PCR技術概論

聚合酶鏈反應(PolymeraseChain Reaction ,PCR)是80 年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異,、敏感,、產(chǎn)率高、快速,、簡便,、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點,；能在一個試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA 片段于數(shù)小時內(nèi)擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā),、一滴血,、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA 供分析研究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情,，用PCR 幾小時便可完成,。PCR 技術是生物醫(yī)學領域中的一項革命性創(chuàng)舉和里程碑。

溫故而知新（DNA的結(jié)構與復制）

一,、DNA結(jié)構：

DNA的基本單位：脫氧核苷酸

二,、DNA復制（生物體內(nèi)）

復制方式：半保留復制

DNA復制所需條件：

模板：DNA的兩條鏈

原料：四種脫氧核苷酸

酶：解旋酶、DNA聚合酶

能量：ATP

適宜的酸堿度和溫度

PCR原理

體外模擬DNA復制的過程,，對DNA進行擴增的技術,。

其所需條件（即標準的pcr反應體系）：

10×擴增緩沖液 　 10ul
4種dNTP混合物 　 各200umol/l
2種引物 　　　　   各10～100pmol　
模板DNA　　　 　  0.1～2ug　
Taq DNA聚合酶 　 2.5u　
mg2+　　　　　　  1.5mmol/l
加蒸餾水至 　         100ul

（高中階段掌握）參加pcr反應的物質(zhì)主要有，即引物,、酶,、dNTP、模板

PCR一般過程：變性→退火→延伸

新鏈延伸方向：5‘-3’

簡單版：

PCR的全稱為多聚酶鏈式反應,，原理是DNA雙鏈復制,。

但是DNA在體內(nèi)進行復制時需要解旋酶和DNA聚合酶，而進行體外復制時是高溫解旋（變性），退火時引物與DNA結(jié)合,，在Taq酶在作用下進行延伸,。