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內(nèi)參蛋白是用來確保蛋白上樣量一致性,，量化目的蛋白的表達(dá)情況，是免疫印跡（WB）和免疫熒光（IF）等實驗結(jié)果定量分析或定性比較的重要標(biāo)尺,。
內(nèi)參蛋白主要是一些持家基因，這些持家基因執(zhí)行大量的基本功能,，并持續(xù)在多種組織和細(xì)胞中高水平表達(dá),。 常見內(nèi)參蛋白包括 Actin,、Tubulin、GAPDH,、Histone H3 等,。
但是，研究不同類型的蛋白,，對內(nèi)參的選擇是有講究的，如：
1. 胞漿蛋白的內(nèi)參與胞核蛋白的內(nèi)參是不一樣的,；
2. 在一定的實驗條件下,，內(nèi)參蛋白的表達(dá)發(fā)生明顯的變化時需要選擇其他表達(dá)不變或者變化很小的蛋白；
3. 當(dāng)研究的蛋白的分子量與內(nèi)參接近時,，需要選擇分子量與目的蛋白的分子量差距比較大的蛋白,。
以下這張圖歸納了不同細(xì)胞組分對應(yīng)的內(nèi)參及其分子量，掌握了這張圖,，內(nèi)參選擇不再難,。快動動你的手指收藏起來吧,。
上圖來自 CST Guide 科研寶典：《CST Guide: Pathways & Protocols》
多數(shù)情況下,，內(nèi)參蛋白的表達(dá)量很高且穩(wěn)定，但是,，特定的實驗條件（環(huán)境壓力,，外界因素刺激等）會引起這些內(nèi)參蛋白的變化，因此有些內(nèi)參在不同實驗條件或研究模型下不適合選擇,，我們總結(jié)了最近研究的結(jié)果,，列出有些實驗條件下不合適的內(nèi)參供參考： 1. 研究結(jié)腸癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移時，細(xì)胞骨架蛋白 Vinculin 不適合做全細(xì)胞的內(nèi)參,。近期研究表明,，結(jié)腸癌中 Vinculin 表達(dá)的減少和增加與致癌和轉(zhuǎn)移有關(guān)聯(lián)1。 2. 在環(huán)境壓力下,，HSP70 和 HSP90 被誘導(dǎo)而表達(dá)發(fā)生變化,，盡管 HSP70 和 HSP90 正常情況下是組成性表達(dá)的分子伴侶，能夠保持蛋白合成穩(wěn)態(tài),，但環(huán)境壓力下,，HSP70 和 HSP90 不適合胞漿蛋白的內(nèi)參2。 3. 當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡的時候,，核多聚 (ADP-核糖) 聚合酶 PARP 和核膜的結(jié)構(gòu)組分 Lamins,，都不適合做核蛋白的內(nèi)參。在凋亡細(xì)胞體內(nèi),，PARP 是 caspase-3 裂解的主要靶蛋白之一3,。
Lamin A/C 能夠被 caspase-6 切割,，可以作為 caspase-6 激活的標(biāo)志。在凋亡過程中,，Lamin A/C 能夠被特異地剪切成大片段 (41-50 kDa) 和小片段 (28 kDa),。Lamin 的剪切會引起細(xì)胞核的失調(diào)和細(xì)胞死亡4,5。 4. VDAC (電壓依賴性陰離子通道) 廣泛表達(dá),，定位于線粒體外膜,，通常認(rèn)為這是代謝傳入或傳出線粒體的主要方式。另外,，這個通道在凋亡信號中發(fā)揮重要作用,。
Bcl-2 家族蛋白調(diào)控凋亡過程中線粒體通透性的改變，他們能結(jié)合 VDAC 改變通道的動力6,。VDAC 的同二聚體化可能是一種改變線粒體通透性和促進(jìn)細(xì)胞色素 C 釋放的機制,。
5. Cofilin 屬于一組保守的小 Actin-結(jié)合蛋白家族，在胞質(zhì)分裂,，內(nèi)吞,，胚胎發(fā)育，壓力應(yīng)激和組織再生過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用,。在刺激因素作用下,，Cofilin 作為提前存在的細(xì)絲促進(jìn) Actin 肌動蛋白絲的再生7。Cofilin 的第 3 位絲氨酸被 LIMK 或 TESK 磷酸化后會抑制 Cofilin 的這種作用8,。
6. Actin ,，一種廣泛表達(dá)的真核蛋白，是細(xì)胞骨架的重要組分,。研究證明在原始乳腺癌細(xì)胞中 Actin 是高度磷酸化的9,。研究也發(fā)現(xiàn)凋亡條件下，心臟肌肉以及骨骼肌中都能觀察到 beta-Actin 的清除10,，因此,，beta-Actin 不適用于心臟和骨骼肌的樣品。心肌和骨骼肌樣本可以用 alpha-Actin 做內(nèi)參,。
Caspase-3 對 Actin 的清除會加速泛素/蛋白酶體依賴的肌肉蛋白酶解11,。 細(xì)胞生長條件的改變以及與胞外基質(zhì)組分的相互作用都可能會導(dǎo)致 Actin 蛋白合成的變化 。 7. GAPDH（甘油醛－3－磷酸脫氫酶）, 在糖酵解過程中將 3-磷酸甘油醛進(jìn)一步磷酸化,。雖然在不同組織中的表達(dá)水平有差異,，但 GAPDH 普遍被認(rèn)為是一個組成型表達(dá)的持家蛋白,。正是由于這個原因,，GAPDH 的 mRNA 和蛋白通常在對其它有變化的靶蛋白測定實驗時作為對照,。當(dāng)代謝信號通路受到影響時 GAPDH 不適合做內(nèi)參等。
8. 球形微管蛋白亞基包含微管建筑塊,，由 α/β-tubulin 異源二聚體形成所有真核細(xì)胞的 tubulin 亞單位,。 對抗微生物和抗有絲分裂藥物耐受性的不同而會導(dǎo)致 Tubulin 的表達(dá)發(fā)生變化 ,。
為了滿足你各種實驗的需要，CST 為您準(zhǔn)備了含優(yōu)選貨號的內(nèi)參 Sampler kit,，性價比高,，購買方便。
#4670 Loading Control Antibody Sampler Kit (HRP Conjugate)
#5142 Loading Control Antibody Sampler Kit
#9774 Loading Control Antibody Sampler Kit (Mouse)
| Loadong Control | No. | Applications | Reactivity | | Vinculin | 13901 | W IHC-P F | H M R Mk | | 18799 | W | H M R Mk | | 4650 | W | H M R Mk Dg | | HSP90 | 4877 | W IHC-P IF-IC F | H M R Mk (B) | | 70657 | F | H M R Mk (B) | | 79641 | W | H M R Mk (B) | | 4874 | W IHC-P | H M R Mk Dm Z (C) (B) | | 4875 | W IHC-P F | H M R Mk (B) | | HSP70 | 46477 | W IHC-P | H | | 4873 | W IP IHC-P IF-IC F | H Mk | | 4872 | W IHC-P | H M R Mk B | | 4876 | W | H M R Mk | | HSP60 | 12165 | W IHC-P IF-IC F | H M R Hm Mk X Z B Pg (C) (Dg) (Hr) | | 46611 | W | H M R Hm Mk X Z B Pg (C) (Dg) (Hr) | | 56831 | F | H M R Hm Mk X Z B Pg (C) (Dg) (Hr) | | 4869 | W IF-IC F | H M R Mk Dm | | 4870 | W IF-IC F | H M R Mk Dm | | MEK1/2 | 13033 | W | H M R Mk Dm (Hm) (X) (Z) (B) (Dg) (Pg) (Ce) | | 28708 | F | H M R Mk Dm (Hm) (X) (Z) (B) (Dg) (Pg) (Ce) | | 4694 | W IHC-P IF-IC F | H M R Mk | | 8727 | W IF-IC F | H M R Mk Dm (Hm) (X) (Z) (B) (Dg) (Pg) (Ce) | | 9122 | W IP | H M R Mk Dm (C) (X) | | 9126 | W | H M R Mk (Dg) | | GAPDH | 2118 | W IHC-P IF-IC F | H M R Mk B Pg (Pg) | | 3683 | W | H M R Mk B Pg (Pg) | | 3906 | IF-IC F CS-CA | H M R Mk B Pg (Pg) | | 3907 | IF-IC F | H M R Mk B Pg (Pg) | | 5014 | W | H M R Mk B Pg (Pg) | | 5174 | W IHC-P IF-IC | H M R Mk (Pg) | | 8884 | W | H M R Mk (Pg) | | 97166 | W | H M R Mk | | PARP | 6704 | IP | H M R Mk | | 9532 | W IP IF-IC | H M R Mk | | 9542 | W | H M R Mk | | Lamin A/C | 4777 | W IP IHC-P IF-F IF-IC F | H M R Mk | | 53496 | F | H M R Mk | | 8617 | IF-F IF-IC F | H M R Mk | | 2032 | W IHC-P | H M R (B) | | Lamin B1 | 12586 | W | H M R (Mk) (Pg) | | 13435 | W IP | H M R (B) (Dg) (Pg) | | 15068 | W | H M R (B) (Dg) (Pg) | | HDAC1 | 34589 | W IP IF-IC ChIP | H M R Mk | | 5356 | W IP | H M R Mk | | 59581 | W | H M R Mk | | 2062 | W | H M R Mk | | TBP | 12578 | W IP ChIP | H Mk | | 44059 | W IP ChIP | H M R Mk (C) (B) | | 8515 | W | H M R Mk | | PCNA | 13110 | W IP IHC-P IF-F IF-IC F | H M R Mk | | 2586 | W IP IHC-P IF-IC F | H M R Mk B Pg | | 8580 | IF-IC F | H M R Mk B Pg | | HistoneH3 | 12167 | F | H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) | | 12230 | IF-IC F | H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) | | 5748 | W | H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) | | 4620 | ChIP | H M (R) (Hm) (Mk) (C) (Dm) (X) (Z) (B) | | 5192 | W | H M R Hm Mk Dm Z B Dg Pg | | 12648 | W | H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) | | 14269 | W IHC-P IF-IC F ChIP | H M R Mk | | 3638 | W | H M R Mk (Dm) (X) (Hr) | | 3680 | IHC-P | H (M) (R) (Mk) (Dm) (X) (Hr) | | 4499 | W IHC-P IF-IC F | H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) | | 82241 | F CS-CA | H M R Mk (Hm) (C) (Dm) (X) (Z) (B) | | 9717 | W | H M R Hm Mk Dm Z B Dg Pg | | 2650 | ChIP | H M (R) (Mk) (C) (Dm) (X) (Z) (B) (Hr) | | 9715 | W | H M R Mk Z B Pg (Dm) | | VDAC | 12454 | W | H M R Mk | | 4661 | W | H M R Mk | | 4866 | W IHC-P | H M R B | | COX IV | 11967 | W IP IHC-P IF-IC | H M R Mk | | 4850 | W IP IHC-P IHC-F IF-IC F | H R Mk Z B Pg | | 4853 | IF-IC F | H R Mk Z B Pg | | 5247 | W | H R Mk Z B Pg | | 7561 | IF-IC F | H R Mk Z B Pg | | 8692 | IF-IC | H R Mk Z B Pg | | 8693 | IF-IC | H R Mk Z B Pg | | 4844 | W IP IHC-P F | H M R Mk B | | α-Actinin | 12413 | W | H M R Mk (Z) | | 6487 | W IF-IC | H M R Mk (Z) | | 3134 | W IF-IC | H M R Hm Mk | | β-Actin | 12262 | W | H M R Hm Mk Dg | | 12620 | W | H M R Mk (Hm) (C) (B) (Pg) | | 3700 | W IHC-P IF-IC F | H M R Hm Mk Dg | | 4970 | W IHC-P IHC-F IF-IC F | H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) | | 5057 | W F | H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) | | 5125 | W | H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) | | 8046 | IF-IC | H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) | | 8457 | W IF-IC F | H M R Mk (Hm) (C) (B) (Pg) | | 8584 | IF-IC F | H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) | | 8844 | IF-IC F | H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) | | 9470 | IF-IC | H M R Mk B Pg (Hm) (C) (Dg) (Hr) | | 4967 | W | H M R Hm Mk Mi Dm Z B (C) (X) (Dg) (Pg) (Hr) | | α-Tubulin | 12351 | W | H M R Mk | | 2125 | W IHC-P IF-IC F | H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) | | 3873 | W IHC-P IF-IC | H M R Mk | | 4285 | W | H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) | | 5046 | IF-IC F | H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) | | 5059 | IF-IC | H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) | | 5063 | IF-IC F CS-CA | H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) | | 8058 | IF-IC F | H M R Mk | | 9099 | W | H M R Mk Dm Z B Pg (Dg) | | 2144 | W IHC-P IF-IC F | H M R Mk Dm B (X) | | β-Tubulin | 15115 | W IHC-P IF-IC | H M R Mk | | 2128 | W IHC-P IF-IC F | H M R Mk Z B (C) | | 3623 | IF-IC F | H M R Mk Z B (C) | | 3624 | IF-IC F | H M R Mk Z B (C) | | 5346 | W | H M R Mk Z B (C) | | 56739 | W | H M R Mk | | 2116 | IF-IC | H M R Mk Z B (C) | | 6181 | W | H M R Mk Z B (C) | | 7634 | IF-IC | H M R Mk Z B (C) | | 86298 | W IHC-P IF-IC | H M R Hm Mk | | 2146 | W IHC-P IF-IC F | H M R Mk Z B (X) | | Cofilin | 5175 | W IF-IC | H M R Mk Dg | | 8503 | W | H M R Mk Dg | | 3318 | W | H M R Mk B | | Profilin-1 | 3246 | W | H M R Hm Mk Dg | | 3237 | W IF-IC F | H M R B | | Cadherin | 4073 | W | H M R | | 4068 | W IP IHC-P | H M R Mk Dm Z B | | Na,K-ATPase | 3010 | W | H M R Hm Mk Z | | CD71 | 13113 | W IP IF-IC F | H | | 13208 | W IP IF-IC | H | | 82582 | F | H | | Caveolin-1 | 3267 | W IP IHC-P IF-IC F | H M R Hm Mk B Dg | | 3238 | W IP IHC-P IHC-F IF-IC F | H M R Hm Z B Pg | | 12506 | W | H M R Hm Mk B Dg | Sampler Kit ：為了滿足你各種實驗的需要,，CST 為您準(zhǔn)備了含優(yōu)選貨號的內(nèi)參 Sampler kit,。 | | 9774 | Loading Control Antibody Sampler Kit (Mouse) | | 4670 | Loading Control Antibody Sampler Kit (HRP Conjugate) | | 5142 | Loading Control Antibody Sampler Kit
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