(wěn)定性 樣品在分析前放置于一定的儲存條件下,，可能會發(fā)生降解和變化，在這些情況下,，需要考察被分析物的穩(wěn)定性,。使用同一份溶液，測定其預(yù)先選定的時間間隔里結(jié)果的差異,，以此分析樣品的穩(wěn)定性,。 9. 系統(tǒng)適用性 定量檢測時應(yīng)制備2份對照品，對照品一致性檢查不大于5%,，對照品的RSD不超過10%,。 表1 檢驗方法中限度檢查和定量檢查需驗證的參數(shù)
取樣回收率研究通常需要證明采用適當?shù)姆治龇椒ê腿映绦颍沙浞譁y量或量化設(shè)備表面的殘留物,。這些研究為殘留物測量的取樣以及分析方法建立提供了科學(xué)依據(jù),。它的目的是建立一個可重現(xiàn)的設(shè)備表面回收率。以下探討三種類型的取樣回收率：擦拭取樣回收率,，淋洗取樣回收率以及“目檢”回收率。對于擦拭以及淋洗取樣而言,，回收率研究可以作為分析方法驗證的一部分,，或者一旦確定分析方法能夠檢測溶液中殘留物，可單獨進行研究,。取樣回收率研究是實驗室研究,，需要不同被取樣設(shè)備材質(zhì)（如不銹鋼、玻璃,、PTFE 以及EPDM）試樣,，并在上面涂布待檢測殘留物。 1. 擦拭法回收率 擦拭回收率研究中,，將已知濃度的殘留物溶液均勻涂布在材質(zhì)試樣上,，自然晾干，采用一定的擦拭方法進行取樣,，選用合適的溶劑提取棉簽上的殘留,，然后檢測提取液中殘留物的數(shù)量?；厥樟颗c材質(zhì)試樣上的加入量之比就是取樣百分回收率,。由于擦拭屬于人工操作，通常每人需要重復(fù)三次回收率研究。每個殘留物和表面類型的組合至少需要兩個人進行 擦拭回收率研究,。研究建立的回收率可以通過不同的方式定義,，但通常定義為任意一個擦拭取樣人員的最低平均回收率。一個可接受的拭子回收率取決于如何進行拭子回收率試驗,。如果在回收率研究確認取樣方法時,，沒有對殘留限度或分析結(jié)果進行修正，回收率通常要求70%或更高,。如果回收率用于修正殘留物限度或分析結(jié)果,，回收率一般要達到50%或以上。 2. 淋洗法回收率 淋洗法回收率研究同擦拭回收率相似,，將目標殘留物溶液涂布在材質(zhì)試樣上自然晾干,。對于擦拭取樣的回收率，必須嚴格執(zhí)行預(yù)定擦拭步驟,。與之相反對于淋洗取樣,，無法在實驗室中準確地重復(fù)淋洗步驟（除了提取取樣的特殊情況）。然而在實驗室中模擬淋洗程序是可行的,。在可能的情況下,，模擬淋洗的條件應(yīng)該同實際的設(shè)備淋洗條件相同，包括淋洗溶劑以及淋洗溶劑溫度的選擇,。其他情況下,，應(yīng)該選擇與設(shè)備淋洗相同或最差的淋洗條件，例如回收率研究中溶劑量與被取樣表面積之比應(yīng)該同設(shè)備淋洗時相同或更低,。 3. 目檢回收率 這個過程實際上是確定一個定量的“目視檢測限”,，如果目檢只是作為擦拭或沖洗取樣的補充，則可以但不要求確定“目視檢測限”,。指定觀察條件下的目視檢測限可以通過在設(shè)備材質(zhì)試樣上涂布不同濃度（μg/cm2）的殘留物來確定,。并需要一組訓(xùn)練有素的觀察者來確定表面殘留物明顯可見時的最低殘留水平。目視檢測限的意義在于,，如果在清潔驗證方案中,，在同樣（或更嚴格）的觀察條件下確定設(shè)備表面已目檢潔凈，則可認為實際殘留水平低于目視檢測限,。適當?shù)挠^察條件包括距離,，光照以及觀察角度。目視檢測限取決于殘留物性質(zhì),，表面性質(zhì)（例如,，不銹鋼對PTFE）以及觀察者的視力。文獻報道的典型的目視檢測限是 1-4μg/cm2,。對于目視檢測限,，不需要確定回收率,。該研究的目的是確定殘留物明顯可見時的一個殘留物水平，這樣目視潔凈的任何表面上殘留水平都低于目視檢測限,。 4. 生物負載及內(nèi)毒素取樣回收率 對于微生物取樣,，不適合進行回收率研究以確定表面回收率，原因之一是微生物檢測的計數(shù)問題通常以“菌落形成單位”進行計數(shù)而不是單個微生物,。第二個原因是在一個標準的取樣回收率研究中,，當材質(zhì)試樣晾干時微生物會死亡或失去生存能力。第三個原因是不清楚選用哪種微生物進行回收率研究,。第四個原因是通常生物負載限度已明顯低于可能影響產(chǎn)品質(zhì)量或工藝性能（如在線滅菌）的水平,，因此即使回收率低（<50%），不引入回收因子也不會影響產(chǎn)品質(zhì)量和/或工藝性能,。 參照物質(zhì)或最難清潔物質(zhì),、最難清潔部位和取樣部位，如何制訂驗證的合格標準即最大允許殘留清潔驗證方案必須符合一般驗證方案的共性要求,。驗證方案中最關(guān)鍵技術(shù)問題為如何確定限度,，用什么手段能準確地定量殘留量，這包括取樣方法和檢測方法的開發(fā)和驗證,。 一般藥品都由活性成分和輔料組成,。對于復(fù)方制劑，含有多個活性成分,。所有這些物質(zhì)的殘留物都是必須除去的,。在清潔驗證中是否需要為所有殘留物都制定限度標準一一檢測呢？這是不切實際且沒有必要的,。在一定的意義上,，清潔的過程是個溶解的過程，因此通常的做法是從各組分中確定最難清潔（溶解）的物質(zhì),，以此作為參照物質(zhì),。通常相對于輔料,，人們更關(guān)注活性成分的殘留,，因為它可能直接影響下批產(chǎn)品的質(zhì)量、療效和安全性,。因此活性成分的殘留限度必須作為驗證合格的標準之一,。如當存在兩個以上的活性成分時，其中最難溶解的成分即可作為最難清潔物質(zhì)論處,。以復(fù)方18氨基酸注射液為例,，它有18種氨基酸，均為活性成分,。其中最難溶解的為胱氨酸,，僅微溶于熱水,，因此可將其作為最難清潔物質(zhì)。這樣一來,，清潔驗證就找到了殘留的“參照物”而不用考慮其他易溶解組分,。 清潔驗證方案可用多種格式,，其共同要求要素包括如下內(nèi)容： ① 目的 明確待驗證的設(shè)備和清潔方法。 ② 清潔規(guī)程 待驗證的清潔方法的SOP即清潔規(guī)程應(yīng)當在驗證開始前確定下來,，在驗證方案中列出清潔規(guī)程以表明清潔規(guī)程已經(jīng)制定,。 ③ 驗證人員 列出參加驗證人員的名單，說明參加者所屬的部門和各自的職責(zé),，對相關(guān)操作人員的培訓(xùn)要求,。 ④ 確定參照物和限度標準 在本部分應(yīng)詳細闡述確定參照物的依據(jù)，確定限度標準的計算過程和結(jié)果,。一般可將相關(guān)設(shè)備列表,，計算總表面積，特殊表面面積,；將相關(guān)產(chǎn)品列表,，列入主要活性成分及其相關(guān)物理化學(xué)性質(zhì)，MTDD值等,，確定參照物質(zhì),，計算限度標準。 ⑤ 檢驗方法學(xué) 本部分應(yīng)說明取樣方法,、工具,、溶劑，主要檢驗儀器,，取樣方法和檢驗方法的驗證情況等,。 ⑥ 取樣要求 用示意圖、文字等指明取樣點的具體位置和取樣計劃,，明確規(guī)定何時,、何地、取多少樣品,，如何給各樣品標記,。這部分的內(nèi)容對方案的實施和保證驗證結(jié)果的客觀性是至關(guān)重要的。 ⑦ 可靠性判斷標準 在本部分應(yīng)規(guī)定為證明待驗證清潔規(guī)程的可靠性,，驗證試驗須重復(fù)的次數(shù),，一般至少連續(xù)3次試驗，所有數(shù)據(jù)都符合限度標準方可,。 清潔驗證完成后該清潔方法即生效,，清潔方法即進入維護與再驗證階段,，企業(yè)應(yīng)當對清潔驗證狀態(tài)進行持續(xù)維護，保證清潔方法持續(xù)可靠,。 在日常生產(chǎn)過程中對清潔方法進行監(jiān)控的目的是進一步考察清潔程序的可靠性,，對于手工清洗過程來說，監(jiān)控尤其重要,，因為其重現(xiàn)性很在程度上取決于人員的培訓(xùn)和操作人員的實際操作技能,。 監(jiān)控辦法為在日常清潔時，定期進行抽樣檢測,，確認清潔過程的有效性與操作的重現(xiàn)性,。通過日常監(jiān)控數(shù)據(jù)的回顧，以確定再驗證的周期,。 當已經(jīng)驗證的設(shè)備,、清潔程序有任何變更以及產(chǎn)品處方、增加新產(chǎn)品等可能導(dǎo)致清潔規(guī)程或設(shè)備的變更,，應(yīng)組織相關(guān)人員對變更情況進行評估,，確定是否需要進行再驗證，當發(fā)生下列情形之一時,，須對清潔程序進行再驗證,。 ① 清潔程序變化時 ② 清潔劑變化時 ③ 設(shè)備有重大變更時 ④ 增加相對更難清洗的產(chǎn)品時 在實際生產(chǎn)中，一臺（組）設(shè)備用于多種產(chǎn)品的生產(chǎn)是非常普遍的現(xiàn)象,。有時各種產(chǎn)品的物理,、化學(xué)性質(zhì)有很大差異。這就給清潔規(guī)程制定者提出這樣的問題：是否要為每個產(chǎn)品分別制定清潔規(guī)程呢,？經(jīng)驗告訴我們,，為一臺（組）設(shè)備制定多個清潔規(guī)程并不可取：這不但由于為每個規(guī)程進行難清潔驗證的工作量過于龐大,，更主要的是對操作者來說要在多個規(guī)程中選擇適當?shù)那鍧嵎椒ê苋菀自斐刹铄e,。比較可行的方法是在所有涉及的產(chǎn)品中，選擇最難清潔的產(chǎn)品為對照產(chǎn)品,，以所有產(chǎn)品/原料中允許殘留量最低的限度為標準（最差條件）,，優(yōu)化設(shè)計足以清除該產(chǎn)品/原料以達到殘留量限度的清潔程序。驗證就以該程序為對象,，只要證明其能達到預(yù)定的要求,，則該程序能適用于所有產(chǎn)品的清潔,。當然,，從環(huán)保和節(jié)約費用的角度考慮，如果實踐證明該清潔程序?qū)Υ蠖鄶?shù)產(chǎn)品而言過于浪費,，也可再選擇一個產(chǎn)品進行上述規(guī)程制定和驗證工作,。這是在規(guī)程中必須非常明確地規(guī)定該方法適用于哪些產(chǎn)品,，還須明確為防止選擇時發(fā)生錯誤需要采取的必要的措施。 參照產(chǎn)品的選擇原則如下： ① 將所有產(chǎn)品列表,。 ② 確定產(chǎn)品的若干物理,、化學(xué)性質(zhì)為評價項目：如主要活性成分的溶解度，黏度,，吸附性等,，其中最主要的性質(zhì)為溶解度。 ③ 對每個產(chǎn)品的評價項目打分,。如將溶解度分為1/2/3/4級,，依次表示難溶/微溶/可溶/易溶。 ④ 根據(jù)經(jīng)驗和產(chǎn)品性質(zhì),，擬定適當?shù)那鍧崉┓N類,。 ⑤ 計算各產(chǎn)品的最大允許殘留限度。 ⑥ 將表格按照溶解度由小到大排序,，選擇溶解度最小的產(chǎn)品作為參照產(chǎn)品,。 ⑦ 如果表格中使用的清潔劑可分為水/水溶性清潔劑（包括酸、堿溶液）和有機溶劑兩類,，應(yīng)分別選擇一種參照代表產(chǎn)品,。 ⑧ 將表中允許殘留限度最小的數(shù)值確定為驗證方案的允許殘留物限度標準。 ⑨ 將與參照產(chǎn)品對應(yīng)的清潔劑確定為清潔方法使用的清潔劑,。 某設(shè)備生產(chǎn)產(chǎn)品統(tǒng)計表（已按溶解性排序）
從表中可見,，產(chǎn)品丙、丁,、乙,、戊，可用水溶性清潔劑清潔,，應(yīng)選最難溶的產(chǎn)品丙為參照產(chǎn)品,，清潔劑1%NaOH熱水溶液，允許殘留限度定為1.5μg/cm2,。產(chǎn)品甲,、己用乙醇為清潔劑，可另算一類,，應(yīng)選擇產(chǎn)品甲為代表產(chǎn)品,，清潔劑為95%乙醇，允許殘留限度定為2.5μg/cm2,。根據(jù)設(shè)備的情況,、已確定的清潔劑和殘留限度，設(shè)計清洗方法,。在生產(chǎn)后依法清洗并驗證,。 清潔驗證試驗至少進行3次,，每批生產(chǎn)后按清潔規(guī)程清潔，按驗證方案檢查清潔效果,，取樣并檢驗,。重復(fù)上述過程3次，3次試驗的結(jié)果均應(yīng)符合預(yù)定標準,。如果出現(xiàn)個別化驗結(jié)果超標的情況,，必須詳細調(diào)查原因。如果有證據(jù)表明結(jié)果超標是因為取樣,、化驗失誤等原因造成,，可將此數(shù)據(jù)從統(tǒng)計刪除。否則應(yīng)判驗證失敗,。不得采用重新取樣再化驗直至合格（Testing until clean）的做法,。驗證失敗意味著清潔規(guī)程存在缺陷，應(yīng)當根據(jù)化驗結(jié)果提供的線索修改清潔規(guī)程,，隨后開展新一輪的驗證,。 轉(zhuǎn)自：制藥工程論壇 |
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