HE染色是組織學中最基礎、使用最廣泛的染色手段,。它可以很好地區(qū)分骨組織結構,、骨髓腔中的細胞(紅系、粒系,、巨核系,、骨膜上的成骨細胞、腔中的破骨細胞,、脂肪細胞),。如下圖所示。其中,，五角星和白色箭頭表示大量炎癥細胞,，三角形表示新骨小梁，黑色箭頭表示骨髓,。如果僅僅觀察性研究,，采用HE是完全可以的，鏡下也基本能夠區(qū)分這些細胞類型。

然而,，現(xiàn)在很多科研指標需要量化評價,，即咱們常說的半定量研究。特別是研究骨折后骨痂形成過程時,，我們必須采用特殊染色才可以半定量研究,。HE染色顯然是不能滿足要求的。

Masson染色的顏色對比鮮明,，可見明顯的膠原纖維網（甲苯胺藍染色則為藍色,，甲基綠則為綠色），能較好地反映纖維組織的形態(tài),。其中,，藍色表示新形成的骨，紅色表示成熟的骨組織,。圖中很明顯可以看到,，對比組及水凝膠組治療的的骨缺損被板層骨和骨髓替代，并且骨的一些區(qū)域高度成熟,。當然,，不同修復時期的膠原纖維數(shù)量是不一樣的，隨著修復時間增長,，染色區(qū)域逐漸增大表明成熟的骨組織逐漸增加,。

骨Masson染色需要注意的以下幾點，否則會出現(xiàn)色差甚至根本無法染上色的情況：

亞甲基藍-酸性品紅染色可以清晰的顯示成骨細胞、細胞基質以及類骨質,。染色后,，植入體表面的羥基磷灰石涂層為紫色，成骨細胞核為深藍色或深紫色,，細胞質基質為淡紫色,，紫灰色為新生骨組織。圖片展示了不同時期骨修復的狀態(tài),，在牽張成骨早期,，可見淺紫色的細胞分泌的細胞外基質，深紫色的細胞核,，未見明顯骨小梁結構,。中期，可見骨小梁較細小,，骨小梁區(qū)比結締組織區(qū)顏色更紫,。在牽張成骨后期，見骨小梁較粗壯,，周圍一圈可見深藍色成骨細胞,，骨小梁邊緣處為紫灰色新生骨組織，中心為深紫色的較成熟骨組織,。

鈣結節(jié)的形成為成骨細胞特有,，鈣沉積是表明新骨生成的一個證據(jù)。鈣鹽沉積區(qū)域為黑色或棕黑色,，細胞核表現(xiàn)為藍色,。Von Kossa染色證實，與無顆粒對照相比,，在所有顆粒植入的股骨中有鈣沉積的證據(jù),。與對照組相比，明顯看出植入HUVEC和HBMSC顆粒的缺損內和周圍有鈣沉積,，顆粒周圍有同心堆積,，夾雜著類骨質形成(粉紅色/紫色，箭頭),，部分是原有骨的殘余,。

Trap染色是用于檢測骨組織、骨細胞中特征物質的染色,，使破骨細胞呈紅色,，背景呈綠色或藍色,。抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap）為破骨細胞的標志酶,，特異地分布于破骨細胞中,，為破骨細胞所特有，通常作為鑒別破骨細胞的重要標志物,。如圖可見隨著濃度增高,，顯著刺激破骨細胞分化（RANKL+組）?？傊?，Trap染色可直接鑒別及分析破骨細胞的狀態(tài)。

茜素紅可以與鈣發(fā)生顯色反應,，生成深紅色的化合物,，這樣成骨誘導的細胞外面沉積的鈣結節(jié)也就被染成了深紅色。如圖示,，下面紅色即為茜素紅染色后的結果,。很明顯觀察到，鈣結節(jié)逐漸增加,，表明了材料更優(yōu)異的成骨能力,。

番紅O-固綠染色可直觀反映關節(jié)軟骨、軟骨下的骨組織結構,，嗜堿性的軟骨與堿性染料番紅 O 結合呈現(xiàn)紅色,，嗜酸性的骨和酸性染料固綠結合而成藍色，在關節(jié)軟骨及軟骨下骨的形態(tài)學研究中受到了歡迎,。與下圖表現(xiàn)的一致,，代表軟骨的紅色部分從左至右依次增加，說明材料可以有效促進軟骨修復,。

其中,，HE染色是最常用的染色方法；Masson染色是結締組織染色的最經典方法,，以選擇性地顯示膠原纖維和肌纖維,；番紅Ｏ?固綠染色常用于區(qū)分軟骨組織和骨組織區(qū)；Von Kossa染色法中的銀溶液作用于含有不溶性鈣鹽的切片,；亞甲基藍?酸性品紅染色主要用于區(qū)分新生骨質,，多用于評估種植體骨界面成骨效果以及血管化程度；TRAP染色能夠特異性展示破骨細胞的狀態(tài),。