來源：石頭道科普

在之前介紹PSA,、HIV，HBV和HCV的過程中,，總能看到各種公司利用聯(lián)合檢測提高疾病的診斷性能,，如PHI，4KScore,，4代試紙條,，HBV&HIV聯(lián)合檢測等。本推送主要介紹目前常用的IVD聯(lián)合檢測技術平臺及其明星產品,。

談到免疫診斷,，大部分視角都關注化學發(fā)光、POCT等熱門領域,。這種技術平臺的發(fā)展往往更傾向于解決提高免疫檢測的靈敏度,、特異性、檢測區(qū)間,、檢測速度,、檢測通量等。但如果從疾病的角度或者檢測項目的角度看,，人們更愿意提高免疫診斷對疾病的診斷性能,，如減少假陽性和假陰性，縮短窗口期等,。聯(lián)合檢測是目前最常用也是非常容易想到的解決思路之一,。

在之前介紹PSA、HIV,，HBV和HCV的過程中,，總能看到各種公司利用聯(lián)合檢測提高疾病的診斷性能，如PHI,，4KScore,，4代試紙條,，HBV&HIV聯(lián)合檢測等。這種利用多種標志物以提高檢測性能的例子幾乎覆蓋每一種腫瘤檢測,、傳染病篩查,、感染確認等。聯(lián)合檢測有很多特殊的應用場景,，甚至是無法回避的場景,，如自身免疫疾病檢測、過敏原檢測等,。

試紙條技術,，即免疫層析法，其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶,，當該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品（尿液或血清）后,，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動,，當移動至固定有抗體的區(qū)域時,，樣品中相應的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的顏色,，從而實現(xiàn)特異性的免疫診斷,。目前試紙條的標記物形式多樣，有膠體金,、乳膠顆粒,、量子點、熒光物質,、上轉換顆粒和酶等,。

試紙條是POCT最簡單，也是應用最廣的技術平臺,，通過加入多種檢測線可以實現(xiàn)聯(lián)合檢測的目的,。最廣為人熟知的就是雅培HIV第四代試紙條，通過同時檢測HIV的抗體抗原實現(xiàn)HIV的快速檢測,，窗口期可縮短為15-20天,。

國內POCT企業(yè)龍頭廣州萬孚有人類免疫缺陷病毒抗體、丙型肝炎病毒抗體,、乙型肝炎病毒表面抗原,、梅毒螺旋體抗體聯(lián)合檢測試劑盒，其檢測原理就是膠體金法,。其主打的應用場景是手術前對患者進行乙肝,、丙肝、艾滋病,、梅毒的相關病原學檢查快速檢出“窗口期“患者,，為手術方案制定提供檢驗依據,，有效避免醫(yī)源性感染，保護住院病人及醫(yī)護人員的安全,。

免疫印跡（Western Blot,，WB）采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）對樣品中的蛋白質按照分子量進行分離,，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜,，NC）上,。固相載體可以吸附蛋白質,，并保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變,。轉移后的NC膜就稱為一個印跡（blot）,，用蛋白溶液（如BSA或脫脂奶粉溶液）封閉處理,，封閉NC膜上的非特異結合位點,。用目標蛋白的抗體（一抗）孵育NC膜,，只有待研究的蛋白質才能與一抗特異結合形成抗原抗體復合物，這樣清洗除去未結合的一抗后,，只有在目標蛋白上結合一抗,。用一抗處理過的NC膜再用標記的二抗孵育，帶有標記的二抗與一抗結合形成抗體復合物可以指示一抗的位置,，即是待研究的蛋白質的位置,，并根據顯色或發(fā)光的強度進行定量。

國外在這個技術上比較出名的有GE的免疫印跡,，自從1990年的第一代應用于免疫印跡技術的增強型化學發(fā)光（ECL?）檢測試劑—即Amersham? ECL試劑面世以來,，  GE Healthcare的產品手冊經歷了不斷的改進和優(yōu)化，包括了免疫印跡技術的相關需求,，涵蓋了從電泳和電轉移儀器到高靈敏度的檢測系統(tǒng)和軟件,。

另一項較為出名的是歐蒙的歐蒙印跡法?？赡芎芏嗳藢W蒙不是特別熟悉,，歐蒙是全球非常著名的免疫診斷企業(yè)，其拳頭產品是自身免疫疾病相關的檢測,，該系列產品連羅氏等巨頭都無法與其競爭,。我個人非常喜歡這樣的企業(yè)，專注某個領域做到極致,，是可以在巨頭林立的體外診斷市場生存下去并成為一方霸主的,。

蛋白芯片屬于微陣列芯片的一種。蛋白芯片技術的基本原理是將各種蛋白質有序地固定于滴定板,、濾膜和載玻片等各種載體上成為檢測用的芯片,。然后，用標記了特定熒光抗菌素體的蛋白質或其他成分與芯片作用,，經漂洗將未能與芯片上的蛋白質互補結合的成分洗去,，再利用熒光掃描儀或激光共聚焦掃描技術,，測定芯片上各點的熒光強度，通過熒光強度分析蛋白質與蛋白質之間相互作用的關系,，由此達到測定各種蛋白質功能的目的,。

國內研究該技術比較出名的有上海裕隆生物科技有限公司、上海銘源數康生物芯片有限公司和湖州數康生物科技有限公司,。裕隆生物具有強大的多種生物芯片(蛋白芯片,、基因芯片、液相芯片,、抗體芯片,、組織芯片、磁芯片等)開發(fā)能力,，自主創(chuàng)建了生物芯片載體處理技術,、點樣技術、標記技術,、洗滌技術,、檢測技術等，并開發(fā)了系列化產品,。下圖是裕隆生物的產品部分截圖,。

流式熒光技術又稱液態(tài)芯片技術(Luminex xMAP技術)，其整合了熒光編碼微球,、激光分析,、應用流體學及高速數字信號處理等多項最新科技，是美國Luminex公司于上世紀末開發(fā)出的新一代高通量發(fā)光檢測技術,。目前該技術已被廣泛應用于免疫分析,、核酸研究、酶學分析,、受體和配體識別等領域,，并得到各權威機構和醫(yī)學界的高度認可。

從免疫診斷看其技術原理,，該技術最關鍵的是以Luminex xMAP熒光編碼微球為核心,，結合免疫學原理進行抗原抗體反應，通過標記其它熒光分子如藻紅蛋白等,，運用激光進行熒光信號分析,、實現(xiàn)多指標并行檢測。因此其技術本身就具有高通量,、并行檢測的特點,。

我國也已有不少廠家將先進的流式熒光技術平臺用于臨床檢驗領域高端的體外診斷試劑開發(fā)和生產，如國內的透景生命（股票代碼：300642）,、益善生物及協(xié)和洛克等,。透景生命也開發(fā)出了多種聯(lián)合檢測試劑盒,。