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我是怎么預測lncrna的靶基因的

 生物_醫(yī)藥_科研 2019-01-18

首先,,這是一篇充滿銅臭味的推文,。對于一個研究炎癥的課題組,老師肯花錢讓我們做lncrna的研究,,我是滿懷感激的,,lncrna雖不及外泌體、泛素化這些國自然上的熱門話題那么火熱,,但依然還是有它的地位在的,。可是,,開始的開始,,我們還是小白,我剛進實驗室的時候,,連什么是lncrna都不知道,,更何況是讓我去找它的靶基因??墒悄銈兌?,導師們特別喜歡把lncrna和通路聯系起來,,在那個我還不知道實驗萬事屋的年代,我一點點的查,,一點點的找,,后來,我終于學會了如何去愛,。,。。,。lncrna,。。,。,。


lncRNAs作用范圍廣泛,機制非常復雜,,我們可以根據lncRNA不同的作用模式——順式(cis)和反式(trans),,比如Signal,Decoy,,Duide,,Scaffold分析,也可以根據lncRNA與不同的分子分為DNA,、RNA和蛋白的相互作用,,從轉錄和轉錄后水平分析。 


一,、 根據順式(cis)和反式(trans)的作用模式來預測


(來自文獻圖片,,RNA聚合酶轉錄后得到一個與調控蛋白相關的LncRNA,從而影響附近區(qū)域的編碼基因


比如說,,科學家對cis作用靶基因預測,,認為LncRNA的功能與其相鄰的蛋白編碼基因相關,位于編碼蛋白上下游的LncRNA可能與啟動子或者共表達基因的其他順式作用元件有交集,,從而在轉錄時或者轉錄后水平對基因的表達進行調控,。判斷一個LncRNA具有Cis調控作用通常要同時滿足以下幾個條件( 可以理解成是一種近距離的正反饋或負反饋):

 

1.  附近的基因表達情況與其保持一致;

2.  該基因失活后會影響周圍基因的表達,;

3.  會影響附近同一位點的基因表達,。


滿足以上的條件后,首先找出位于其上游或者下游的編碼蛋白基因,,通過對編碼蛋白的功能富集分析,,從而預測LncRNA的主要功能,為后續(xù)Cis作用分析打下基礎(大部分公司會提供這類信息)。


Trans作用靶基因預測

(來自文獻圖片,,LncRNA與DNA結合蛋白相關聯,,并調控相關靶基因的表達


Trans作用靶基因預測基本原理認為LncRNA的功能跟編碼基因的位置關系沒有關系,而與其共表達的蛋白編碼基因相關,。也就是說,,當LncRNA與一些距離較遠的基因在表達量上存在正相關或負相關的情況時,,就可以通過樣本間lncRNA與蛋白編碼基因的表達量相關性預測其靶基因,。雖然說,Trans作用靶基因研究價值更大,,但是如果的你的樣本量太少,,建議不要選擇Trans,結果并不是很具有代表性,。



二,、根據lncRNA結合的核酸序列來預測


實際上這種方式是最容易想到的,也是文獻中最多看到的,。因為lncRNA也是核酸,,而核酸與核酸之間是有堿基互補配對的,不管是lncRNA與microRNA還是mRNA,,都可以通過以下特性進行預測:


1,、lncRNA-microRNA-mRNA


這里適用的模式是lncRNA可以作為microRNA sponge吸附在microRNA上,或者進一步通過ceRNA的作用機制調控靶基因,,原理都是microRNA與lncRNA和mRNA的序列結合,,大家可以通過starbase(http://starbase./)這個網站進行查詢。



2,、lncRNA-mRNA


lncRNA與mRNA之間的直接互補也能幫我們預測靶基因,,比較常見的是反義lncRNA(Antisense lncRNA)與mRNA結合形成RNA二聚體,保護mRNA使之更難被RNA酶降解,。因此這種模式來預測靶基因的原理就是預測lncRNA序列與mRNA序列結合的自由能,,自由能越小,越容易結合,。師姐之前推薦過一個網站,,可以在線查詢lncRNATargets(http://www.:8001/lrt/),但是我從來沒有打開過,,(所以真的是一篇一篇文獻查的,。


三、根據蛋白的結合特性來預測


lncRNA與蛋白的結合也有一定規(guī)律,,比如RNA結合蛋白,,因此,我們可以依據這些規(guī)律預測lncRNA的結合蛋白,比如工具包括RBPDB(http://rbpdb.ccbr./index.php),、RNAcommender(http://rnacommender.disi./)等,。


不過,如果有money,,上面這些都是可以交給公司來做的,。所以,這是一篇充滿銅臭味的推文,。



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