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專訪張時民:網(wǎng)織紅細(xì)胞分析技術(shù)和臨床應(yīng)用

 angelzhang69 2015-08-08

 



張時民,,北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床檢驗(yàn)室,,從事臨床醫(yī)療檢驗(yàn)工作30年,兼北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)(8年制)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)教學(xué)和成教學(xué)院教學(xué)工作,。主要從事臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)工作,,專業(yè)側(cè)重于血液、尿液,、體液常規(guī)檢驗(yàn)工作,,在血細(xì)胞自動化分析技術(shù)、尿液自動化分析技術(shù)以及臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)方面有一定的造詣和學(xué)術(shù)水準(zhǔn),。撰寫專業(yè)論文,、綜述、講座,、病歷報道,、檢驗(yàn)科普文章等50余篇,參加編寫教材,、專著,、詞典等20余部,其中主編《實(shí)用尿液有形成分分析技術(shù)》,、《臨床檢驗(yàn)316個怎么辦》,、《新編檢驗(yàn)與檢查手冊》等書籍5部,副主編《現(xiàn)代尿液分析技術(shù)與臨床》,、《檢驗(yàn)與臨床診斷叢書--質(zhì)量管理和常規(guī)檢驗(yàn)分冊》等2部書籍,。


目前任中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)學(xué)會第七屆委員會臨床血液體液學(xué)組委員;《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》,、《中華醫(yī)學(xué)雜志(電子版)》,、《中華全科醫(yī)學(xué)雜志》、《中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)》,、《中國醫(yī)刊》,、《中國臨床醫(yī)生》、《北京醫(yī)學(xué)》等雜志的審稿專家,、特約編委,、編委等職務(wù)。兼任衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心聘任技術(shù)專家,、中國醫(yī)療器械評定委員會評審專家,、中國合格評定國家認(rèn)可委員會(CNAS)評審員等社會職務(wù)。


記者:張老師您好,!您從事臨檢工作30來年,,積累了豐富的一線經(jīng)驗(yàn),,本期為血液專題,想請您介紹一下網(wǎng)織紅細(xì)胞方面的知識,,很多人對網(wǎng)織紅細(xì)胞的概念比較模糊,,首先請您介紹一下網(wǎng)織紅細(xì)胞是什么樣的細(xì)胞?


張教授:網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte,,Ret)也是紅細(xì)胞,,不過它是未完全成熟的紅細(xì)胞,也被稱為年輕的紅細(xì)胞,。網(wǎng)織紅細(xì)胞是紅細(xì)胞成熟過程中的一個階段,,是幼稚的紅細(xì)胞在脫去細(xì)胞核后即將完全成熟的紅細(xì)胞。紅細(xì)胞在骨髓內(nèi)生成,,成熟后進(jìn)入血液循環(huán),。骨髓中紅細(xì)胞系統(tǒng)的增生發(fā)育過程是:多能干細(xì)胞→單能干細(xì)胞→原始紅細(xì)胞→早幼紅細(xì)胞→中幼紅細(xì)胞→晚幼紅細(xì)胞→網(wǎng)織紅細(xì)胞→成熟紅細(xì)胞。正常人的成熟紅細(xì)胞壽命大約為120天,,因此每天都有紅細(xì)胞死亡,,而同樣每天都有相當(dāng)于人體紅細(xì)胞總數(shù)量大約1/120的新生紅細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán),形成動態(tài)平衡,。血液循環(huán)中的網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟大約需要24~48小時,。網(wǎng)織紅細(xì)胞經(jīng)煌焦油藍(lán)活體染色后,在胞體內(nèi)可見到藍(lán)色點(diǎn)狀或網(wǎng)狀的結(jié)構(gòu),,經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明為核糖核酸(RNA),。在形態(tài)學(xué)上網(wǎng)織紅細(xì)胞被認(rèn)為和嗜多色性紅細(xì)胞(polychromatic,RBC),,都屬晚幼紅細(xì)胞脫核后生成的同種新生紅細(xì)胞,,因染色處理方法不同而表現(xiàn)出不同的形態(tài)特點(diǎn)。


記者:網(wǎng)織紅細(xì)胞發(fā)現(xiàn)的時間大概是什么時候,,又是怎樣發(fā)現(xiàn)的,?


張教授:大約在1865年,Wilhelm. H. Erb醫(yī)師在貧血患者的血片上發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞中的顆粒,,并用苦味酸顯示了它們,,從而發(fā)現(xiàn)了這種紅細(xì)胞中的特殊結(jié)構(gòu),并將其描述為紅細(xì)胞從有核狀態(tài)到成熟前的過渡期細(xì)胞,。而后Erhich用亞甲藍(lán)對血液進(jìn)行活體染色,,制成血片后在顯微鏡下發(fā)現(xiàn)了紅細(xì)胞內(nèi)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),,將其稱為網(wǎng)織紅細(xì)胞,并建立了網(wǎng)織紅細(xì)胞活體染色和顯微鏡檢查法(圖1-網(wǎng)織紅細(xì)胞煌焦油藍(lán)染色),。一個多世紀(jì)以來網(wǎng)織紅細(xì)胞的測定在貧血的診斷,、療效估計、鑒別診斷等方面起到重要的作用,。


記者:您是臨檢專家,,請您詳細(xì)介紹一下目前測定網(wǎng)織紅細(xì)胞的方法主要有哪些?相關(guān)性如何?


張教授:目前網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測方法主要有傳統(tǒng)的顯微鏡計數(shù)方法和具有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析功能的全自動血細(xì)胞分析儀上測定兩大類,。當(dāng)然還可以用流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行測定,,但往往不適宜臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用,;還曾有過專門用于網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的專用儀器,,但現(xiàn)在血細(xì)胞分析儀已經(jīng)具有這項(xiàng)功能,所以專用網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀器已經(jīng)很少發(fā)展和很少用戶在使用,。


顯微鏡法網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)方法如下:試劑配制:10g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液煌焦油藍(lán) 1.0 g 檸檬酸鈉 0.4 g氯化鈉 0.85 g蒸餾水 加至100ml(過濾后備用)


操作步驟:①取干凈小試管一只,,加入10g/L煌焦油藍(lán)溶液2~3滴,然后加入等量的血液,?;靹蚝蠓胖?5~20min,使紅細(xì)胞充分染色,。②取少許染色好的血液,在潔凈載玻片上推成薄而均勻的血膜,。③干燥后用瑞氏染液復(fù)染(也可不復(fù)染)。④在顯微鏡低倍鏡下選擇細(xì)胞分布均勻,,著色清晰的部位,,用油鏡計數(shù)1000個紅細(xì)胞內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)再除1000計算出網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。嚴(yán)重貧血病人,,應(yīng)計算網(wǎng)織紅細(xì)胞的絕對值(網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)×每微升內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)),。


窺盤計數(shù)法:為準(zhǔn)確計數(shù),,提供計數(shù)精密度,可使用米勒(Miller)窺盤輔助(米勒窺盤),。米勒窺盤是一種安裝于顯微鏡目鏡中的裝置,其上具有大小兩個方格,,其面積之比為9:1,。血片的染色和制片同于上述的方法,計數(shù)時將血片放置在顯微鏡上,,使用窺盤上的小方格計數(shù)紅細(xì)胞數(shù)量,,大方格用于計數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量,;當(dāng)小方格內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù)超過111個時,,即表明計數(shù)紅細(xì)胞總數(shù)已經(jīng)超過1000個,此時將所計數(shù)到的網(wǎng)織紅細(xì)胞總數(shù)累積,,經(jīng)過計算即可得到網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比。


儀器法和傳統(tǒng)的顯微鏡法計數(shù)原理和做法各不相同,,顯微鏡法是直接法,可以直接觀察到網(wǎng)織紅細(xì)胞,。但是因?yàn)椴僮骱陀嫈?shù)過程完全依據(jù)人的能力而定,且計數(shù)的細(xì)胞數(shù)量有限,,還有染色情況、染色比例,、細(xì)胞分布情況,、個人能力問題等諸多的不確定因素和不標(biāo)準(zhǔn)化問題,,因此計數(shù)上的精密度和準(zhǔn)確性受到一定的影響。但是這種方法在沒有自動化設(shè)備的醫(yī)院,,在基層醫(yī)院,,在嚴(yán)格制定操作規(guī)范和對操作者嚴(yán)格培訓(xùn)的條件下,,是可行的實(shí)驗(yàn)方法,。而自動化儀器在許多方面具有標(biāo)準(zhǔn)化程序,,試劑穩(wěn)定,、反應(yīng)時間一致,、計數(shù)細(xì)胞數(shù)量大(一般計數(shù)RBC數(shù)量在10000~50000),、具有質(zhì)控和校準(zhǔn)能力,,因此在精密度和準(zhǔn)確性上明顯優(yōu)于顯微鏡計數(shù)法。但是當(dāng)儀器在出現(xiàn)報警信息,、散點(diǎn)圖異常等情況下,,要認(rèn)真分析原因,必要時需要通過顯微鏡法進(jìn)行核實(shí),,才是比較穩(wěn)妥的做法,。我自己曾經(jīng)遇到過一例非常高的網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)結(jié)果,因?yàn)閮x器測定得到的網(wǎng)織紅細(xì)胞是43%,,這樣高的結(jié)果有些不敢相信,因此做了網(wǎng)織紅細(xì)胞染色涂片鏡檢。結(jié)果所見到的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量確實(shí)非常高,驗(yàn)證了儀器分析所得到的結(jié)果,。(圖2-高網(wǎng)織紅細(xì)胞顯微鏡圖)



記者:網(wǎng)織紅細(xì)胞是一類細(xì)胞,,還是可以分為幾類呢?


張教授:傳統(tǒng)方法是根據(jù)網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)進(jìn)行分類的,,紅細(xì)胞中的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)越多越密集,,表示該細(xì)胞越幼稚。Heilmyer根據(jù)其發(fā)育階段將網(wǎng)織紅細(xì)胞分為5型,,用此表示造血功能的盛衰,。O型:是有核網(wǎng)織紅細(xì)胞,胞質(zhì)內(nèi)含有的網(wǎng)織物質(zhì)僅見于正常骨髓中,;Ⅰ型:紅細(xì)胞幾乎被網(wǎng)織物充滿,,又稱為絲球型,也多在正常骨髓中出現(xiàn),;Ⅱ型:位于紅細(xì)胞中央線團(tuán)樣結(jié)構(gòu)開始松散,,又稱為網(wǎng)型,多存在于骨髓中,;Ⅲ型:網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)稀少,,呈不規(guī)則枝點(diǎn)狀排列,又稱為破網(wǎng)型,,正常人外周血中可見少量,;Ⅳ型:胞質(zhì)中嗜堿性物質(zhì)很少,呈分散的細(xì)顆粒狀或短絲狀,,又稱為點(diǎn)粒型,,外周血中見到的網(wǎng)織紅細(xì)胞以此類型為多見。而國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)所制定的分類中,不包括Heilmyer分類法中的O型,。網(wǎng)織紅細(xì)胞Ⅰ~Ⅳ型見圖3(圖3-網(wǎng)織紅細(xì)胞分型,,瑞氏染液復(fù)染效果,羅馬文字為標(biāo)示的細(xì)胞分型),。


而現(xiàn)代血細(xì)胞分析儀上所進(jìn)行的網(wǎng)織紅細(xì)胞分析,,也可將網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)行分類,但是它不同于形態(tài)學(xué)分類方法,。它是依照網(wǎng)織紅細(xì)胞被試劑中熒光染料染色后RNA物質(zhì)發(fā)射出的熒光強(qiáng)度來進(jìn)行劃分的,,高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(HFR)是比較幼稚的細(xì)胞、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(MFR)是中等成熟度的細(xì)胞,、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(LFR)是比較接近成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞,。


記者:請您介紹一下目前市場上現(xiàn)有的網(wǎng)織紅細(xì)胞自動計數(shù)和分析方法的特點(diǎn)?


張教授:目前應(yīng)用較多的是帶有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析功能的多參數(shù)血細(xì)胞分析儀,,它們使用各種熒光染料和非熒光染料對網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)行染色,,并依據(jù)自己的原理進(jìn)行檢測。這些具有網(wǎng)織細(xì)胞分析能力的全自動血細(xì)胞分析儀除了可以給出網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比外,,還可給出網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)絕對值,、網(wǎng)織紅細(xì)胞體積、網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白含量,、網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟程度,、網(wǎng)織紅細(xì)胞分群等許多參數(shù),這些參數(shù)是網(wǎng)織紅細(xì)胞分析,、臨床應(yīng)用和研究的熱門領(lǐng)域。為保證網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,,這些儀器一般都有配套的商品化的網(wǎng)織紅細(xì)胞質(zhì)控品,,并以高、中,、低不同濃度的結(jié)果對儀器進(jìn)行全面質(zhì)量管理,,而傳統(tǒng)方法在實(shí)施網(wǎng)織紅細(xì)胞質(zhì)量控制方面顯得無可作為。


網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀器法除了給出相關(guān)的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)據(jù)外,,還可提供網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖(scattergram),,這些不同的散點(diǎn)圖一般會以平面圖的方式表達(dá),但實(shí)際上它們應(yīng)該為三維格式的圖形,,在圖中顏色密度大的位置一般表示檢測到的數(shù)據(jù)信號多,,如果用三維圖來表示的,這里應(yīng)該是細(xì)胞分布最集中或密度最大的區(qū)域(圖4-血細(xì)胞三維圖),,例如紅細(xì)胞分布群,。五分類法血細(xì)胞分析儀所提供的散點(diǎn)圖也都是散點(diǎn)圖格式,在顯示或打印時只能用兩維圖的方式進(jìn)行輸出,。


目前國內(nèi)應(yīng)用的帶有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析功能的多參數(shù)血細(xì)胞分析儀主要為進(jìn)口產(chǎn)品,,主要品牌有貝克曼-庫爾特(Beckman-Coulter),、日本希森美康(Sysmex)、雅培(Abbott),、西門子(Seimens),、Horiba(ABX)公司等廠家。國內(nèi)已有邁瑞公司等血液分析儀生產(chǎn)廠商涉及此方面的研發(fā),,相信不久將來會有國產(chǎn)儀器問世,。由于這些自動化儀器的使用,網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的精密度更有明顯提高,。統(tǒng)計表明對低網(wǎng)織紅細(xì)胞標(biāo)本,,儀器法CV在10%~20%之間;對正常范圍的標(biāo)本,,CV值在3%~16%之間,;高值標(biāo)本,CV更可降低到2%~10%,。


記者:謝謝您,,很長知識!請您介紹一下主要類型血細(xì)胞分析儀在測定網(wǎng)織紅細(xì)胞上的原理都有哪些不同或相同之處,?


張教授:這里我們介紹五種類型的具有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析能力的自動血細(xì)胞分析儀器,,我們主要談及它們在網(wǎng)織紅細(xì)胞分析上的原理。而這些儀器在血細(xì)胞分析,、白細(xì)胞五分類方面的原理和特點(diǎn),,我在《臨床實(shí)驗(yàn)室》2008年第6期上已經(jīng)有專門文章進(jìn)行介紹,請參考,。


1 Siemens(Bayer)公司產(chǎn)品Advia 120/2120型全自動血液分析儀在進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞測定時,,血液樣品由專用的染料進(jìn)行染色和孵育。其染料使用氧氮雜芑750,。儀器用氦氖激光為光源,,發(fā)射波長為670nm的激光束。因?yàn)樵噭┛梢允沟眉t細(xì)胞和血小板球形化,,這樣可以明顯消除細(xì)胞形態(tài)對體積測定的影響,。網(wǎng)織紅細(xì)胞被染色后,在通過flowcell時被激光束激發(fā)出特定波長的激光照射,,通過測量網(wǎng)織紅細(xì)胞結(jié)合熒光染料后發(fā)出的熒光強(qiáng)度來區(qū)分成熟紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞,,成熟的紅細(xì)胞不被染料染色,不會發(fā)出熒光色,,而網(wǎng)織紅細(xì)胞可以發(fā)出熒光色,。可根據(jù)網(wǎng)織紅細(xì)胞發(fā)射熒光強(qiáng)弱來判別區(qū)分網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟程度,不同成熟階段的網(wǎng)織紅細(xì)胞含有不同量的RNA,,從而可以根據(jù)熒光強(qiáng)度而獲得低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(L Retic)群,、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(M Retic)群和高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(H Retic)群(圖5-Advia 120網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖)。儀器同時還以低角度(2°~3°)散射光信號檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞體積,,以高角度(5°~15°)散射光信號檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白濃度,,從而得到各種有關(guān)網(wǎng)織紅細(xì)胞的研究參數(shù)。


2 Sysmex公司產(chǎn)品二十世紀(jì)90年代日本Sysmex公司開發(fā)了全自動血液細(xì)胞分析儀SE-9000,,它可在主機(jī)上附加一個半自動式的網(wǎng)織紅細(xì)胞分析組件,,形成SE-9000/RAM-1,是一種具有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析能力的五分類血液細(xì)胞分析系統(tǒng),。而且該公司還增加開發(fā)過單獨(dú)完成網(wǎng)織紅細(xì)胞分析的R系列儀器,。而Sysmex XE-2100和XT-2000i等五分類血細(xì)胞分析儀器在檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞時,可以實(shí)現(xiàn)不同標(biāo)本隨機(jī)選擇檢測CBC,、DIFF,、RET的模式,加快了測定速度和應(yīng)用的便捷性,。這類儀器用聚次甲基熒光染料對網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)行染色,,其特征是染料中含有和次甲基相連的雜環(huán)核,當(dāng)染料結(jié)合了膜或核酸后,,其分子運(yùn)動受到干涉,,所以會吸收更多的光并發(fā)出更強(qiáng)的熒光。此外儀器除了進(jìn)行全自動的網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值和百分比計數(shù)外,,還可以通過對網(wǎng)織紅細(xì)胞核酸染色得到的熒光信號強(qiáng)度區(qū)分出低,、中、高熒光強(qiáng)度的網(wǎng)織紅細(xì)胞(LFR,、MFR,、HFR)(圖6-XE2100網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖)。由于幼稚的網(wǎng)織紅熒光信號較強(qiáng),,MFR和HFR之和即成為反映未成熟網(wǎng)織紅的一個有用參數(shù)-未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞比率(Immature Reticulacyte Fraction,IRF),,該參數(shù)1997年被美國FDA批準(zhǔn)成為可以作為臨床應(yīng)用的報告參數(shù),。


網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測試劑分為RET-SEARCH II DILUENT稀釋液和RET-SEARCH II DYE染色劑。網(wǎng)織紅細(xì)胞首先經(jīng)過稀釋液處理,,使紅細(xì)胞和白細(xì)胞腫脹并且輕微損傷細(xì)胞膜以便染料容易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),,然后染色劑中的聚次甲基染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使網(wǎng)織紅細(xì)胞中的RNA和白細(xì)胞核內(nèi)的DNA染色著色,。由于RNA含量的不同,,所以可以將紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞區(qū)分出來;由于DNA和RNA含量的不同,可以將網(wǎng)織紅細(xì)胞從白細(xì)胞群體中區(qū)分出來,。


3 Beckman-Coulter公司產(chǎn)品該公司在二十世紀(jì)90年代推出的Maxm全自動五分類法血細(xì)胞分析儀,,也是一款較早出現(xiàn)的具有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析功能的儀器,它采用新亞甲藍(lán)(New Methylene Blue,,NMB)對網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)行染色,。新亞甲藍(lán)是一種經(jīng)典的非熒光超活性染料,可以沉淀網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)殘存的RNA,。血液和新亞甲藍(lán)染料結(jié)合后,,經(jīng)過一段時間孵育,再加入一種酸性脫蛋白溶液,,去除紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白,,而保留著色的RNA。運(yùn)用Coulter獨(dú)到的VCS三維技術(shù),,將網(wǎng)織紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞,、白細(xì)胞、血小板和有核紅細(xì)胞區(qū)分開來,。但這種Maxm儀器是需要首先對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)染色處理,。VCS技術(shù)中的電阻抗(V)技術(shù)可以確定細(xì)胞體積的大小,未成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞體積略大于成熟紅細(xì)胞,,在散射圖Y軸上可以表現(xiàn)出面積大小這一非常重要信息,。電導(dǎo)性(C)可反應(yīng)細(xì)胞內(nèi)部特征性信息,三維圖中Z軸表現(xiàn)的為電導(dǎo)性,,但是它只能在旋轉(zhuǎn)的三維圖中見到,。氦氖激光測定可獲得光散射(S)信息,它提供的是細(xì)胞表面特征和細(xì)胞顆粒特征性信息,。網(wǎng)織紅細(xì)胞分析高度依賴光散射信息,,因?yàn)楹斜籒MB染色后的網(wǎng)織紅細(xì)胞光散射強(qiáng)度高于成熟紅細(xì)胞的光散射強(qiáng)度。散射圖X軸顯示的是光散射強(qiáng)度信息,,光散射信息可將網(wǎng)織紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞區(qū)分開,,因?yàn)榫W(wǎng)織紅細(xì)胞含較多RNA,因此會散射較多的激光,,在散射圖上會出現(xiàn)在成熟紅細(xì)胞的右側(cè),,而且網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟度越差,在散射圖上的分布越靠右側(cè)(圖7-VCS法網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖),。


將體積,、電導(dǎo)性和光散射信息的原始資料繪制在三維數(shù)據(jù)圖中,而我們看到的往往是平面散射圖(XY軸所表達(dá)的信息),。用軟件對曲線中的細(xì)胞群進(jìn)行分割后,,血小板群和白細(xì)胞群的細(xì)胞信號被除去,,只保留成熟紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞信息。另一條曲線再將網(wǎng)織紅細(xì)胞從成熟紅細(xì)胞群中分離開,,通過區(qū)分和計算,,即刻得到網(wǎng)織紅細(xì)胞的結(jié)果。應(yīng)用VCS技術(shù)可得到網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比和絕對值,、未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞指數(shù)(IRF),、平均網(wǎng)織紅細(xì)胞體積(MRV)、平均球形紅細(xì)胞體積(MSCV),、強(qiáng)光散射網(wǎng)織紅細(xì)胞(HLR)百分比和絕對值,。該廠家在后來生產(chǎn)的STKS、Gen-S,、HmX,、LH750系列儀器,均采用了相同的染色技術(shù)和測定原理,,而在自動化方面則有很大改進(jìn),,可自動完成取樣和網(wǎng)織紅細(xì)胞染色全過程。


4.Horiba(ABX)公司產(chǎn)品Pentra 120 retic是具有白細(xì)胞五分類和網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀功能的全自動血細(xì)胞分析儀,。在網(wǎng)織紅細(xì)胞分析上,,它采用專利的RETIXTM試劑,其含有改良后的噻唑橙(Thiazole Orange)熒光染料,。試劑和血液樣本在35℃恒溫樣品杯中孵育約25秒,,即可使試劑中的熒光染料與網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)的RNA特異性結(jié)合,這是作為快速全自動網(wǎng)織紅細(xì)胞分析的前提條件,。Pentra 120 retic測定網(wǎng)織紅細(xì)胞的原理和流程是:細(xì)胞熒光染色(專利試劑RETIXTM)-通過鞘流阻抗法測定細(xì)胞體積-DHSS(雙鞘流)技術(shù)激光流式細(xì)胞儀(測定RNA含量),。


標(biāo)本進(jìn)入獨(dú)特的雙殼流池中(DHSS),先經(jīng)過第一次鞘流到達(dá)計數(shù)微孔,,應(yīng)用傳統(tǒng)的電阻抗技術(shù)對細(xì)胞體積進(jìn)行精確分析,,后經(jīng)第二次鞘流到達(dá)熒光檢測區(qū),氬離子激光器發(fā)出488nm的藍(lán)色激光照射到網(wǎng)織紅細(xì)胞后,,細(xì)胞內(nèi)的熒光染料激發(fā)出綠色的熒光(530nm)儀器通過測定熒光強(qiáng)度來對網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)和成熟度分析,,儀器的最大檢測細(xì)胞數(shù)量可多達(dá)32,000個細(xì)胞。在網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖上,,X軸表現(xiàn)的是細(xì)胞體積,,Y軸表現(xiàn)的是熒光強(qiáng)度,因此可以明顯將網(wǎng)織紅細(xì)胞從紅細(xì)胞中分離出來(圖8-Pentra120網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖),,而且同樣可以根據(jù)網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟程度-細(xì)胞內(nèi)RNA含量,將其劃分成低含量的較成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞群,、中等成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞和低成熟度的網(wǎng)織紅細(xì)胞群,。


5 Abbott公司產(chǎn)品Abbott公司生產(chǎn)的Cell Dyn 3200,、3500R和3700五分類血液分析儀在進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞分析時,首先將20μl血液加入到特殊的新美蘭試劑中進(jìn)行染色處理,,經(jīng)過15min的孵育后再將標(biāo)本吸入儀器中,,應(yīng)用網(wǎng)織紅細(xì)胞分析程序進(jìn)行測定。紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞在10°角度具有相同的激光散色特性,,但在90°偏振光照射下,,網(wǎng)織紅細(xì)胞因?yàn)楸恍旅捞m試劑染色而與成熟紅細(xì)胞具有不同光散射特征,因而可被分離出來,。在0°前向散射光檢測上表現(xiàn)出體積略大于紅細(xì)胞的特點(diǎn),。未成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞含有較多的RNA,結(jié)合亞甲藍(lán)染料后可通過MAPSS技術(shù)顯示出來,。90°激光散射中會出現(xiàn)較強(qiáng)的信號,,而且越高RNA含量的幼稚網(wǎng)織紅細(xì)胞,其散射光信號越強(qiáng),,在散射圖上也處于偏上的位置(圖9-Cell Dyn3700網(wǎng)織紅細(xì)胞散點(diǎn)圖),。而后期推出的Abbott Cell Dyn 4000、Abbott Cell Dyn Ruby(紅寶石)和Sapphire(藍(lán)寶石)型高級血液分析儀在網(wǎng)織紅細(xì)胞測定上已經(jīng)采用了全自動處理和測定方式,,其檢測精度和速度都有提高,。


記者:您提到的這些儀器分析網(wǎng)織紅細(xì)胞時,其成熟度分群是怎樣定義的,?


張教授:儀器所進(jìn)行的網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟度分群不同于顯微鏡法所進(jìn)行的分型,,它可以對網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟程度進(jìn)行分群,可以獲得各群細(xì)胞的百分比和絕對數(shù)量,。網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)RNA含量多少與其成熟程度有關(guān),,這些不同RNA含量的網(wǎng)織紅細(xì)胞被相應(yīng)的熒光或非熒光染料染色后,根據(jù)激光照射后發(fā)射特定顏色熒光的強(qiáng)弱程度,、或光吸收量大小,、光散射量多少等參數(shù)的比例關(guān)系進(jìn)行分析。例如高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(HFR),、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(MFR),、低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞(LFR)。例如Sysmex XE-2100儀器的HFR表示網(wǎng)織紅細(xì)胞中含有較多的RNA物質(zhì),,其熒光染料結(jié)合能力較強(qiáng),,熒光發(fā)射量強(qiáng),檢測到此類細(xì)胞,,表示是較為幼稚的網(wǎng)織紅細(xì)胞,,而LFR是較為成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞(圖10-網(wǎng)織紅細(xì)胞熒光含量圖示)。目前各種具有網(wǎng)織紅細(xì)胞分析能力的血細(xì)胞分析儀,,無論在是半自動還是全自動儀器,,甚至使用流式細(xì)胞分析儀都可以或具有對網(wǎng)織紅細(xì)胞的分群能力,,雖然其名稱不一致,但是所包含的內(nèi)容基本相同,。有文獻(xiàn)報道正常人這三種熒光強(qiáng)度的網(wǎng)織紅細(xì)胞分群所占比例大致為LFR:77%~94%,;MFR:5%~18%;HFR:0~5%,。


但是這種分群的概念和顯微鏡下依據(jù)形態(tài)學(xué)特點(diǎn)而進(jìn)行的網(wǎng)織紅細(xì)胞分型還是不同的,,還不能將其一一對應(yīng)。


記者:現(xiàn)在臨床上網(wǎng)織紅細(xì)胞的參考范圍是多少,?


張教授:成人:0.8%~2.0%,,絕對值(25~75)×109/L新生兒:2.0%~6.0%


記者:網(wǎng)織紅細(xì)胞的測定或計數(shù),現(xiàn)在還有哪些新的參數(shù)應(yīng)用于臨床,?


張教授:這些參數(shù)有的可以通過人工計數(shù)和計算獲得,,有的需要通過專用儀器分析計算獲得。1 網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)(reticulocyte production index,,RPI):一般網(wǎng)織紅細(xì)胞在血液中的生存期為1天,,若紅細(xì)胞生成加速,釋放入血速度增加,,此時網(wǎng)織紅細(xì)胞在血液中的生存期會延長至2~2.5天,,意味著網(wǎng)織細(xì)胞數(shù)量的增高將導(dǎo)致對紅細(xì)胞生成速率的過高估計。而RPI可以很好的糾正這種網(wǎng)織紅細(xì)胞提前釋放引起的計算誤差,,在估計紅細(xì)胞生成有效性方面更加確切和準(zhǔn)確,,因而在貧血起因的分類方法中起到重要作用。


2 網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)(RMI):該參數(shù)是計算參數(shù),,可由儀器自動計算,,也可將儀器測定的網(wǎng)織紅細(xì)胞分群參數(shù)經(jīng)過人工計算得到。計算公式為:RMI=(MFR+HFR)/LFR×100%,。文獻(xiàn)報道RMI的參考范圍,,男:17%~37%,女:16%~35%,;用COULTER LH755測定的結(jié)果為14%~38%,。


3 平均網(wǎng)織紅細(xì)胞體積(MRV):為測量結(jié)果,因網(wǎng)織紅細(xì)胞是未完全成熟的紅細(xì)胞,,其體積往往大于正常紅細(xì)胞,。文獻(xiàn)報道其參考范圍,男:89.9~123.9fl,;女:93.8~122.8fl,;而應(yīng)用COULTER LH755測定的一組正常人參考范圍是93.8~121.5fl。


4 網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白含量(CHr):是BAYER ADVIA 120血液分析特有的測定參數(shù)之一,,目前是被認(rèn)為具有許多診斷和療效觀察價值的新的網(wǎng)織紅細(xì)胞測定參數(shù),。因?yàn)槭俏闯墒斓募t細(xì)胞,,其細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白含量會低于成熟紅細(xì)胞。正常人CHr>28.0pg/L,。


5 網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟度(IRF):IRF為不成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)與總網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)的比值,IRF越大表示不成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量越多,。正常人平均值為0.22,,參考范圍0.1~0.38;貧血患者均值為0.38,,范圍在0.16~0.6,。


6 其他參數(shù):Siemens Advia 120型血細(xì)胞分析儀在網(wǎng)織紅細(xì)胞測定上有強(qiáng)大的功能,有更多的網(wǎng)織紅細(xì)胞特性參數(shù),。除了已經(jīng)列為常規(guī)報告參數(shù)的網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比和絕對值外,,網(wǎng)織紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(CHr)也已經(jīng)被FDA認(rèn)可作為臨床報告參數(shù)。此外供實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部或供研究使用的還有:成熟紅細(xì)胞平均體積(MCVm),、網(wǎng)織紅細(xì)胞平均體積(MCVr),、平均網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(CHCMr)、網(wǎng)織紅細(xì)胞體積分布寬度(RDWr),、網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白量分布寬度(HDWr),、高中低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比和絕對值以及相關(guān)的直方圖(圖11)和散點(diǎn)圖。而PENTRA 120型則具有分析網(wǎng)織紅細(xì)胞平均熒光指數(shù)(MFI)的能力,。


記者:謝謝您,!我們加深了對網(wǎng)織紅細(xì)胞定義和測定原理的理解,現(xiàn)在很多檢驗(yàn)人員或臨床大夫?qū)W(wǎng)織紅細(xì)胞測定的臨床意義比較模糊,,您能詳細(xì)解答一下嗎,?


張教授:這也是本次訪談中非常重要的問題,是臨床醫(yī)生,、檢驗(yàn)醫(yī)師,、檢驗(yàn)技術(shù)人員甚至患者都需要深入了解的內(nèi)容,我可以用略多的篇幅來介紹這些問題,。因?yàn)槭褂昧藘x器分析法,,網(wǎng)織紅細(xì)胞已經(jīng)不僅僅是一個計數(shù)參數(shù)的問題,更有許多新的參數(shù)被引入臨床應(yīng)用,、科研和基礎(chǔ)研究,。網(wǎng)織紅細(xì)胞的增加或減少直接反映了骨髓紅細(xì)胞的生成能力,主要用于對紅細(xì)胞減少性疾病,、溶血性貧血,、治療監(jiān)測或骨髓移植后骨髓造血功能的恢復(fù)、監(jiān)測放療和化療對骨髓造血功能的影響評估等方面,。


1 網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)和絕對值的臨床意義(1) 網(wǎng)織紅細(xì)胞增加是對貧血的反應(yīng),。網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量超過參考范圍可被看成是骨髓造血功能對貧血的正常反應(yīng),。貧血的恢復(fù)是通過骨髓釋放紅細(xì)胞生成素(EPO)完成的,通過網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)可以敏感的反映出貧血原因是由于RBC生成減少還是失血造成,。網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)量升高,,還應(yīng)同時關(guān)注膽紅素增高程度、紅細(xì)胞破壞和血紅蛋白丟失量等方面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。如溶血性貧血,,大量網(wǎng)織紅細(xì)胞因骨髓受到缺氧和大量紅細(xì)胞破壞后產(chǎn)物的刺激而增加,并提前進(jìn)入外周血,,增加程度常在5%以上,,嚴(yán)重時可達(dá)20%以上;急性失血后網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯增加,,急性失血5~10天內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞可達(dá)高峰,,出血停止后2周可恢復(fù)正常,臨床上可用此參數(shù)和特點(diǎn)來判別出血是否停止,。其他因素導(dǎo)致的貧血,,如缺鐵性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血,、放化療后恢復(fù)期,、無效造血但紅系增生活躍等情況也可見網(wǎng)織紅細(xì)胞輕度增加。


(2) 網(wǎng)織紅細(xì)胞降低,。主要和正常造血功能減低有關(guān),,典型病例為再生障礙性貧血(再障)、溶血性貧血再生障礙危象,;此外還有急性白血病,、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、老年患者,、慢性病,、獲得性紅系再障、化療和放療引起的骨髓造血功能抑制或減退等,。


2 CHr測定的意義很多研究表明,,CHr診斷鐵缺乏時,敏感性和特異性可達(dá)到100%和80%,;CHr與HCT診斷溶血者鐵缺乏時也具有較高的敏感性和特異性,;CHr與HFR可以反映溶血者體內(nèi)鐵的供應(yīng)情況;CHr,、MCVr,、CHCMr等參數(shù)可反映鐵缺乏患者鐵劑治療效果。近10余年來,CHr在診斷和治療監(jiān)測方面的應(yīng)用已經(jīng)成為熱點(diǎn),。


(1)CHr在診斷缺鐵性貧血方面的應(yīng)用價值,。由于網(wǎng)織紅細(xì)胞在體內(nèi)存活僅僅1~2天,所以可以直接透視出變化中的紅細(xì)胞鐵的狀態(tài),,也提供了人體含鐵的信息,,只有當(dāng)紅細(xì)胞膜或胞質(zhì)改變時CHr才會改變。目前的缺鐵性貧血的診斷標(biāo)準(zhǔn)是CHr≤28pg和低色素性紅細(xì)胞(HYPO)≥5%,,ROC曲線也顯示出在缺鐵性貧血診斷指標(biāo)中CHr比MCV和血清鐵敏感性和特異性更佳,。


(2)CHr與地中海貧血基因間的關(guān)系。 Christophille等研究了57名鐵充足條件下的雜合型的β地中海貧血患者,,依據(jù)基因型分為3組:βsilent、β+,、β-型,。發(fā)現(xiàn)在CHr和HbA2之間有明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.790,P<0.00001),。這項(xiàng)研究首次闡明了CHr為評價雜合型的β地中海貧血不同基因型提供了便利,。


3 網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)(RPI)的應(yīng)用Kinetic等應(yīng)用RPI可以較為準(zhǔn)確地表達(dá)出網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟狀態(tài),從而對貧血的類型進(jìn)行劃分,,如正常人平均RPI為1,,當(dāng)RPI≥3時表示紅細(xì)胞生成增加,如溶血性貧血和治療后的營養(yǎng)性貧血,;而RPI≤2時為紅細(xì)胞生成減少,,如缺鐵性貧血;而EPO缺乏(如腎病),、再生障礙(如再生障礙性貧血),、浸潤性疾病(如白血病)、無效造血(如巨幼細(xì)胞性貧血)等情況時,,RPI多處于2~3這一區(qū)間,,Kinetic法則還無法確定。


4 網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟度(IRF)的應(yīng)用①監(jiān)控在化療,、骨髓移植,、紅細(xì)胞生成素干細(xì)胞移植后紅細(xì)胞生成素的再生狀況;②監(jiān)測疊氮胸苷(azidothymidine)治療后藥物給骨髓造成的毒性損害,;③監(jiān)測腎衰竭,、AIDS、嬰兒脊髓發(fā)育不良綜合征,;④貧血的分類,;⑤監(jiān)測鐵劑、Vit B12、葉酸等對貧血的治療功效,。


5 網(wǎng)織紅細(xì)胞分群的意義LFR和HFR可作為某些貧血病的初篩指標(biāo),。例如溶血性貧血時Ret、LFR和HFR可明顯升高,,而腎性貧血患者LFR下降,、HFR升高、Ret變化不大,。


(1)用于促紅細(xì)胞生成素貧血治療,。 Chiao-Lin Chuang等學(xué)者觀察研究了在給對溶血性貧血患者重組人紅細(xì)胞生成素(rHuEPO)治療過程中,給予適量鐵劑補(bǔ)充時,,傳統(tǒng)的紅細(xì)胞參數(shù),、鐵代謝參數(shù)和網(wǎng)織紅細(xì)胞、CHr和HFR的變化情況,。研究發(fā)現(xiàn)無論在實(shí)驗(yàn)第2周還是第4周,,CHr 和HFR的變化都要比傳統(tǒng)的紅細(xì)胞和鐵代謝參數(shù)更為顯著,可作為診斷缺鐵性紅細(xì)胞的可靠參數(shù),,也可以對溶血患者在利用rHuEPO治療過程中的反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測,。


(2)監(jiān)測急性髓性白血病的治療和觀察骨髓移植后造血恢復(fù)情況。研究表明紅系增生是粒系多核細(xì)胞恢復(fù)的早期和敏感指標(biāo),,首先出現(xiàn)增加的是網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)MFR群,,而后是HFR群,其變化的順序基本是MFR+HFR,,多核細(xì)胞,、Ret絕對值。骨髓移植后8~9天,,HFR增高是最早出現(xiàn)的骨髓造血功能恢復(fù)的敏感指標(biāo),,其后是網(wǎng)織紅細(xì)胞上升(約20天)、分葉核粒細(xì)胞上升(約46天),。HFR+MFR的變化已經(jīng)被許多研究認(rèn)可,,可以作為評價腫瘤患者化療期間監(jiān)測骨髓造血功能受抑制和開始恢復(fù)的較敏感指標(biāo)。


(3)網(wǎng)織細(xì)胞分群和貧血診斷和治療監(jiān)測,。在20世紀(jì)90年代初就有不少研究試圖以分群的變化來區(qū)分各類貧血,,而后CHUNG-CHE等又分析IRF和RPI與網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對值間的相關(guān)關(guān)系,但都沒有成為貧血確診的依據(jù),。也有研究表明,,溶血性貧血(HA)患者由于骨髓造血功能活躍,大量新生的網(wǎng)織紅細(xì)胞釋放到外周血,,導(dǎo)致外周血Ret及HFR顯著增高,。白血病化療期間患者骨髓造血功能受抑,外周血中的Ret極度減低,HFR中度減低,。缺鐵性貧血(IDA)患者鐵劑治療前,,Ret無明顯改變、HFR輕度增高,,鐵劑治療1周后,,Ret及HFR可呈中度增高,因此兩個參數(shù)可作為IDA患者鐵劑治療后的療效觀察指標(biāo),。再生障礙性貧血(AA)患者外周血Ret中度減低,,而HFR中度增高,這種現(xiàn)象可能反應(yīng)了AA 患者造血功能紊亂時的紅細(xì)胞生成變化,。另外在鑒別診斷MDS方面,,Lesesve對比了70名MDS患者和220例正常人后發(fā)現(xiàn)HFR、RMI和IRF的P<0.01,,說明MDS患者產(chǎn)生的大量生存期延長的“幼稚”的網(wǎng)織紅細(xì)胞是導(dǎo)致HFR增加的原因,。


總之,網(wǎng)織紅細(xì)胞分析具有很廣泛的應(yīng)用前景,,新技術(shù)和新參數(shù)的應(yīng)用會給臨床診斷、治療和監(jiān)測帶來新的研究方向和發(fā)展,。


記者:以您多年的臨床經(jīng)驗(yàn)來看,,現(xiàn)有血液分析儀測定網(wǎng)織紅細(xì)胞的不足之處還有哪些?未來的發(fā)展方向主要是什么,?


張教授:簡單來談一下我的看法:現(xiàn)有的高端血細(xì)胞分析儀所具有的網(wǎng)織紅細(xì)胞分析能力目前可以滿足臨床常規(guī)測定要求,,但是價格比較偏高,試劑成本和質(zhì)控成本略高,,可能影響到一部分用戶的使用期望,。是否可以研制開發(fā)小型的,適合基層醫(yī)院常規(guī)使用的網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)分析設(shè)備,,或者在小型血細(xì)胞分析儀器上配置該功能,,使得在網(wǎng)織紅細(xì)胞分析需求量相對較少的醫(yī)療實(shí)驗(yàn)室使用。有重點(diǎn)的結(jié)合臨床需求,,設(shè)計新的分析參數(shù),,以利于臨床在相關(guān)貧血性疾病、血液病,、腎臟疾病,、免疫性疾病、移植,、臨床治療等方面新的測定或計算參數(shù)的開發(fā),。還應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)和新參數(shù)的臨床應(yīng)用研究、基礎(chǔ)理論研究等工作。在網(wǎng)織紅細(xì)胞在正常人群中,、不同性別,、不同年齡組之間的參考范圍的建立;各個新參數(shù)參考范圍的確立,;各種不同型號網(wǎng)織細(xì)胞分析儀器結(jié)果的比對,;網(wǎng)織紅細(xì)胞儀器法測定實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量評價等方面還有很多細(xì)致的工作要做。希望有條件的單位或?qū)嶒?yàn)室開展相關(guān)工作,,將網(wǎng)織紅細(xì)胞的分析質(zhì)量,、能力和應(yīng)用提高一步。


記者:謝謝您,!代表廣大讀者感謝您抽出大量時間進(jìn)行訪談,,受益匪淺!也希望您多多支持我們,!

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