1,、甲基百里香酚藍比色法（MTB）：

（1）MTB與EDTA有相似的氨羧結(jié)構(gòu),，能螯合多種陽離子，但絡(luò)合穩(wěn)定常數(shù)不同,。

（2）加入：EDTA的作用，目的在于掩蔽試劑中污染的鈣以及其他的金屬離子,。能降低空白管吸光度,，提高測定管吸光度，從而使方法靈敏度提高,。

（3）EDTA的用量選擇,，絕大部分金屬離子與EDTA的絡(luò)合穩(wěn)定常數(shù)大于鈣，小于鈣的僅是少數(shù)微量元素,。限量的EDTA僅能掩蔽試劑中的干擾元素,，沒有多余的EDTA絡(luò)合血清鈣，一般加入配試劑中的濃度EDTA99～108μmol/L,，最終絡(luò)合顯色反應(yīng)的EDTA濃度50～54μmol/L,。

（4）所用的試管清洗后用去離子水浸泡兩次，再烤干備用,。清潔管加入試劑后應(yīng)顯一致的淺灰綠色,，若顯藍色則試管表示有鈣污染。

2,、鄰甲酚酞絡(luò)合酮直接比色法：

（1）本測定用血清或肝素抗凝血漿標本,。不能用鈣螯合劑（EDTA-Na2）及草酸鹽作抗凝劑的標本。

（2）鄰甲酚酞是一種酸堿指示劑，在結(jié)構(gòu)上與甲基百里香酚藍相似,，在中性或酸性環(huán)境中無色,，僅在堿性溶液中和鈣離子絡(luò)合呈紫紅色。所以pH對顯色有很大的影響,，在pH10.5～12時,，此反應(yīng)敏感性最好，故用pH11為宜,。

（3）試劑中加入8-羥基喹啉消除鎂的干擾,，能特異地絡(luò)合鎂，TritonX-100具有消化蛋白的影響,。有的作者,，在試劑中還加入氰化物掩蔽其他金屬離子；二甲亞砜消除蛋白影響及抑制鄰甲酚酞絡(luò)合物的解離,，從而降低空白液的吸光度,；聚乙烯吡咯烷酮亦能消除蛋白質(zhì)、膽紅質(zhì)及磷的干擾,。

（4）用來作血清鈣測定的堿性緩沖液較多,，可根據(jù)條件選用，常用的有乙二胺-氰化鉀,、乙二胺-醋酸鉀-鹽酸,、乙二胺-乙二醇、乙醇胺-硼酸,、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等,。用乙二胺-乙二醇緩沖液測定呈色穩(wěn)定。乙醇胺-硼酸緩沖容量較大,，并能使空白試劑的吸光度保持較低讀數(shù),。2-氨基-2-甲基-1-丙醇無毒，無刺激性,，也能使空白管有較低的讀數(shù),。

（5）顯色劑有時略有結(jié)晶析出，是8-羥基喹啉在水中溶解度很低,，易析出結(jié)晶所致,，這時可取上清液應(yīng)用。

3,、乙二胺四乙酸二鈉滴定法

（1）測定標本若有黃疸或溶血時,，終點不易觀察，則必須將標本進行處理,，首先用草酸鹽將鈣沉淀,，再用鹽酸及檸檬酸鈉重溶,。

①尚需增加幾種試劑：0.7mol/L草酸銨；0.05mol/L檸檬酸鈉,；1mol/L鹽酸,。

②按下法操作：吸取血清0.1ml，置于離心管中,，加去離子水0.25ml,、0.7mol/L草酸銨0.05ml，混勻,。置56℃水浴中15min,。離心沉淀2000轉(zhuǎn)/分10min。小心傾去上清液,，并將離心管倒立于濾紙上吸干,。加1mol/L鹽酸及0.05mol/L檸檬酸鈉各0.1ml于離心管中，溶解沉淀,。按直接滴定法進行滴定及計算,。

（2）鈣指示劑種類繁多，名稱較亂,，不同指示劑所顯滴定終點不同,，受其他離子干擾的作用也不一樣，鈣紅指示劑終點明顯,，且較少受鎂離子等干擾,。但本身不穩(wěn)定。要經(jīng)常新鮮配置,，加入標本內(nèi)后要立即用EDTA-Na2滴定,。所用鈣紅為鈣-羧酸鈉，應(yīng)與乙二醛縮雙鄰氨基酚的別名“鈣紅”相區(qū)別,。

4、離子鈣測定：

（1）測定離子鈣最好用血清,。優(yōu)點不參入抗凝劑,，減少蛋白對電極的污染。肝素抗凝全血亦可用于離子鈣測定,，尤其急需要結(jié)果減少了凝血時間和離心分離血清的時間,。但過量的肝素（30u/ml）能使離子鈣濃度降低3%～5%。

（2）pH改變對Ca2+影響較大,。pH降低能使Ca2+增加,，反之能使鈣離子減少，故采到的血標本盡可能防止CO2逸出,，避免pH增加,。

（3）標本應(yīng)盡快測定，最好在采樣后1h內(nèi)完成。全血密封貯存于4℃冰箱可穩(wěn)定6h或更長些時間,。密封在注射器中的血清,，若無氣泡存在，室溫可保存1～2h,，4℃可保存24h以上,。

（4）離子鈣含量還與下列因素有關(guān)：

①站立能使離子鈣增高約1%～2%。

②延長靜脈淤血的時間能使離子鈣增加2%,，淤血時前臂運動幾分鐘離子鈣可增加8%,。

③臥床3～12天足以使離子鈣超出正常范圍。