本技術(shù)規(guī)范按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草,。

本技術(shù)規(guī)范由司法鑒定科學(xué)研究院提出。

本技術(shù)規(guī)范由司法部公共法律服務(wù)管理局歸口,。

本技術(shù)規(guī)范起草單位：司法簽定科學(xué)研究院,、四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院、北京市公安局,、中山大學(xué),。

本技術(shù)規(guī)范主要起草人：李成濤、侯一平,、邊英男,、張素華、劉雅誠,、孫宏鈺,、李莉,、劉希玲。

本技術(shù)規(guī)范為首次發(fā)布,。

本技術(shù)規(guī)范運(yùn)用法醫(yī)物證學(xué),、遺傳學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)等學(xué)科的理論和技術(shù)，結(jié)合法醫(yī)物證鑒定的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)而制訂,，為法醫(yī)學(xué)Y-STR檢驗(yàn)提供科學(xué)依據(jù)和統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),。

本技術(shù)規(guī)范規(guī)定了法醫(yī)學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行Y-STR基因座檢測的基本要求、檢驗(yàn)程序,、鑒定意見和鑒定文書。

本技術(shù)規(guī)范適用于法醫(yī)學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室采用Y-STR基因座進(jìn)行同一父系親緣簽定和家系排查.

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的,。凡是注日期的引用文件,，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件,。

GA/T 383-2014 法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范。

下列語和定義適用于本文件,。

 

4.1 鑒定機(jī)構(gòu)應(yīng)具有從事法醫(yī)物證的執(zhí)業(yè)范圍,，且應(yīng)滿足如下要求：

a）定期參加能力驗(yàn)證相關(guān)計(jì)劃并考核合格,；

b）對所有影響鑒定結(jié)果的人員崗位規(guī)定相應(yīng)的能力要求，包括教育,、資質(zhì),、培訓(xùn)、專業(yè)知識(shí),、技能等,，并保留相關(guān)記錄；制定適宜的培訓(xùn)計(jì)劃并組織實(shí)施,；

c）依據(jù)鑒定方法和要求對鑒定人以及參與鑒定工作的人員進(jìn)行監(jiān)督,，以評價(jià)其鑒定工作的符合性和滿意程度；監(jiān)督的結(jié)果應(yīng)作為培訓(xùn)需求評價(jià)的依據(jù)之一,；

d）具有能識(shí)別樣本的標(biāo)識(shí)系統(tǒng),，并確保樣本在鑒定過程期間能得到持續(xù)的識(shí)別；

e）建立樣本的運(yùn)輸,、接收,、處置、保護(hù),、存儲(chǔ),、保留和/或清理的規(guī)定，應(yīng)對接收,、內(nèi)部傳遞,、處置,、保留、返還和清理等過程進(jìn)行記錄,，確保記錄的完整性和可追溯性,。

4.2 鑒定人應(yīng)具有法醫(yī)物證鑒定執(zhí)業(yè)資格，熟悉并掌握Y-STR檢驗(yàn)的方法和原理,，并能正確評價(jià)結(jié)果,。

4.3 鑒定活動(dòng)應(yīng)包括檢驗(yàn)（采樣、DNA提取和純化,、DNA定量分析,、PCR擴(kuò)增與PCR產(chǎn)物分型）、系統(tǒng)評估,、似然率計(jì)算,、鑒定意見判斷、鑒定文書撰寫等環(huán)節(jié),。鑒定活動(dòng)完畢后，應(yīng)將各個(gè)環(huán)節(jié)的記錄進(jìn)行歸檔,。

5.1 采樣要求

樣本的采集,、包裝及保存應(yīng)按照以下要點(diǎn)：

a）樣本可以是血液（斑）或口腔拭子（唾液斑），也可以是其它人體生物學(xué)樣本,，如精液（斑）,、帶毛囊毛發(fā)、羊水,、組織塊等,；

b）對于接受了外周血干細(xì)胞移植的被鑒定人，應(yīng)避免采集其血樣作為檢驗(yàn)樣本,，宜取其口腔拭子（唾液斑）或毛發(fā)進(jìn)行檢驗(yàn),；

c）樣本應(yīng)分別包裝，注明被鑒定人姓名,、編號(hào),、采樣日期等；

d）樣本采集后應(yīng)冷藏或冷凍保存,。

5.2 DNA提取和純化

按照GA/T 383-2014中附錄A的方法執(zhí)行,。

5.3 DNA定量分析

按照GA/T 383-2014中6.1~6.3的方法執(zhí)行。

5.4 PCR擴(kuò)增與PCR產(chǎn)物分型

5.4.1 X-STR基因座

選用多態(tài)性X-STR基因座進(jìn)行PCR擴(kuò)增,，基因座選擇宜參照如下條件：

a）已有基因座定義和其特征的文獻(xiàn)報(bào)道,；

b）已實(shí)施種屬特異性、靈敏性,、穩(wěn)定性研究,；

c）已有可供使用并公開發(fā)表的群體遺傳數(shù)據(jù),，包括從有關(guān)人群中獲得的基因座等位基因頻率或單倍型頻率及突變率等；

d）串聯(lián)重復(fù)單位為三,、四或五核苷酸：

e）X-STR基因座可選用DXS7132,、DXS7423、DXS8378,、DXS10074,、DXS10079、DXS10101,、DXS10103,、DXS10134、DXS10135,、DXS10146,、DXS10148、HPRTB等,?？稍黾游墨I(xiàn)報(bào)道且經(jīng)驗(yàn)證的其它X-STR基因座，以提高系統(tǒng)效能,。

5.4.2 PCR擴(kuò)增

應(yīng)選用商品化的試劑盒進(jìn)行PCR擴(kuò)增,，每批擴(kuò)增均應(yīng)有陽性對照樣本（已知濃度和基因型的對照品DNA或以前檢驗(yàn)過的、已知基因型的樣本）以及不含人基因組DNA的陰性對照樣本,。PCR擴(kuò)增體系與PCR擴(kuò)增參數(shù)宜按試劑盒的操作說明書進(jìn)行,。

5.4.3 PCR產(chǎn)物分型與結(jié)果判讀

使用遺傳分析儀對PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳。按照操作手冊使用相關(guān)軟件進(jìn)行結(jié)果判讀,。

對YSTR基因座進(jìn)行分型檢測時(shí),，通常男性樣本在單拷貝Y-STR基因座上僅表現(xiàn)為1個(gè)等位基因峰，女性樣本表現(xiàn)為無可檢見等位基因峰,。若出現(xiàn)異?，F(xiàn)象，結(jié)果判讀宜考慮以下情形：

a）由于Y染色體存在較多的回文結(jié)構(gòu),，部分Y-STR基因座在染色體上存在多個(gè)拷貝,，采用基因座特異性熒光標(biāo)記引物擴(kuò)增后會(huì)產(chǎn)生多個(gè)PCR產(chǎn)物，即多拷貝Y-STR基因座,，可以表現(xiàn)為1個(gè)或多個(gè)等位基因峰,，如基因座DYS385、DYS459,、DYD464等,，命名時(shí)參考多拷貝基因座命名原則。

注：多拷貝基因座命名原則：在染色體上存在多個(gè)拷貝的基因座表現(xiàn)出多個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物峰,，在所用分型方法無法區(qū)分各等位基因具體的基因座來源時(shí),，多拷貝基因座采用單一搭因座名,，觀察到的所有等位基因作為一個(gè)基因型處理，按由小到大的原序共同報(bào)告,，中間以連字符分開,，例如DYS38511-14、DYS4598-11,、DYS46413-14-15-16等,。采用特殊檢驗(yàn)法可以明確等位基因來源的，應(yīng)根據(jù)實(shí)際基因座來源進(jìn)行命名,，如DYS385a 14和DYS385b11,。

b）由于Y染色體基因組的不穩(wěn)定性，某些Y-STR基因座（如DYS19,、DYS390,、DYS391等）可能出現(xiàn)2個(gè)或3個(gè)拷貝，導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物在圖譜中呈現(xiàn)多個(gè)等位基因峰,。這種情形下,，不應(yīng)誤判所檢樣本為不同男性混合樣本。命名時(shí)參考多拷貝基因座命名原則,。

c）由于X和Y染色體部分序列具有相似性,，如果擴(kuò)增引物選擇不當(dāng)，對某些Y-STR基因座（如DYS391和DYS393）進(jìn)行分型時(shí),，在X染色體上也能檢出擴(kuò)增產(chǎn)物，因此不僅男性樣本可檢見額外的產(chǎn)物峰,，女性樣本也可檢見產(chǎn)物峰,。

d）Y染色體的微缺失現(xiàn)象導(dǎo)致異常分型結(jié)果。如含有AMEL-Y的DNA片段缺失,，可同時(shí)伴有鄰近DYS458或（和）DYS456基因座的缺失,。又如復(fù)合擴(kuò)增過程中，DYS448基因座側(cè)翼區(qū)缺失能導(dǎo)致其擴(kuò)增產(chǎn)物大小移位至另一個(gè)基因座檢測區(qū)范圍,，使另一個(gè)基因座出現(xiàn)兩個(gè)等位基因峰,。