作者：謝鍵,、楊紅瑋、葉燚,、孫毅

血細(xì)胞分析儀的校準(zhǔn)通常包含白細(xì)胞（WBC）,、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）,、紅細(xì)胞（HCT/MCV）和血小板（PLT）這5個指標(biāo)^[1],。近年來，隨著帶有網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測功能的血細(xì)胞分析儀在臨床上的普遍應(yīng)用,，網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)正在從傳統(tǒng)的手工染色鏡檢法轉(zhuǎn)變?yōu)閮x器法,。

2011年，《網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的參考方法》正式頒布實(shí)施,，為網(wǎng)織紅細(xì)胞的計數(shù)校準(zhǔn)提供了依據(jù),。但是，該方法仍然為手工計數(shù)法,，不能滿足網(wǎng)織紅細(xì)胞自動化檢測校準(zhǔn)的需求，新的網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)參考方法正由國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會等國際性標(biāo)準(zhǔn)化組織研究中^[2],。

網(wǎng)織紅細(xì)胞是成熟紅細(xì)胞的前期,，隨著細(xì)胞成熟，網(wǎng)織紅細(xì)胞逐漸丟失遺傳物質(zhì)RNA,，直至完全不含RNA從而達(dá)到成熟狀態(tài),。由于從成熟紅細(xì)胞到網(wǎng)織紅細(xì)胞是一個漸變過程，用熒光法測量時熒光信號逐漸增強(qiáng),，因此可通過該信號的強(qiáng)度判斷細(xì)胞的成熟度,。

白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）,、血紅蛋白含量（HGB）,、紅細(xì)胞壓積（HCT/MCV）和血小板計數(shù)（PLT）等參數(shù)，可以使用校準(zhǔn)物通過直接調(diào)整校準(zhǔn)系數(shù)進(jìn)行校準(zhǔn),。但網(wǎng)織紅細(xì)胞因具有在高熒光,、中熒光和低熒光強(qiáng)度區(qū)連續(xù)分布的特殊性質(zhì),，用校準(zhǔn)物直接校準(zhǔn)網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分比的方法，不能準(zhǔn)確反映其在不同熒光強(qiáng)度區(qū)域連續(xù)分布的特征,，也無法保證準(zhǔn)確測量LFR和IRF等相關(guān)參數(shù),。

增益校準(zhǔn)

為了在校準(zhǔn)網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比的同時，也能校準(zhǔn)LFR和IRF等參數(shù),，邁瑞采用調(diào)整散點(diǎn)圖增益的方法對RET通道進(jìn)行校準(zhǔn)（簡稱增益校準(zhǔn)）,。正常紅細(xì)胞在網(wǎng)織紅細(xì)胞通道散點(diǎn)圖熒光方向重心（FLP）是恒定的，邁瑞產(chǎn)品校準(zhǔn)物SC-CAL PLUS的紅細(xì)胞粒子在網(wǎng)織紅細(xì)胞通道的熒光方向重心也是恒定的,，因此可以建立兩者之間FLP的相關(guān)性,。

在客戶端的儀器上，工程師可以使用產(chǎn)品校準(zhǔn)物SC-CAL PLUS,，根據(jù)該批號校準(zhǔn)物的RBC增益值,，調(diào)整RET通道中紅細(xì)胞粒子在散點(diǎn)圖中上下左右的空間位置（即紅細(xì)胞重心），這個過程即為增益調(diào)整,。在此過程中,，LFR和IRF的相對空間位置也一并獲得調(diào)整。通過該方法,，可以將用參考方法^[3]測量得到的新鮮血RET%傳遞到客戶端的儀器檢測結(jié)果,。

增益調(diào)整過程如圖1所示，以貫穿上下圖的兩根白線為參考,，可見下圖的細(xì)胞團(tuán)比上圖的細(xì)胞團(tuán)位置略靠右一點(diǎn),。

圖1. 網(wǎng)織紅通道增益調(diào)整示意圖

經(jīng)過增益校準(zhǔn)之后的儀器所測得RET%和人工鏡檢的RET%的相關(guān)性見圖2。

圖2. 儀器法RET%和人工鏡檢法RET%相關(guān)性

邁瑞血液分析標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗室參加了“衛(wèi)生部臨床檢驗中心——全國網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)室間質(zhì)量評價”項目（圖3）,。結(jié)果顯示,，RET%/RET#結(jié)果分布居中，表明與其他各臨床實(shí)驗室的結(jié)果有高度相關(guān)性和可比性,，證明了邁瑞網(wǎng)織紅細(xì)胞測量結(jié)果量值傳遞的可靠性,。

圖3. 2016年和2017年參加衛(wèi)生部臨檢中心RET室間質(zhì)評結(jié)果

綜上所述，通過增益校準(zhǔn)的方式,，邁瑞網(wǎng)織紅通道測量結(jié)果的準(zhǔn)確性和溯源性得到了保證,。尤其是可以同時對LFR、IRF等細(xì)胞團(tuán)的空間位置進(jìn)行調(diào)整,，相比現(xiàn)有的網(wǎng)織紅通道校準(zhǔn)物只能校準(zhǔn)RET%,，增益校準(zhǔn)的方式校準(zhǔn)項目更加全面。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0701-2008 血細(xì)胞分析儀用校準(zhǔn)物（品）,。

[2] 為網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)校準(zhǔn)驗證提供依據(jù)——《網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)參考方法》標(biāo)準(zhǔn)解讀,。

[3]CLSI：H44-A2 Methods forReticulocyte Counting (Automated Blood Cell Counters, Flow Cytometry, andSupravital Dyes); Approved Guideline—Second Edition.