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基因克隆中質(zhì)粒DNA的小量制備,？ A9：常見的質(zhì)粒DNA提取方法有簡易一步提取法,、堿裂解法和煮沸法。最常用的為堿裂解法,，原理是：在pH 12.0-12.6堿性環(huán)境中,，線性的大分子量細(xì)菌染色體DNA變性，而共價閉環(huán)質(zhì)粒（CC）DNA仍為自然狀態(tài),。將pH值調(diào)至中性并有高鹽濃度存在的條件下,，染色體DNA之間交聯(lián)形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。大部分染色體DNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀,，而質(zhì)粒DNA仍為可溶狀態(tài),。通過離心，將可去除大部分細(xì)胞碎片,、染色體DNA,、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA尚在上清中,，再用乙醇沉淀回收質(zhì)粒DNA,。目前,，SunShineBio的商品化質(zhì)粒小量提取試劑盒可以幫助您回收高質(zhì)量、高效率的質(zhì)粒,。 |
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