1微生物污染問題

1.1造成污染的原因

（1）外植體材料本身帶菌,；（2）接種過程中接種工具滅菌不徹底或者交叉污染,；（3）培養(yǎng)基滅菌不徹底。

1.2防治措施

（1）外植體滅菌要徹底,。首先可以選擇組織內(nèi)部無菌材料,；其次根據(jù)不同的材料選擇不同的消毒劑和消毒時間；第三外植體消毒要細心,，比如莖段消毒,，經(jīng)過消毒處理后，要把兩端切去約0.5cm,，這樣就可以大大減少污染的概率。

（2）嚴格遵守無菌操作規(guī)程,。操作人員在進入接種室前一定要洗手,，然后換上接種服，帶上口罩,，操作之前先用75%的酒精擦拭雙手,，接種工具要經(jīng)常灼燒一保證不會帶菌或者交叉污染。

（3）加抗生素,。在培養(yǎng)基中適當?shù)募尤肟股乜梢杂行Х乐刮廴尽?/p>

（4）無菌培養(yǎng)環(huán)境,。培養(yǎng)室內(nèi)要定期進行滅菌，可在室內(nèi)裝紫外燈,，或者用高錳酸鉀和甲醛熏蒸,，或者利用其它的熏蒸劑進行滅菌。

（5）控制外植體的接種數(shù)量,。每個培養(yǎng)瓶中盡量接種少量的外植體,。

（6）及時繼代培養(yǎng)。定期檢查組培苗的生長情況,，發(fā)現(xiàn)有污染苗頭的組培苗及時轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基上,。

2褐變問題

2.1影響褐變的因素

（1）外植體材料的基因型；（2）外植體的生理狀態(tài),；（3）培養(yǎng)基成分,。

2.2防治措施

（1）選擇適當?shù)耐庵搀w。選擇處于旺盛生長狀態(tài)的外植體,，對于容易褐變的植物注意對其不同品系的基因型進行篩選,，選擇褐變率較低的材料作為外植體。

（2）在培養(yǎng)基中加入還原性物質(zhì)或者吸附劑,。在培養(yǎng)基中加入偏二亞硫酸鈉,、抗壞血酸、檸檬酸等抗氧化劑,；或者加入0.1-1%的活性炭吸附培養(yǎng)物在生長過程中分泌的酚類,、醌類物質(zhì),，但是要注意活性炭也可以吸收培養(yǎng)基中的激素使之濃度降低。,。

（3）對培養(yǎng)材料進行預(yù)處理,。用抗氧化劑溶液進行預(yù)處理或者在接種前用無菌水洗凈切口滲出的酚類物質(zhì)。

（4）適當?shù)呐囵B(yǎng)條件,。在培養(yǎng)初期保持較低溫度（15-20℃）,，可以降低PPO活性，防止酚類物質(zhì)氧化,，減輕褐變,。

（5）其他措施，培養(yǎng)初期進行連續(xù)轉(zhuǎn)接,。

3玻璃化問題

3.1影響玻璃化的因素

（1）外植體材料,；（2）培養(yǎng)的環(huán)境條件；（3）培養(yǎng)基成分,，瓊脂的濃度,、碳源的種類及含量等；（5）封口材料,。

3.2防治措施

（1）降低NH4+濃度,，減少培養(yǎng)基中氮化物的含量。

（2）降低細胞分裂素的含量,。

（3）適當增加瓊脂的濃度,，以降低培養(yǎng)基的水勢。

（4）增加光照強度和光照時數(shù),。

（5）在培養(yǎng)基中加入5-10mg/L的PP333,。