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當(dāng)談到“親子鑒定”,，我們會(huì)聯(lián)想到什么？第一時(shí)間浮現(xiàn)于腦海中的恐怕是與親子鑒定密切相關(guān)的影視劇情節(jié),。貌似離日常生活很遠(yuǎn)的親子鑒定已經(jīng)不知不覺滲入了我們的生活,。每一份親子鑒定的背后都有一個(gè)故事。而這背后的故事,，往往比影視作品的情節(jié)來(lái)得跌宕起伏,。剔除親子鑒定的道德和社會(huì)意義，它就只是一種技術(shù)手段,。39健康網(wǎng)帶您深入廣東省第二人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心,，全程揭秘個(gè)人親子鑒定的操作流程。 1/32. 2/32. 填寫個(gè)人親子鑒定知情同意書 接受個(gè)人親子鑒定業(yè)務(wù)的第一步：委托人填寫知情同意書，確定自己所做項(xiàng)目的目的,、注意事項(xiàng)和收取檢查結(jié)果報(bào)告的方式等相關(guān)信息,。接受個(gè)人親子鑒定業(yè)務(wù)的第一步：委托人填寫知情同意書，確定自己所做項(xiàng)目的目的,、注意事項(xiàng)和收取檢查結(jié)果報(bào)告的方式等相關(guān)信息,。 3/32. 用于采集血樣的血樣采集卡 血樣采集卡是一種以植物纖維為載體用于存儲(chǔ)DNA的介質(zhì)，專為室溫下對(duì)各種生物體液（如血液,、精液,、唾液）,、微生物和病毒等樣品進(jìn)行收集,、運(yùn)輸和存儲(chǔ)而設(shè)計(jì),。鑒定人可將少量手指血置于血樣采集卡上。在沒有血樣采集卡的情況下,，也可選用干凈紙巾或干凈醫(yī)用紗布作為代替物采集血樣,。 4/32. 委托人進(jìn)行手指采血 實(shí)驗(yàn)中心的醫(yī)護(hù)人員為委托人進(jìn)行手指采血。在頭發(fā),、唾液和血液幾種介質(zhì)當(dāng)中,，血樣的DNA提取量穩(wěn)定，可以保證檢測(cè)結(jié)果,，親子鑒定中心強(qiáng)烈建議委托人最好留取血樣,。 5/32. 取一至兩滴血于血樣采集卡上 用碘消毒采血部位后，用采血針扎破手指擠壓取末梢血一兩滴,，滴至血樣采集卡或醫(yī)用紗布上,。 6/32. 采完血樣的采血卡和所用的一次性針頭 采集完血樣的血樣采集卡（紙巾或紗布）需要等自然晾干后用白紙包好，并做好標(biāo)記,，裝入信封中,。 7/32. 擴(kuò)增反應(yīng)管編號(hào) PCR的中文名為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，簡(jiǎn)單的說(shuō),，PCR擴(kuò)增這一步就是把我們所需要的片段通過(guò)酶促反應(yīng),，放大到通過(guò)某些專用儀器可以看到的程度。在對(duì)樣本擴(kuò)增反應(yīng)前,，工作人員為放置樣本的擴(kuò)增反應(yīng)管進(jìn)行了編號(hào),。 8/32. 在反應(yīng)管中加入擴(kuò)增反應(yīng)液 工作人員在放置樣本的擴(kuò)增反應(yīng)管加入擴(kuò)增反應(yīng)液，逐步做好檢測(cè)樣本擴(kuò)增反應(yīng)的準(zhǔn)備,。 9/32. 用微量卡片打孔針在干燥后的采集卡上取樣 10/32. 將樣本加入反應(yīng)管中 工作人員小心翼翼地將提取的樣本放置進(jìn)標(biāo)好編號(hào)的反應(yīng)管當(dāng)中。 11/32. 加完樣的反應(yīng)管 加完樣本的擴(kuò)增反應(yīng)管準(zhǔn)備放置進(jìn)PCR擴(kuò)增儀,。如今,，PCR技術(shù)已經(jīng)成為生命科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)室中不可缺少的一部分。 12/32. 將反應(yīng)管放入PCR擴(kuò)增儀中 PCR反應(yīng)在熱循環(huán)設(shè)備中進(jìn)行,。PCR儀可以將反應(yīng)管加熱或冷卻到每步反應(yīng)所需的精確的溫度,。 13/32. PCR擴(kuò)增反應(yīng) PCR技術(shù)是一種快速體外基因擴(kuò)增技術(shù)，它可將極微量的檢材或陳舊性斑痕的DNA在體外進(jìn)行擴(kuò)增,，從而使其DNA量達(dá)到較高水平,，滿足對(duì)DNA多態(tài)性的分析鑒定的需要。PCR這項(xiàng)技術(shù)被廣泛應(yīng)用于親子鑒定,。 14/32. 2小時(shí)后反應(yīng)完畢 理論上PCR可以按2n倍數(shù)擴(kuò)增DNA十億倍以上,，實(shí)際應(yīng)用已證實(shí)可以將極微量的靶DNA成百萬(wàn)倍以上地?cái)U(kuò)增到足夠檢測(cè)分析量的DNA。PCR儀一般在2小時(shí)內(nèi)約可完成30次以上的循環(huán)擴(kuò)增,。 15/32. 取出反應(yīng)管 PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物,。擴(kuò)增反應(yīng)完畢，將反應(yīng)管從儀器中取出,。 16/32. 擴(kuò)增后的反應(yīng)管 PCR擴(kuò)增DNA片段只是一個(gè)重要手段,。由于DNA微不可見，所以必須進(jìn)行PCR擴(kuò)增,，復(fù)制出上億倍的“同類”,，起到放大作用使產(chǎn)生的DNA片段能被儀器檢測(cè)出來(lái)。 17/32. 準(zhǔn)備3500XL電泳樣本 復(fù)制放大后的DNA樣本（即PCR產(chǎn)物）將會(huì)送入電泳室,，運(yùn)用特殊儀器測(cè)序后,，形成樣本的峰形圖。 18/32. 準(zhǔn)備3500XL電泳樣本 19/32. 準(zhǔn)備3500XL電泳樣本 20/32. 蓋上橡膠蓋 為放置樣本的實(shí)驗(yàn)盒蓋上橡膠蓋密封，下一個(gè)步驟是對(duì)DNA樣本進(jìn)行熱變性,。 21/32. 樣本上PCR機(jī)熱變性 將DNA溶液加熱到70～100℃幾分鐘后,，雙螺旋結(jié)構(gòu)即發(fā)生破壞，氫鍵斷裂,，兩條鏈彼此分開,，形成無(wú)規(guī)則線團(tuán)狀，此過(guò)程為DNA的熱變性,。 22/32. 將熱變性后的樣本放入套板 實(shí)驗(yàn)室工作人員將熱變性后的樣本安置進(jìn)套板當(dāng)中,。 23/32. 裝好套板 套板安置完畢，確保其安置穩(wěn)固之后就可準(zhǔn)備放進(jìn)ABI 3500XL遺傳分析儀,。 24/32. ABI 3500XL遺傳分析儀 ABI 3500XL遺傳分析儀不僅具有DNA測(cè)序,、PCR片段大小分析和定量分析功能，而且實(shí)現(xiàn)了全部操作自動(dòng)化,，包括自動(dòng)灌膠,、自動(dòng)進(jìn)樣,、自動(dòng)數(shù)據(jù)收集分析。 25/32. 將裝好樣本的套板放入ABI 3500XL 遺傳分析儀 每次測(cè)序之前,，只需把樣品放到自動(dòng)進(jìn)樣品的樣品盤中，設(shè)置電泳參數(shù),、數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)即可,。 26/32. 分析儀運(yùn)行 PCR產(chǎn)物運(yùn)用ABI 3500XL遺傳分析儀測(cè)序后，形成樣本的峰形圖,。 27/32. 溫度控制 實(shí)驗(yàn)室對(duì)溫度有著嚴(yán)格的要求,，實(shí)驗(yàn)工作人員隨時(shí)會(huì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的溫度，確保溫度不會(huì)讓檢測(cè)結(jié)果發(fā)生偏差,。 28/32. 產(chǎn)物分析區(qū) 廣東省第二人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心的產(chǎn)物分析區(qū),。DNA的毛細(xì)管測(cè)序儀檢測(cè)便在此進(jìn)行。 29/32. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束,，電腦軟件分析數(shù)據(jù) 檢測(cè)人員將所得結(jié)果進(jìn)行分析匯總、計(jì)算,，然后出鑒定結(jié)論和報(bào)告,。 30/32. 軟件分析數(shù)據(jù)界面 ABI 3500XL遺傳分析儀顯示出的表格和波峰圖肯定讓普通人云里霧里摸不著頭腦。而工作人員則可以據(jù)圖表進(jìn)行專業(yè)比對(duì),，進(jìn)而生成檢測(cè)報(bào)告,。 31/32. 原始結(jié)果報(bào)告 在所有流程走完之后，委托人將拿到最關(guān)心的親子鑒定報(bào)告,。目前進(jìn)行親子鑒定采用的聚合酶鏈反應(yīng)——短串聯(lián)重復(fù)基因座DNA分型技術(shù),，其結(jié)果判斷準(zhǔn)確率大于99.9%。 |
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