37．[生物——選修1：生物技術(shù)實踐]（15分）

3-苯氧基苯甲酸（簡稱為3-PBA,，分子式C₁₃H₉O₃,，）是擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的降解中間產(chǎn)物，自然條件下難降解,、易產(chǎn)生遷移和蓄積，具有較大的危害性,。我國研究團隊通過“土壤取樣→富集培養(yǎng)→純化培養(yǎng)→菌種鑒定→提取和分離降解酶”途徑開展了降解3-PBA的相關(guān)研究,。經(jīng)鑒定，從土壤中分離到的菌種為米曲霉,。回答下列問題：

(1)純化培養(yǎng)時,，制備固體培養(yǎng)基的一般流程是：計算→稱量→溶化→_______→_______,。用平板劃線法分離米曲霉時,，需要使用_______挑取菌落，劃線的某個平板培養(yǎng)后第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落,，其他區(qū)域的劃線上卻均無菌落。操作失誤的原因可能是_______,。

(2)富集培養(yǎng)和純化培養(yǎng)都使用以3-PBA作唯一_______的_______培養(yǎng)基,，原因是：______________,。

(3)下圖為不同濃度3-PBA對米曲霉干重的影響。由下圖可知，降解菌干重先增加后減少的原因是_______,。 

【答案】

(1)     滅菌     倒平板     接種環(huán)     第一區(qū)域劃線結(jié)束,，接種環(huán)灼燒后未冷卻##劃線未從第一區(qū)域的末端開始

(2)     碳源     選擇     只有能分解利用3-PBA的菌株才能生存繁殖

(3)3-PBA作為碳源增多，促進降解菌的生長增殖,；濃度過高時，降解菌滲透失水,，影響生長

【分析】

平板劃線法：將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種,，劃線,，在恒溫箱里培養(yǎng),，在線的開始部分，微生物往往連在一起生長,，隨著線的延伸,，菌數(shù)逐漸減少,，最后可能形成單個菌落,。

【詳解】

（1）純化培養(yǎng)時，制備固體培養(yǎng)基的一般流程是：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板,。用平板劃線法分離米曲霉時，需要使用接種環(huán)進行挑取菌落,，接種前為了避免雜菌污染,，需要灼燒滅菌,。劃線的某個平板培養(yǎng)后第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷地長滿了菌落,，其他區(qū)域的劃線上卻均無菌落，其可能原因是第一區(qū)域劃線結(jié)束后，接種環(huán)灼燒滅菌后并未冷卻,，直接進行了第二劃線區(qū)的劃線操作，使得微生物因高溫而死亡,，無法長出菌落,；也可能是第二次劃線未從第一區(qū)域的末端開始劃線,，導(dǎo)致未獲得菌種。

（2）3-PBA的分子式是C₁₃H₉O₃,，故富集培養(yǎng)和純化培養(yǎng)都使用以3-PBA作唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，這樣的選擇培養(yǎng)基由于只含有3-PBA,，大部分的微生物無法分解3-PBA獲取能量，只有能分解利用3-PBA的菌株才能在這樣的培養(yǎng)基上生存繁殖,，以增加3-PBA降解菌的數(shù)量,。

（3）分析柱狀圖可知,，隨著3-PBA濃度增加，降解菌的干重先增加后減少,，說明在一定范圍內(nèi),，作為碳源的3-PBA含量增多,，促進降解菌的生長增殖,，但是如果3-PBA的濃度過高時，高于降解菌細胞內(nèi)的濃度,，會導(dǎo)致降解菌滲透失水,，影響生長,。