免疫療法的主要類型包括免疫檢查點抑制、過繼性細(xì)胞療法,、人重組細(xì)胞因子（非特異性免疫療法）和癌癥疫苗等。這些療法已經(jīng)徹底改變了癌癥的治療,，特別是靶向細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白4（CTLA-4）和程序性細(xì)胞死亡受體1（PD-1）通路的免疫檢查點阻斷療法，在廣泛的癌癥類型中都產(chǎn)生了臨床益處,。

然而,，癌細(xì)胞是逃避免疫檢測的高手,，現(xiàn)有的治療方法有時無法識別到癌細(xì)胞的所有分子偽裝，這使得它們的療效大大降低,，只有一小部分患者表現(xiàn)出持久的臨床應(yīng)答促使科學(xué)家們尋找新的免疫療法,。

10月14日， 耶魯大學(xué)陳斯迪教授課題組在 Nature Immunology 雜志上發(fā)表論文稱,，他們開發(fā)出了一種新療法,，能使癌細(xì)胞“脫穎而出”，幫助免疫系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)并消除其他形式免疫療法可能遺漏的腫瘤,。該療法在三陰性乳腺癌,、黑色素瘤和胰腺癌等三種小鼠腫瘤模型中取得了良好的治療效果，甚至還能消除遠(yuǎn)離原發(fā)腫瘤源的擴散癌細(xì)胞[1],。

（圖片來源：Nature Immunology. https:///10.1038/s41590-019-0500-4）

識別由突變和失調(diào)基因表達程序形成的腫瘤相關(guān)抗原（TAAs）是癌癥免疫治療的重要步驟,。然而，TAAs的表達水平可能不足以引起有效的T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,，且癌細(xì)胞通常下調(diào)抗原提呈,，這些現(xiàn)象加上腫瘤免疫微環(huán)境的進一步抑制，很容易導(dǎo)致癌癥免疫逃逸,。

為了解決這一難題,，陳斯迪課題組開發(fā)了一種全新的免疫療法——集成內(nèi)源基因激活免疫療法（MultiplexedActivation of Endogenous Genes as Immunotherapy, MAEGI）。MAEGI結(jié)合了腺相關(guān)病毒（AAVs）基因治療和CRISPR基因編輯的技術(shù),，但它并不是尋找,、編輯目標(biāo)DNA位點并插入新基因，而是靶向特定癌細(xì)胞類型的癌癥相關(guān)基因,，然后像導(dǎo)航燈塔一樣精確定位、標(biāo)記并放大信號,，以幫助免疫系統(tǒng)攻擊標(biāo)記的癌細(xì)胞,。

具體來說，MAEGI利用CRISPR激活（CRISPRa）技術(shù),，將催化滅活的Cas9（dCas9）與轉(zhuǎn)錄激活因子融合,，再由sgRNA引導(dǎo)到靶基因的位置，通過直接增強編碼潛在免疫原性抗原的內(nèi)源性基因的表達,，來提高免疫系統(tǒng)的識別和殺傷力,。該方法將效應(yīng)T細(xì)胞招募到腫瘤中并重塑腫瘤微環(huán)境，有效地將“冷”腫瘤轉(zhuǎn)化成了“熱”腫瘤,。

而為了使MAEGI能夠直接傳遞給腫瘤,，研究人員采用AAVs作為基因載體,。AAVs是美國FDA批準(zhǔn)的治療性轉(zhuǎn)基因載體,，具有安全性好、免疫源性低,，在體內(nèi)表達外源基因時間長等優(yōu)點,。

接著，考慮到單個腫瘤具有與正常組織不同的獨特突變譜,，研究人員進一步探索了MAEGI是否可以定制成腫瘤特異性突變基因集,。這種方法被稱為精準(zhǔn)MAEGI（precisionMAEGI, p-MAEGI）。

以三陰性乳腺癌為例,，通過全外顯子測序,，他們找出一個三陰性乳腺癌細(xì)胞系（E0771）的所有突變基因，生成了僅靶向1116個E0771突變基因的3839個sgRNAs庫,，以及相應(yīng)的AAV-p-MAEGI庫,。然后通過瘤內(nèi)注射方式，靶向激活所有可以產(chǎn)生腫瘤新抗原的突變基因,。

（圖片來源：Nature Immunology. https:///10.1038/s41590-019-0500-4）

實驗結(jié)果顯示,，在AAV-p-MAEGI治療后，原位瘤的完全緩解率和近完全緩解率為44%,，而未直接接受注射的遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移腫瘤也顯示出良好的療效,。值得注意的是，在初次腫瘤移植3個月后,，經(jīng)過p-MAEGI療法治愈的小鼠再次接受同種腫瘤的攻擊,，仍能完全抵御腫瘤的挑戰(zhàn)，并保持了6個月以上的完全緩解,。這表明p-MAEGI產(chǎn)生的免疫反應(yīng)具有的全身性,、長效性和持久性的特點。

（圖片來源：Nature Immunology. https:///10.1038/s41590-019-0500-4）

此外,，對于黑色素瘤和胰腺癌小鼠腫瘤模型,，該療法也同樣顯示出顯著的療效。

最后,，對腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞群的分析表明,，AAV-p-MAEGI激活抗原呈遞后能顯著增強腫瘤微環(huán)境中的免疫浸潤。治療從第29天起顯著增強了腫瘤中CD4⁺和CD8⁺T細(xì)胞的浸潤,，MHC-II⁺抗原提呈細(xì)胞（APCs）的比例也明顯提高,。研究還證明絕大部分腫瘤浸潤的免疫細(xì)胞是腫瘤抗原特異性的。

（圖片來源：Nature Immunology. https:///10.1038/s41590-019-0500-4）

總結(jié)來說,，該研究證明通過CRISPRa直接激活內(nèi)源性突變基因可以放大腫瘤細(xì)胞的“非己”信號,，誘導(dǎo)有效的抗腫瘤適應(yīng)性免疫。與目前的新抗原疫苗不同,，AAV-MAEGI是一種直接針對腫瘤細(xì)胞和免疫微環(huán)境之間相互作用的正交免疫療法,，可誘導(dǎo)長期免疫記憶,。此外，有了足夠多樣的sgRNAs庫,，MAEGI即使面對持續(xù)的腫瘤進化和免疫編輯也可能保持有效,。

陳斯迪教授表示：“從理論上講，這個新系統(tǒng)應(yīng)該可以有效地治療多種癌癥,，包括那些目前對免疫療法有抗藥性的癌癥,。” 下一步,，該研究團隊將繼續(xù)優(yōu)化MAEGI,，為制造生產(chǎn)和患者臨床試驗做好準(zhǔn)備。

小結(jié)

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