| 研究背景及目的大腸癌(Colorectal Cancer,CRC)是臨床上常見的消化道惡性腫瘤,它的發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤病例中一直都居高不下。臨床上治療CRC以外科手術為主要方法之一,輔以化療,、放療和中醫(yī)藥治療等,其中手術最為廣泛且療效更確切,。近年來越來越多的研究報道腸道微生物與CRC之間存在著密切的關聯(lián),手術治療也會明顯改變患者的腸道微生態(tài),術后出現的一系列并發(fā)癥也與腸道菌群的結構改變有關,。中醫(yī)藥治療往往能減輕患者術后相關臨床癥狀,改善生活質量,具有良好的療效。且近來研究發(fā)現中醫(yī)藥與腸道菌群之間也存在著密切的聯(lián)系,。經過臨床觀察以及文獻研究發(fā)現臨床上不少CRC術后患者中醫(yī)辨證屬于脾腎陽虛證,采用中藥干預后臨床效果突出,。本研究擬探討中藥干預CRC術后脾腎陽虛證患者的相關癥狀變化情況,以及采用第二代高通量測序技術對患者中藥干預前后的腸道菌群結構進行分析,并與正常健康人群的腸道菌群結構作比較,以期找到CRC術后脾腎陽虛證患者腸道菌群的變化,證明中藥干預在改善患者相關癥狀的同時能夠改善CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道微生態(tài),進一步說明中藥干預的療效與腸道微生態(tài)之間具有相關性。并嘗試找出腸道菌群中與CRC治療有關的有益菌,、有害菌和關鍵菌,從而為中醫(yī)藥抗腫瘤的研究提供新證據,、新方法。研究方法本研究共納入2018年1月至2020年12月于北京中醫(yī)藥大學東方醫(yī)院門診及住院治療的CRC術后脾腎陽虛證患者共40例,采用前瞻性自身前后對照試驗,使用中藥制劑持續(xù)干預2周,對患者中藥干預前后的相關癥狀和體征通過癥狀積分法進行評價,分析中藥干預對CRC術后脾腎陽虛證患者的療效,。對40名患者用藥前后以及10名正常健康人共90份糞便標本進行采集,然后使用16S rDNA測序技術分別檢測出健康正常志愿者(作為研究基線),、CRC術后脾腎陽虛證患者以及中藥干預后的CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道菌群信息,然后進行一系列深入的群落結構的統(tǒng)計學及可視化分析比較三組樣本腸道菌群結構的變化,得到CRC術后脾腎陽虛證患者腸道菌群的特殊變化,證明中藥干預CRC術后脾腎陽虛證患者的療效及與腸道菌群的關系,并嘗試找出腸道菌群中與CRC治療有關的有益菌、有害菌及關鍵菌,。研究結果1.40名CRC術后脾腎陽虛證患者中藥干預后評價為痊愈者2名,顯效者16名,有效者22名,無效者0名,中醫(yī)癥狀改善的有效率為100%,。其中中藥干預前中醫(yī)癥狀總積分為13.65±2.65,中藥干預1周后為9.00±2.15,中藥干預2周后為4.58±2.29。三個時間點互相兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),。說明采用中藥干預CRC術后脾腎陽虛證患者后的相關癥狀獲得了明顯的改善,。2.OTU分類鑒定結果顯示中藥干預前后CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道菌群的結構具有一定的相似性,但也存在一定的差異性,中藥干預在改善患者相關癥狀的同時使患者的腸道微生物多樣性增加,具有比干預前有更多樣的腸道微生物。3.Alpha多樣性分析結果顯示正常健康人的腸道微生物群落的豐富度和多樣性均高于CRC術后脾腎陽虛證患者,而中藥干預使CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道微生物群落的豐富度和多樣性較用藥前有一定程度的升高,使之接近于正常健康人群,。4.Beta多樣性分析結果顯示CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道菌群與正常健康人相比存在顯著差異,處于失調狀態(tài),而中藥干預使患者的腸道菌群微生態(tài)得到改善,且中藥干預后患者的腸道菌群組內差異性變小,說明中藥干預CRC術后患者能改善其腸道微生態(tài),。5.CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道菌群組成和相對豐度與正常健康者相比無顯著(P<0.05)減少物種,CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道菌群組成和相對豐度與正常健康者相比存在顯著增高(P<0.05)的物種,尤其是克雷伯氏菌屬(gKlebsiella)、埃希氏菌屬(gEscherichia),、gLachnoclostridium菌,。可見CRC術后脾腎陽虛證患者腸道菌群失調的主要問題是共生菌和致病菌失衡,條件致病菌異常增多,這與CRC術后脾腎陽虛患者出現的相關癥狀具有相關性,。6.中藥干預前后CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道菌群的結構在門,、綱、目,、科,、屬水平上均發(fā)生了改變,CRC術后脾腎陽虛證患者中藥干預后組成和相對豐度存在顯著減少(P<0.05)的物種,尤其是gLachnoclostridium、埃希氏菌屬(gEscherichia)、克雷伯氏菌屬(gKlebsiella),、腸球菌屬(gEnterococcus),。CRC術后脾腎陽虛證患者中藥干預后組成和相對豐度顯著增多(P<0.05)的物種普雷沃氏菌科(fPrevotellaceae),尤其是 gPrevotella9、柔嫩梭菌屬(gFaecalibacterium),、羅姆布茨菌(gRombotusia),。中藥干預能抑制CRC術后脾腎陽虛證患者腸道微生物中條件致病菌的生長,促進有益菌的生長,這與中藥干預改善了 CRC術后脾腎陽虛證患者的相關癥狀具有相關性。7.本研究通過組成及豐度檢測發(fā)現在不同組別存在某些特定菌,這些物種可以作為監(jiān)測不同治療階段的疾病活動性和治療反應性的指標,。CRC術后脾腎陽虛證患者組區(qū)別于別組的特定菌為乳桿菌目(oLactobacillales),、克雷伯氏菌屬(gKlebsiella)、gRuminococcusgnavusgroup,中藥干預后組為:羅姆布茨菌(gRombotusia),、gAnaerostipes,中藥干預前組為乳桿菌目(oLactobacillales),、克雷伯氏菌屬(gKlebsiella)、gRuminococcusgnavusgroup,正常健康組為巨單胞菌屬(gMegamonas),、柔嫩梭菌屬(gFaecalibacterium),、gSubdoligranulum、gEnorma,、gRoseburia,、gAlistipes、薩特氏菌屬(gSutterella),、gRuminococcaceaeUCG002,。8.在人體腸道微生物所有樣本絕對豐度前20的屬水平范圍內,本研究發(fā)現不存在相互拮抗的菌群,而gPrevotella9和巨單胞菌屬(gMegamonas)之間均存在相互協(xié)同作用。研究結論本研究證實了CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道菌群結構與正常健康人相比處于失調狀態(tài),CRC術后脾腎陽虛證患者腸道菌群失調的主要問題是共生菌和致病菌失衡,致病菌異常增多,這與CRC術后脾腎陽虛患者出現的相關癥狀具有相關性,。中藥干預可以改善術后患者相關癥狀,改善患者生活質量,。同時還發(fā)現中藥干預能夠能抑制有害菌的生長,促進有益菌的生長,主要使普雷沃氏菌科(fPrevotellaceae)的相對豐富度增加,而腸桿菌科(fenterobacteriaceae)、腸球菌科(fEnterococcaceae)的相對豐富度減少,改善了 CRC術后脾腎陽虛證患者的腸道微生態(tài),使腸道微生物群落的豐富程度和多樣性增加,有助于CRC術后患者腸道菌群結構恢復正常健康狀態(tài),這與中藥干預改善了 CRC術后脾腎陽虛證患者的相關癥狀具有相關性,。并且CRC術后脾腎陽虛證中藥干預前后的患者和正常健康者的腸道菌群均有其特定的關鍵菌,。中藥干預改善CRC術后脾腎陽虛證患者相關癥狀的作用機制與其改善患者的腸道微生態(tài)有關。 |
|
|
