NTRK基因包含NTRK1,、NTRK2和NTRK3，分別負(fù)責(zé)原肌球蛋白受體激酶 (TRK) 家族蛋白TRKA TRKB和TRKC的合成,。NTRK基因與另一個(gè)不相關(guān)的基因融合在一起,，TRK融合蛋白將處于持續(xù)活躍狀態(tài)，引發(fā)下游信號(hào)通路永久性級(jí)聯(lián)反應(yīng),，從而驅(qū)動(dòng)腫瘤發(fā)生,。NTRK基因融合可發(fā)生在身體任何部位，在多種成人和兒童的實(shí)體瘤中均有發(fā)現(xiàn),，NTRK1/2/3融合突變占比分別為45%,、2%和53%。特別的地方在于,，NTRK融合在常見(jiàn)癌癥類(lèi)型如結(jié)腸癌和肺癌中出現(xiàn)的頻率很低,，均不足5%；在部分罕見(jiàn)癌癥類(lèi)型如先天性腎瘤,、嬰兒肉瘤,、唾液腺癌和分泌型乳腺癌等癌種中有極高的突變率，個(gè)別癌種出現(xiàn)頻率大于90%,，因此具有極高的臨床應(yīng)用價(jià)值,。

與我們熟知的ALK、ROS1等基因融合的檢測(cè)方法一樣,，NTRK基因融合的檢測(cè)方法也包括熒光原位雜交 (FISH),、免疫組化 (IHC),、熒光定量PCR (RT-PCR)和高通量測(cè)序 (NGS)等方法。

FISH往往被認(rèn)為是檢測(cè)融合基因的金標(biāo)準(zhǔn),，但是一組FISH探針通常只能用于一種基因的融合突變檢測(cè),，用FISH同時(shí)實(shí)現(xiàn)多個(gè)融合基因中伙伴基因的檢測(cè)，成本和時(shí)間效率上來(lái)說(shuō)并不合適,。對(duì)于IHC法，目前文獻(xiàn)報(bào)道的兩種Pan-TRK抗體存在靈敏度低或陽(yáng)性預(yù)測(cè)值低的問(wèn)題,，還需進(jìn)一步優(yōu)化,。對(duì)于FISH和IHC來(lái)說(shuō)，檢測(cè)樣本類(lèi)型必須為FFPE樣本,，而且不能識(shí)別新的融合基因伴侶或解決復(fù)雜的結(jié)構(gòu)重排,，這也是導(dǎo)致假陰性結(jié)果的主要原因，所以在臨床應(yīng)用上有很大的不確定性和局限性,。

RT-PCR法靈敏度高,，檢測(cè)樣本選擇也較為靈活，但是只可檢測(cè)已知突變,，且NTRK融合斷點(diǎn)可位于外顯子和內(nèi)含子,，三種亞型較長(zhǎng)的基因序列造成了融合斷點(diǎn)的多變性，給RT-PCR的體系設(shè)計(jì)造成極大的挑戰(zhàn),。

與傳統(tǒng)方法相比,，基于NGS技術(shù)的檢測(cè)方法不僅可以檢測(cè)組織樣本中的NTRK基因融合，同時(shí)也可以通過(guò)血漿和胸水等多種樣本檢測(cè)基因融合狀態(tài),。此外,，NGS檢測(cè)技術(shù)靈敏度也遠(yuǎn)高于目前傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)，可以檢出0.1%的融合突變,，并可以進(jìn)行DNA,、RNA多層面檢測(cè)以確保檢測(cè)準(zhǔn)確性。NCCN指南更新參考的《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》對(duì) NTRK 基因融合陽(yáng)性患者（55例）的研究中 (PMID：29466156),，對(duì)NTRK基因融合的檢測(cè),，使用的方法就是NGS（50例）和FISH（5例）。由此可見(jiàn)NGS在融合基因檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值,。

NGS用于NTRK基因融合檢測(cè)可分為DNA-seq與RNA-seq兩種方案,，即分別針對(duì)DNA與RNA樣本進(jìn)行檢測(cè)?？紤]到融合基因的斷點(diǎn)一般都位于內(nèi)含子區(qū)域,，對(duì)于一些內(nèi)含子序列較長(zhǎng)的基因，比如NTRK2和NTRK3,，通過(guò)DNA全面覆蓋各類(lèi)融合突變比較困難,。如果用RNA的話,，只要找出異常的外顯子拼接就可以了，很容易就能解決這一問(wèn)題,。而且一部分患者即便在DNA水平檢測(cè)到NTRK融合陽(yáng)性,，也不一定產(chǎn)生TRK融合蛋白，因此使用靶向藥物依舊可能無(wú)效,，而RNA測(cè)序得到的融合基因都是有可能表達(dá)出蛋白的,，因此對(duì)臨床的指導(dǎo)意義更為明確。大量的實(shí)驗(yàn)早已證明,，RNA-seq更適合臨床樣本的融合基因檢測(cè),。

QIAseq Targeted RNAscan Panel通過(guò)單端特異性引物延伸 (Single Primer Extension, SPE) 技術(shù)結(jié)合完善的優(yōu)化擴(kuò)增體系，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)區(qū)域的擴(kuò)增,，確保擴(kuò)增結(jié)果均一性的顯著提升,。此外，在每條原始模板上引入的特異分子條形碼 (Unique Molecular Indices, UMI),，有效解決PCR擴(kuò)增所帶來(lái)的偏倚,，為基因融合檢測(cè)的準(zhǔn)確性、靈敏性及全面性提供了前所未有的保障,。

QIAseq Targeted RNAscan Panel除了支持研究者自行選擇靶點(diǎn)進(jìn)行定制外,，還可以通過(guò)加入引物的方式任意引入新的檢測(cè)靶點(diǎn)，隨時(shí)對(duì)Panel進(jìn)行調(diào)整,，而不需要體系優(yōu)化,，非常適合作為標(biāo)準(zhǔn)化流程進(jìn)行推廣。