（一）培養(yǎng)法

獲取合格的呼吸道標(biāo)本,，用特殊的液體培養(yǎng)基進(jìn)行3~7 d培養(yǎng),，培養(yǎng)基變色后轉(zhuǎn)入固體培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)至鏡下見到Mp典型菌落或經(jīng)基因、生化鑒定后判斷為Mp陽性,。Mp菌株生長緩慢,，需要經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)才出現(xiàn)陽性反應(yīng)，敏感度為34.78%,，Mp培養(yǎng)陽性的診斷特異度接近100%^[11],，并能對(duì)分離株進(jìn)行種屬鑒定、分型及藥敏實(shí)驗(yàn),，具有重要的臨床意義,。Mp專用培養(yǎng)基中必須含有葡萄糖作為代謝底物，同時(shí)還應(yīng)包括血清（作為膽固醇來源）,、酵母提取物以及pH顯色劑,。推薦使用SP4肉湯及瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行傳統(tǒng)法Mp培養(yǎng)。

目前有基于培養(yǎng)方法的快速檢測試劑盒,，其方法原理是Mp利用試劑中的高營養(yǎng)和快速生長因子迅速增殖,，產(chǎn)酸使試劑pH值降低，通過指示劑顏色變化來判斷Mp的存在,，或進(jìn)行藥敏分析,。快速培養(yǎng)Mp出現(xiàn)陽性結(jié)果的時(shí)間較短,，6~90 h不等,，與Mp生長傳代時(shí)間不符。有學(xué)者質(zhì)疑這種快速培養(yǎng)法的特異性,，認(rèn)為導(dǎo)致培養(yǎng)基快速出現(xiàn)陽性變色的原因是其他微生物污染而出現(xiàn)的假陽性,。如：患者帶菌或在標(biāo)本采集、運(yùn)輸,、接種等過程出現(xiàn)細(xì)菌或真菌污染,，而培養(yǎng)基中相應(yīng)抗菌素用量不足或含量不均勻也是導(dǎo)致細(xì)菌污染發(fā)生的因素。另外,，口腔酸堿度的影響,，如食物殘?jiān)⑺嵝燥嬃系?，培養(yǎng)操作過程中使用的材料,、環(huán)境的酸堿度均能改變培養(yǎng)基的顏色。對(duì)臨床高度懷疑Mp感染患兒的標(biāo)本，72 h培養(yǎng)陰性者建議繼續(xù)觀察至7 d^[12],，快速培養(yǎng)陽性應(yīng)采用分子生物學(xué)方法進(jìn)行病原學(xué)診斷確證,。

（二）肺炎支原體的直接檢測

采用免疫雙抗夾心的方法^[13]，取患者呼吸道拭子或吸取物,，采用熒光,、量子點(diǎn)、膠體金等標(biāo)記的鼠抗人Mp單克隆抗體,，異硫氰酸熒光素或顯色物標(biāo)記的羊抗鼠抗體IgG來檢測Mp抗原,，在熒光顯微鏡下觀察被特異性熒光標(biāo)記的Mp活躍性或肉眼看到顏色條帶來判斷是否感染。目前多利用高特異性地識(shí)別Mp的黏附相關(guān)P1蛋白單克隆抗體直接檢測Mp抗原,，有報(bào)道特異度和敏感度為100%和97.4%^[13],。此類方法方便快捷，但易受人為因素干擾,，如未取到感染細(xì)胞,、沒有選中合適的視野或其他病原及自身的交叉抗體干擾等，均會(huì)影響結(jié)果,。

（三）分子生物學(xué)

分子生物學(xué)檢測主要有DNA和RNA檢測兩大類,。該類方法具有高特異性、檢測速度快,、樣本周轉(zhuǎn)時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn),，為臨床診治提供明確依據(jù)。

1．DNA檢測技術(shù)：

基于DNA檢測技術(shù)的方法眾多,，主要有熒光定量PCR和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（loop-mediated isothermal amplification,，LAMP）兩種，其檢測樣本為痰,、鼻咽拭子,、支氣管肺泡灌洗液，檢測靶標(biāo)為Mp-DNA,，根據(jù)P1蛋白,、16S rRNA等目標(biāo)基因設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物。以DNA為靶標(biāo)的檢測技術(shù)靈敏度和特異性都能滿足臨床需求,。但是Mp死亡后其DNA仍可存在于部分患者體內(nèi),，時(shí)間達(dá)7周~7個(gè)月，且不易降解,，導(dǎo)致DNA檢驗(yàn)結(jié)果不能很好地用于治療效果的評(píng)估,。

2．RNA檢測技術(shù)：

RNA檢測技術(shù)是基于核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光檢測技術(shù)相結(jié)合的一種核酸檢測方法，簡稱實(shí)時(shí)熒光恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（simultaneous amplification and testing,，SAT）。其采用的靶標(biāo)為16S rRNA，在Mp中以多拷貝形式存在（多達(dá)10⁴拷貝量）,，其靈敏度和準(zhǔn)確性與DNA檢測方法相比都有很大提高^[14],。由于RNA隨病原體死亡而降解，可作為評(píng)價(jià)Mp感染轉(zhuǎn)歸,、藥物療效的指標(biāo),，其檢測結(jié)果與Mp的感染嚴(yán)重程度相關(guān)性較好，因此Mp的RNA檢測是目前早期快速診斷,、判斷療效的最好方法之一^[15],。

對(duì)于上述病原學(xué)檢測的方法，均需檢測人員嚴(yán)格掌握檢驗(yàn)前質(zhì)量,，尤其是標(biāo)本采集,、運(yùn)輸、保存,、接種,、培養(yǎng)方法及操作過程的規(guī)范，以期獲得最準(zhǔn)確檢測結(jié)果,。

通常情況下，人體感染Mp后能產(chǎn)生IgM,、IgA,、IgG類抗體。IgM抗體一般在初次感染1周內(nèi)開始升高,，2~3周達(dá)到高峰,，4周時(shí)下降，2~3月降至最低^[16],。IgA抗體在Mp感染早期迅速上升,，由IgM型轉(zhuǎn)換產(chǎn)生，7~14 d至峰值水平,，回落比IgM或IgG更早,。IgA抗體變化與IgM一致，成人Mp感染IgA陽性率高,，與IgM檢測相比,，兒童IgA檢出率較低^[17,18]。IgG較IgM和IgA出現(xiàn)晚,，一般于感染后14 d左右出現(xiàn),，濃度峰值一般在感染后的第5周，具有較長的維持時(shí)間^[20],。

與病原學(xué)檢測方法比較,，抗體產(chǎn)生有時(shí)間窗和個(gè)體差異,，但抗體檢測結(jié)果不受抗生素治療的影響。臨床上Mp血清學(xué)診斷常用方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay,，ELISA）,、顆粒凝集法（particle agglutination，PA）,、免疫膠體金技術(shù)（immune colloidal gold technique,，GICT）、化學(xué)發(fā)光法（chemiluminescent immunoassay,，CLIA）,、間接免疫熒光試驗(yàn)（indirect immunofluorescence assay，IFA）,。用于抗體檢測試劑的Mp抗原選擇非常重要,，它決定了檢測的敏感度和特異度。目前主要有4大類抗原,，Mp全細(xì)胞裂解物（全菌體抗原）,、蛋白提取物、膜制備物,、糖脂提取物,。Mp全菌體抗原包括細(xì)胞膜的糖脂、蛋白質(zhì)等成分,，特異度和敏感度較差,，與人體多種組織細(xì)胞膜、某些細(xì)菌（如流感嗜血桿菌,、奈瑟腦膜炎球菌等）以及其他支原體都會(huì)出現(xiàn)非特異性交叉反應(yīng),；黏附相關(guān)蛋白，如P1蛋白,、P30蛋白,、P116蛋白、重組AtpD蛋白,、重組P1-C蛋白等是重要的免疫原,，尤其P1蛋白，能刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答,，是Mp診斷的重要抗原,，重組P1蛋白的特異度和敏感度可以達(dá)到97.7%和85.0%^[16]。

下面介紹各類血清學(xué)檢測方法的特點(diǎn),。

（一）ELISA

ELISA作為實(shí)驗(yàn)室常用的雙抗體夾心法,，利用其基本原理檢測人血清中Mp的IgM、IgG,、IgA各類型抗體,，具有較高的敏感度和特異度,，其包被的Mp抗原來源多樣，建議選擇敏感度和特異度均較高的抗原包被試劑盒檢測,。

（二）PA

PA的原理是將Mp細(xì)胞膜（可溶性抗原）致敏或吸附在一定大小的顆粒狀載體的表面,，與人血清中存在的Mp抗體結(jié)合后，在有電介質(zhì)存在的適宜條件下,，可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng),。目前常用作載體的顆?；蛭⑶蚨酁槿斯ず铣苫蛱烊桓叻肿硬牧现瞥傻模缑髂z顆粒,、聚苯乙烯膠乳微球等,。由于載體顆粒增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積，當(dāng)顆粒上的抗原與微量抗體結(jié)合后,，產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng),。該方法檢測有效性的指標(biāo)是試劑盒內(nèi)提供的陽性對(duì)照滴度達(dá)到1∶320，抗體滴度檢測范圍為1∶40~1∶10 240,?；颊哐錗p抗體滴度≥1∶160作為Mp近期或急性感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)；恢復(fù)期和急性期Mp抗體滴度呈4倍及以上增高或減低時(shí),，可確診Mp感染^[18,20],。PA檢測Mp總抗體，方法重復(fù)性好,，特異度,、敏感度佳，治療前后雙份血清滴度的變化更有利于診斷,。

（三）GICT

GICT是一種以新型的免疫標(biāo)記——膠體金作為示蹤標(biāo)志物,，應(yīng)用抗原抗體特異性結(jié)合的免疫反應(yīng)原理檢測Mp抗體，主要有免疫層析法和免疫滲濾法,?；驹硎欠磻?yīng)板上的Mp抗原可與待測樣本中Mp抗體結(jié)合，再與膠體金標(biāo)記的抗人IgM抗體結(jié)合并顯色,，形成肉眼可見的紅色斑點(diǎn)或條帶判斷陽性,。GICT檢測Mp的IgM抗體，研究顯示兒童MP-IgM陽性與PA滴度1∶160和≥1∶320的符合率均為95%,；單次測定Mp-IgM陽性對(duì)診斷兒童Mp近期感染有價(jià)值,，適合門診的快速檢測^[21]。目前是定性試驗(yàn),，患者抗體含量較低時(shí)可能造成漏檢,，且抗體在部分治愈患者體內(nèi)持續(xù)存在,，使得對(duì)短期內(nèi)再次感染的陽性判斷造成困擾。

（四）CLIA

CLIA的原理是將發(fā)光物質(zhì)直接標(biāo)記在Mp抗原上,，或免疫復(fù)合物上的酶作用于發(fā)光底物,，通過大型發(fā)光儀測量光量子產(chǎn)額，定量,、成批地檢測Mp的IgM,、IgG，目前此方法的應(yīng)用,、與常用抗體檢測方法的比對(duì)研究較少,，需進(jìn)一步積累數(shù)據(jù)。

（五）IFA

IFA的原理是用標(biāo)本血清和已知的Mp抗原相互作用,，經(jīng)溫育后洗滌,。若待檢測標(biāo)本中含有相應(yīng)抗體，則與Mp抗原發(fā)生特異性結(jié)合且不會(huì)被洗掉,，與標(biāo)記有熒光素的抗球蛋白抗體結(jié)合,，在顯微鏡下觀察綠色熒光。該方法主要檢測Mp IgM抗體,，特異度和敏感度較好,，具有對(duì)照明顯、結(jié)果判讀和操作簡單等優(yōu)點(diǎn)^[16],。但該實(shí)驗(yàn)易受人為判斷熒光結(jié)果影響,，包被抗原含量不足可能會(huì)產(chǎn)生假陰性，體內(nèi)含有類風(fēng)濕因子,、多種自身免疫性抗體等與包被抗原有交叉反應(yīng)可能出現(xiàn)假陽性,。

（六）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（complement fixation assay，CFA）

CFA的原理是利用Mp抗原抗體反應(yīng)消耗補(bǔ)體從而使補(bǔ)體參與指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)的濃度降低或消失,。CFA檢測抗Mp的總抗體,，一般認(rèn)為滴度>1∶64或恢復(fù)期血清呈4倍以上升高有診斷意義。與其他檢測方法相比,，CFA采用糖脂抗原,，特異性較差，操作過程中存在較多干擾,，目前已經(jīng)很少用于Mp臨床診斷,。

（七）冷凝集試驗(yàn)（cold agalutination test，CAT）

多年前CAT應(yīng)用于Mp感染的實(shí)驗(yàn)室診斷,，血清冷凝集素在感染1周開始升高,，4周達(dá)高峰，第6周下降或者消失,，紅細(xì)胞CAT陽性,，效價(jià)大于1∶32,，恢復(fù)期效價(jià)增加4倍有診斷意義。但冷凝集素增高也可見于其他疾病,，如流行性感冒,、傳染性單核細(xì)胞增多癥、風(fēng)疹等,，故CAT的特異性差,，現(xiàn)已逐漸被其他Mp的檢測方法取代。

（八）實(shí)驗(yàn)室Mp血清學(xué)檢測結(jié)果的判讀

1．顆粒凝集試驗(yàn)抗體滴度≥1∶160：

提示近期或現(xiàn)癥感染,。

2．只有IgM抗體（ ）：

提示近期感染,。

3．只有IgM及IgA（ ）：

提示現(xiàn)癥感染。

4．只有IgG抗體（ ）：

提示既往感染,。

5．IgM、IgG及l(fā)gA均為（ ）/IgM及IgG（ ）/lgA及l(fā)gG（ ）：

提示現(xiàn)癥感染或近期感染,。

6．間隔2~4周雙份血清抗體亞型轉(zhuǎn)化/血清抗體水平4倍及以上增加或降低：

確診Mp感染,。

評(píng)價(jià)血清學(xué)檢測結(jié)果時(shí)需要結(jié)合患者的臨床病程、基礎(chǔ)狀況以及年齡等因素綜合考慮,，如：免疫功能低下,、缺陷的人群、產(chǎn)生抗體能力較低的嬰幼兒,，可能不產(chǎn)生或產(chǎn)生低滴度的抗體^[22,23],。抗體在部分治愈患者體內(nèi)會(huì)持續(xù)陽性,，期間再次感染的確診應(yīng)做Mp的抗體滴度或RNA檢測以佐證,。

因Mp培養(yǎng)條件要求苛刻,，生長緩慢,，不推薦臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)做體外藥物敏感性試驗(yàn)。美國臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（CLSI）2011年頒布了支原體體外藥敏測定即M43-A指南9,，可用于Mp耐藥流行病學(xué)調(diào)查和分析^[24],。指南推薦微量稀釋法測定Mp最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）,，其敏感/耐藥的判斷標(biāo)準(zhǔn)（MIC值）：左氧氟沙星≤1 mg/L,，莫西沙星、紅霉素及阿奇霉素≤0.5 mg/ L,，四環(huán)素≤2 mg/L為敏感,；紅霉素及阿奇霉素>1 mg/L為耐藥^[10]，質(zhì)控菌株為肺炎支原體FH（ATCC15531）,。

Mp重癥感染合并多種肺外并發(fā)癥且藥物治療不佳的病例報(bào)道日漸增多,。有研究顯示,，23S rRNA結(jié)構(gòu)域Ⅱ區(qū)和Ⅴ區(qū)基因位點(diǎn)突變可導(dǎo)致抗生素與核糖體親和力下降而引起耐藥，基因突變導(dǎo)致的藥物結(jié)合靶點(diǎn)改變是Mp對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類耐藥的最重要原因^[25],，結(jié)構(gòu)域Ⅴ區(qū)A2063G,、A2064G突變導(dǎo)致高水平耐藥，A2067G,、C2617G突變發(fā)生低水平耐藥^[26],。臨床上可以參考Mp 23S rRNA基因突變位點(diǎn)進(jìn)行耐藥分析^[27]。

Mp檢測的質(zhì)量控制是獲得準(zhǔn)確可靠結(jié)果的前提,，檢驗(yàn)的質(zhì)量控制從檢驗(yàn)前、中,、后質(zhì)量控制三部分闡述,。

（一）檢驗(yàn)前質(zhì)量控制

檢驗(yàn)前質(zhì)量控制主要是樣本采集、運(yùn)輸,、保存過程的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)化,，應(yīng)作為重點(diǎn)培訓(xùn)和規(guī)范內(nèi)容推廣。

病原學(xué)檢測標(biāo)本采集盡可能采集多種類型的標(biāo)本和（或）連續(xù)多個(gè)時(shí)間點(diǎn)采集不同部位的標(biāo)本,，以滿足最低檢測閾值采集量,、陽性率和多種檢測方法聯(lián)合檢測的需求。咽,、鼻,、喉拭子最易獲得，痰液需判斷是否合格,，肺泡灌洗液的雜菌污染較少,，不同標(biāo)本的病原學(xué)檢測靈敏度和特異性研究報(bào)道不一致，40%~80%不等^[28,29],，晨痰對(duì)呼吸道支原體的檢測價(jià)值較高,，可依據(jù)臨床實(shí)際情況選擇，具體操作規(guī)范見表1,。用做核酸檢測的樣本容器不可含核酸酶,，以防止核酸降解；容器內(nèi)應(yīng)預(yù)裝具有防核酸降解功能的保存液,，有利于標(biāo)本保存和轉(zhuǎn)運(yùn),。呼吸道標(biāo)本室溫下30 min內(nèi)送檢，4 ℃環(huán)境下2~4 h內(nèi)送檢,，標(biāo)本4 ℃保存不應(yīng)超過48 h,，預(yù)計(jì)延遲送檢的標(biāo)本應(yīng)在－70 ℃條件下保存^[30]。血液應(yīng)盡可能采集急性期和至少間隔2周的恢復(fù)期雙份血清。

（二）檢驗(yàn)中質(zhì)量控制

檢驗(yàn)中質(zhì)量控制主要包括檢測方法的選擇,、性能驗(yàn)證,、室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)四方面,。

1．檢測方法的選擇：

鑒于Mp獨(dú)特的病原學(xué)特點(diǎn),、病原學(xué)檢測的合格取材問題、血清學(xué)檢測的時(shí)間窗和機(jī)體免疫條件影響以及不同檢測方法的敏感度,、特異度的不同,，采用一種檢測方法無法達(dá)到最終確診，因此病原學(xué)與血清學(xué)聯(lián)合診斷仍然是目前提倡的Mp感染診斷策略^[11],。本共識(shí)給出分等級(jí)推薦的檢測方法,，應(yīng)用時(shí)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)的優(yōu)劣勢、貢獻(xiàn)度和實(shí)驗(yàn)室能力選擇,。

一級(jí)推薦方法：Mp病原學(xué)采用分子生物學(xué)RNA檢測,；Mp血清學(xué)檢測方法采用顆粒凝集法抗體滴度測定。

二級(jí)推薦方法：Mp病原學(xué)采用分子生物學(xué)DNA檢測,；Mp血清學(xué)檢測方法采用ELISA抗體分型檢測,。

三級(jí)推薦方法：Mp病原學(xué)采用培養(yǎng)法或直接檢測法；Mp血清學(xué)檢測方法采用間接免疫熒光法,、免疫膠體金法；非特異性血清學(xué)檢測方法,。

一級(jí)為最佳方法,，陽性可確診Mp感染，三級(jí)推薦方法中的Mp直接檢測法和GICT對(duì)門急診患者M(jìn)p感染診斷的快速初篩是有價(jià)值的,，進(jìn)一步診斷需一級(jí),、二級(jí)推薦方法的確認(rèn)或動(dòng)態(tài)復(fù)檢。建議有能力的實(shí)驗(yàn)室開展一級(jí),、二級(jí)推薦方法,，病原學(xué)培養(yǎng)法雖不作為常規(guī)臨床診斷推薦方法，但其真陽性可確診Mp感染,，分離株對(duì)進(jìn)行種屬鑒定,、耐藥基因檢測及藥敏實(shí)驗(yàn)具有重要的臨床意義。CLIA因應(yīng)用不廣泛,，暫不列入推薦等級(jí),。

目前國內(nèi)關(guān)于Mp檢測的各類試劑盒生產(chǎn)廠家眾多，抗原,、抗體選擇不同,，方法的敏感度和特異度不同，使判斷結(jié)果存在差異，因此實(shí)驗(yàn)室應(yīng)至少開展兩種及以上不同的檢測方法以彌補(bǔ)相互之不足,，并且同一類檢測方法應(yīng)進(jìn)行兩種及以上試劑的比對(duì)試驗(yàn),，選取結(jié)果更好的作為最終使用試劑。

2．檢測方法的性能驗(yàn)證：

Mp的實(shí)驗(yàn)室檢測項(xiàng)目均需開展性能驗(yàn)證,，即是檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的保證,，也是ISO15189對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室的要求。血清學(xué)項(xiàng)目的檢測應(yīng)按照定性檢測項(xiàng)目的性能驗(yàn)證指南進(jìn)行,，分子診斷方法的檢測按照分子生物學(xué)檢測方法的性能驗(yàn)證指南進(jìn)行,。

3．室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)：

按照ISO15189對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室的要求，Mp所有檢測項(xiàng)目需要開展室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng),。

室內(nèi)質(zhì)控物的選擇：陰,、陽性質(zhì)控物為外部對(duì)照，用于監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的有效性,，實(shí)驗(yàn)室在選擇時(shí)應(yīng)考慮類型（宜選擇人血清基質(zhì),，避免工程菌或動(dòng)物源性等的基質(zhì)）、濃度（弱陽性質(zhì)控物濃度宜在2~4倍臨界值左右,，陰性質(zhì)控物濃度宜在0.5倍臨界值左右）,、穩(wěn)定性（宜選擇生產(chǎn)者聲明在一定保存條件下2~8 ℃或-20 ℃以下，有效期為6個(gè)月以上）,、均一性,。

室內(nèi)質(zhì)控頻率：每檢測日或分析批，應(yīng)使用弱陽性和陰性質(zhì)控物進(jìn)行質(zhì)控,。

室內(nèi)質(zhì)控物位置：不能固定而應(yīng)隨機(jī)放置且應(yīng)覆蓋檢測孔位（標(biāo)本間隔）,。

室內(nèi)質(zhì)控評(píng)定規(guī)則：肉眼判斷：陰性、陽性質(zhì)控物的檢測結(jié)果分別為陰性,、陽性即在控,；滴度判斷：陰性質(zhì)控物必須陰性，陽性質(zhì)控物結(jié)果在上下1個(gè)滴度內(nèi)為在控,。

判斷規(guī)則：根據(jù)不同項(xiàng)目可以采用肉眼判斷的規(guī)則,，也可采用統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控規(guī)則，至少利用一個(gè)偶然誤差及一個(gè)系統(tǒng)誤差規(guī)則,。

室間質(zhì)評(píng)：目前,，國家及省市級(jí)臨檢中心尚未開展針對(duì)Mp項(xiàng)目的室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃。因此,，Mp檢驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)采用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)的方式進(jìn)行評(píng)價(jià),，比對(duì)實(shí)驗(yàn)應(yīng)滿足如下要求：（1）規(guī)定比對(duì)實(shí)驗(yàn)的選擇原則；（2）樣本數(shù)量：至少5份,，包括陰性和陽性,；（3）頻率：至少每年2次,；（4）判定標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)有≥80%的結(jié)果符合要求；（5）結(jié)果不一致時(shí),，應(yīng)分析不一致的原因,，必要時(shí)，采取有效的糾正措施,，并定期評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)對(duì)其質(zhì)量的改進(jìn)作用,，保留相應(yīng)的記錄。

（三）檢驗(yàn)后質(zhì)量控制

檢驗(yàn)后質(zhì)量控制主要是檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的保證,、檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告和發(fā)布,，一個(gè)實(shí)驗(yàn)室具備多種檢驗(yàn)方法時(shí)，要注意報(bào)告發(fā)出時(shí)的邏輯性,。當(dāng)檢測結(jié)果不相符時(shí),，應(yīng)查找檢驗(yàn)前、中的質(zhì)量問題,；排除檢測導(dǎo)致的假陰性和假陽性后,，分析如下。

1．雙陽性結(jié)果：

血清學(xué)檢測結(jié)果陽性,，分子生物學(xué)檢測結(jié)果陽性：基本可確診為Mp感染,。此類患者，發(fā)病時(shí)間多超過一周,，抗體已經(jīng)產(chǎn)生,，后期進(jìn)行療效觀察時(shí)可采用RNA檢測。

2．單陽性結(jié)果：

血清學(xué)檢測結(jié)果陰性,，分子生物學(xué)檢測結(jié)果陽性：基本可確診為Mp早期感染,。其一，發(fā)病時(shí)間較短,，抗體尚未產(chǎn)生；其二,，免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善,、免疫功能低下，未產(chǎn)生抗體或抗體滴度較低,?？贵w效價(jià)4倍變化可進(jìn)一步確證Mp感染。

血清學(xué)檢測結(jié)果陽性,，分子生物學(xué)檢測結(jié)果陰性：需依據(jù)抗體陽性類型和滴度來判斷Mp的現(xiàn)癥或既往感染,，多為治療后的既往感染。

3．雙陰性結(jié)果：

血清學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測結(jié)果均陰性,，Mp感染的可能性很小,，需要進(jìn)一步鑒別診斷時(shí)可監(jiān)測抗體滴度或重新采樣,。

本共識(shí)規(guī)范了兒童呼吸道Mp感染的實(shí)驗(yàn)室診斷方法的類型,、概念和價(jià)值,，旨在根據(jù)患者現(xiàn)癥和既往、門診和住院,、篩查和確診等不同的感染情況選擇不同的檢測方法,，結(jié)合患者臨床癥狀、體征以及胸片等其他輔助檢查,，同時(shí)對(duì)患者年齡,、全身狀況、用藥,、病程等綜合判斷,，為臨床Mp感染的診斷提供合理、經(jīng)濟(jì),、高效的參考建議,。經(jīng)歸納總結(jié)形成Mp實(shí)驗(yàn)室診斷流程圖，見圖1,。

（馬麗娟,、張泓、孫紅妹　執(zhí)筆）

參與編寫的專家（按姓氏漢語拼音排序）：葛夢(mèng)蕾（首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)中心）,；賈偉（寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心）,；江詠梅（四川大學(xué)華西第二醫(yī)院檢驗(yàn)科）；蔣玉紅（青島市婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；李貴霞（河北省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；林書祥（天津市兒童醫(yī)院兒科研究所）；馬麗娟（首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)中心）,；莫麗亞（湖南省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)中心）,；渠巍（貴陽市婦幼保健院/貴陽市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；尚世強(qiáng)（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)中心）,；孫紅妹（首都兒科研究所細(xì)菌研究室）；楊銘華（哈爾濱市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；張泓（上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；張樂海（山東大學(xué)齊魯兒童醫(yī)院科教外事科）。

參與征求意見的專家（按姓氏漢語拼音排列）：陳紅兵（南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；成玲（福建省婦幼保健院醫(yī)院感染管理科）,；段榮（江西省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；樊茂（昆明醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）；傅啟華（上海兒童醫(yī)學(xué)中心檢驗(yàn)科）,；黃晶（吉林大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；馬東禮（深圳市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）；馬慧英（青海紅十字醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；強(qiáng)榮（西北婦女兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)遺傳中心）,；阮強(qiáng)（中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛檢驗(yàn)科）；佘尚揚(yáng)（廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院/兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；石磊（蘭州大學(xué)第二醫(yī)院/甘肅省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心）,；宋文琪（國家兒童醫(yī)學(xué)中心首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院檢驗(yàn)中心）；孫立穎（北京大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；田禮軍（徐州市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；王潔（海南省婦幼保健院/兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）；翁瑩（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；吳亦棟（杭州市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；徐錦（復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心）；向贇（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；楊治理（內(nèi)蒙古自治區(qū)婦幼保健院/兒童醫(yī)院/婦產(chǎn)醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；張文利（烏魯木齊兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）；趙銳（山西省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；趙曉明（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科實(shí)驗(yàn)室）,；張鵬輝（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）；鄭曉群（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院育英兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）,；周珍文（廣州市婦女兒童醫(yī)療中心檢驗(yàn)科）,；朱宏（蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科）。