HIV核酸定性檢測(cè)技術(shù),，其檢測(cè)過(guò)程分為核酸提取,、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA、PCR擴(kuò)增反應(yīng),、擴(kuò)增產(chǎn)物定性分和結(jié)果判定和完成報(bào)告單,。

　　核酸檢測(cè)具體流程如下：

　　1. 核酸提取

　　使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動(dòng)化儀器等商品化試劑或設(shè)備并按說(shuō)明書(shū)操作,。提取RNA時(shí)應(yīng)注意防止RNA降解,。DNA應(yīng)置于-20℃保存，RNA和需長(zhǎng)期保存的DNA應(yīng)置于-80℃保存,。

　　2. 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA

　　逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物,、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶,、RNA酶抑制劑,、DTT、緩沖液和適量無(wú)RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板,。在擴(kuò)增儀或水浴箱中,，在規(guī)定的溫度和時(shí)間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進(jìn)行第一輪擴(kuò)增反應(yīng),。逆轉(zhuǎn)錄cDNA合成反應(yīng)需使用逆轉(zhuǎn)錄引物,、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶,、RNA酶抑制劑,、DTT,、緩沖液和適量無(wú)RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴(kuò)增儀或水浴箱中,，在規(guī)定的溫度和時(shí)間下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),。使用商品化RT-PCR一步法試劑進(jìn)行第一輪擴(kuò)增反應(yīng)。

　　3. PCR擴(kuò)增反應(yīng)（使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法）

　　PCR反應(yīng)需使用引物,、dNTPs,、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液,、和適量無(wú)RNA/DNA酶超純水,、以及模板（DNA或cDNA）。在擴(kuò)增儀中,，按照設(shè)定的程序進(jìn)行擴(kuò)增,。使用二次擴(kuò)增的套式PCR擴(kuò)增方法。

　　4. 擴(kuò)增產(chǎn)物定性分析

　　擴(kuò)增產(chǎn)物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法,，與分子量標(biāo)準(zhǔn)比較,，判斷擴(kuò)增片段是否在預(yù)期的分子量范圍內(nèi)。其它擴(kuò)增產(chǎn)物分析方法還有限制性內(nèi)切酶酶切分析,、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等,。自動(dòng)化核酸擴(kuò)增儀使用酶聯(lián)比色分析或熒光探針雜交等原理測(cè)定。

　　5.結(jié)果判定和完成報(bào)告單

　?。?）實(shí)驗(yàn)成立的條件：每一次檢測(cè)需同時(shí)做兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照,、兩個(gè)陰性對(duì)照，只有陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增出預(yù)期的片段,、陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增出任何片段,、雙份平行樣品結(jié)果一致的情況下實(shí)驗(yàn)才成立，可以作出核酸陽(yáng)性或陰性反應(yīng)結(jié)果的判定,。

　?。?）HIV核酸檢測(cè)陽(yáng)性：發(fā)現(xiàn)核酸陽(yáng)性反應(yīng)，應(yīng)該重復(fù)采集樣品進(jìn)行復(fù)測(cè),，復(fù)測(cè)結(jié)果呈核酸陽(yáng)性反應(yīng)則判定為核酸陽(yáng)性,，復(fù)測(cè)結(jié)果為核酸陰性反應(yīng)則判為不確定結(jié)果，需進(jìn)一步隨訪檢測(cè),。

　?。?）HIV核酸檢測(cè)陰性：只可報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性。

　?。?）應(yīng)在完成檢測(cè)后5個(gè)工作日內(nèi)發(fā)出檢測(cè)報(bào)告,。