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積雪草總苷元抗抑郁作用機制的初步研究 ①曹尉尉② , 李 晏, 伊 佳③ ( ② 解放軍第 411 醫(yī)院 藥械科 上海 200081) 摘 要 : 目的 探討積雪草總苷元的抗抑郁作用機制,。方法 采用育亨賓毒性增強實驗,、阿樸嗎啡致刻板運動實驗、 5 2羥色胺酸誘導甩頭實驗,、單胺氧化酶抑制實驗等多種動物模型探討積雪草總苷元抗抑郁作用的可能機制,。結(jié)果 積雪草總苷元不協(xié)同育亨賓和阿樸嗎啡對小鼠的作用 , 但顯著增加 5 2羥色氨酸致小鼠甩頭作用和鹽酸色胺致癲癇樣作用。結(jié)論 積雪草總苷元抗抑郁作用可能與其增加 5 2羥色胺能神經(jīng)系統(tǒng),、抑制單胺氧化酶 (MAO) 有關(guān),。 關(guān)鍵詞 : 積雪草總苷元 ; 抑郁 ; 機制 Studies on the M echanism of Antidepressant Effect of Centella Triterpen ic Gen ines ① CAO Wei 2 Wei ② ,L I Yan, YIJia ③ ( ② Hospital 411 of Chinese PLA, Shanghai 200081 China) ? 0 4 ? 解放軍藥學學報 第 25 卷 第 1 期 積雪草總苷元抗抑郁作用機制的初步研究 曹尉尉 ① ② ③ 基金項目 : 上海市自然科學基金 ,No. 064119608 作者簡介 : 曹尉尉 (1959 - ) , 女 , 山東臨沂人 , 碩士 , 主任藥師。研究方向 : 藥理學,、中藥現(xiàn)代化,。 Tel: (021) 65407620; E 2 mail: sophi 2 a0904@126. com 第二軍醫(yī)大學學員 積雪草 [ Centella asiatica (L. )Urb ], 為傘形科 積雪草屬植物 , 我國外用及內(nèi)服治病已有兩千多年 歷史。其在濕熱黃疸,、癰腫瘡毒,、跌打損傷、肝炎,、皮 膚病,、流行性腦脊髓膜炎等方面的療效均很顯 著 [1 ] 。最近還表明其醇提物有抗腫瘤 [2 ] ,、抗艾滋病 毒逆轉(zhuǎn)錄酶 [3 ] 的活性,。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn) , 積 雪草總苷元 (Centella triterpenic genines, CATA) 能顯 著縮短小鼠強迫游泳實驗、小鼠懸尾實驗,、開野實驗 的不動時間 , 提示其有較好的抗抑郁活性 , 我們對其 作用機制作了初步的研究 , 現(xiàn)報道如下,。 1 材料與方法 1. 1 實驗動物 ICR 小鼠 , ♂ , 體質(zhì)量 18 20g, SD 大鼠 , ♂ , 體質(zhì)量 180 220g[ 均為第二軍醫(yī)大學實 驗動物中心 , 動物合格證號 : SCXK( 滬 ) 2007 2 0005 ]; 自由覓食和飲水 , 室溫 (23 ± 2) ℃ , 自然光照。 1. 2 藥品和試劑 積雪草總苷元 ( 純度 95% , 廣西 昌州天然產(chǎn)物開發(fā)有限公司 , 批號 : 070220) ; 鹽酸 氟西汀膠囊 ( 規(guī)格 : 20mg/ 粒 , 禮來蘇州制藥有限公 司分裝 , 批號 : 070606) ; 甲磺酸瑞波西汀膠囊 ( 規(guī) 格 : 4mg/ 粒 , 重慶藥友制藥有限責任公司 , 批號 : 071101) ; 氟哌噻噸美利曲辛片 ( 規(guī)格 : 氟哌噻噸 0. 5mg 和美利曲辛 10mg/ 片 , 丹麥靈北制藥有限公 司 , 批號 : 1072) ; 瑪氯貝胺片 ( 規(guī)格 : 0. 1g/ 片 , 魯南 貝特制藥有限公司 , 批號 : 061201) ; 育亨賓 , 阿樸嗎 啡 , 5 2羥色氨酸 , 鹽酸色胺 ( 均來自 sigma 公司 ) ,。 1. 3 實驗方法 1. 3. 1 育亨賓致小鼠死亡實驗 ICR 小鼠 , ♂ , 按 體質(zhì)量隨機分為 5 組 , 每組 10 只,。積雪草總苷元 3 個劑量組 , 分別為 30 、 60 ,、 120mg ? kg - 1 , 陽性藥甲磺 酸瑞波西汀膠囊劑量為 1. 6mg ? kg - 1 , 空白對照組給 予等體積生理氯化鈉溶液,。 ( 陽性藥給藥量按人用 劑量的 12 倍 ) 。小鼠每天上午灌胃 1 次 , 連續(xù)給藥 7d 。末次給藥后 1h, 各組動物分別皮下注射育亨賓 30mg ? kg - 1 , 觀察 0. 5 ,、 1 、 2 ,、 4 ,、 24h 內(nèi)的死亡率。 1. 3. 2 阿樸嗎啡致小鼠刻板運動實驗 動物分組 給藥同 1. 3. 1, 陽性藥氟哌噻噸美利曲辛片劑量為 0. 2mg ? kg - 1 ,。各組小鼠在末次給藥 1h 后 , 皮下注 射阿樸嗎啡 16mg ? kg - 1 , 立即單獨放入 16 × 27cm 的 小鼠籠中 , 籠底部預(yù)先鋪上揉有皺褶的紙 , 皺褶向 上,。根據(jù)小鼠刻板運動的評分標準 [4 ] , 觀察阿樸嗎 啡 1h 內(nèi)動物出現(xiàn)刻板運動的程度。評分標準為 : 無 定型活動反應(yīng) , 與空白對照組無區(qū)別 : 0 分 ; 動物不 連續(xù)聞 , 常伴有興奮話動 : 1 分 ; 動物連續(xù)聞 , 頭稍有 活動 , 伴周期性興奮活動 : 2 分 ; 動物連續(xù)聞和頭部 活動 , 伴有不連續(xù)咬,、啃,、舔的動作 , 并有短暫活動 期 : 3 分 ; 動物連續(xù)咬 , 啃 , 無興奮活動期 , 有時全身 迅速移位 : 4 分。 1. 3. 3 5 2羥色氨酸誘導的小鼠甩頭行為實驗 分組 與給藥同 1. 3. 1, 陽性藥鹽酸氟西汀劑量為 20mg ? kg - 1 , 末次給藥后 1h 腹腔注射 150mg ? kg - 1 5 2 羥色氨酸 , 給藥 后 5min 開始記錄 15min 內(nèi)小鼠甩頭次數(shù),。 1. 3. 4 抑制單胺氧化酶作用的研究 [5 ] 實驗大鼠 隨機分為 5 組 , 每組 10 只,。試驗藥物 3 個劑量組 , 分別為 15 、 30 ,、 60mg ? kg - 1 , 陽性藥瑪氯貝胺片 100 mg ? kg - 1 , 末次給藥后 1h 尾靜脈注射鹽酸色胺 (12 mg ? kg - 1 ) , 觀察注射后 5min 內(nèi)大鼠前肢是否出現(xiàn) 拍打動作和弓背陣攣狀態(tài) , 并且根據(jù)其激烈程度進 行評分 , 評分標準 : 未出現(xiàn)拍打動作 : 0 分 ; 間斷性拍 打動作 : 1 分 ; 持續(xù)性拍打動作 , 伴有弓背現(xiàn)象 : 2 分 ; 出現(xiàn)痙攣現(xiàn)象 : 3 分,。 1. 4 統(tǒng)計學處理 采用 SPSS13. 0 進行單因素方差 分析處理 , 結(jié)果用 x ± s 表示。 2 結(jié)果 2. 1 育亨賓毒性增強實驗 給予育亨賓后 , 30min 內(nèi)高劑量死亡 1 只 , 1h 內(nèi) , 藥物高,、中,、低、陽性及空 白各死亡 1 只 , 2h 內(nèi)陽性藥物組全部死亡,。 24h 死 亡率見表 1 ,。結(jié)果表明 CATA 在 30 120mg ? kg - 1 劑 量范圍內(nèi)不增強亨賓毒性作用。 ? 1 4 ? 解放軍藥學學報 2009 年 2 月 第 25 卷 第 1 期 Pharm J Chin PLA Vol 25 No 1 Feb 2009 表 1 CATA 對育亨賓的致死作用的影響 ( x ± s, n =10) Tab 1 The effect of CATA on yohi mbine 2 induced lethality( x ± s, n =10) 組別 劑量 (mg ? kg - 1 ) 0. 5h 內(nèi)死 亡 ( 只 ) 1h 內(nèi)死 亡 ( 只 ) 2h 內(nèi)死 亡 ( 只 ) 24h 內(nèi)死 亡率 (% ) 空白對照組 … 0 1 1 10 陽性組 1. 6 0 1 10 100 CATA 120 1 2 2 20 60 0 1 1 10 30 0 1 1 10 2. 2 阿樸嗎啡致小鼠刻板運動 積雪草總苷元對 注射阿樸嗎啡后的小鼠沒有增加刻板作用的能力 , 見表 2, 可見積雪草總苷元對阿樸嗎啡致小鼠刻板 作用無影響,。 表 2 CATA 對阿樸嗎啡致刻板運動的影響 ( x ± s, n =10) Tab 2 The effect of CATA on apomorphine 2 induced stereotype( x ± s, n =10) 組別 劑量 (mg ? kg - 1 ) 刻板評分 增加率 (% ) 空白對照組 … 2. 2 ± 0. 63 … 陽性組 1. 6 3. 4 ± 0. 52 b 54 CATA 120 2. 6 ± 0. 70 18 60 2. 6 ± 0. 52 18 30 2. 2 ± 0. 42 0 注 : 與空白對照組比較 , b P <0. 05 ,。 2. 3 5 2 羥色氨酸誘導小鼠甩頭作用實驗 數(shù)據(jù)表 明 , 積雪草總苷元對 5 2羥色氨酸誘導小鼠誘導甩頭 行為有著顯著的增加作用 ( P <0. 05) , 見表 3 。 表 3 CATA 對 5 2羥色氨酸誘導小鼠誘導甩頭行為的影響 ( x ± s, n =10) Tab 3 The effect of CATA on 5 2 HTP induced head 2 twitches( x ± s, n =10) 組別 劑量 (mg ? kg - 1 ) 甩頭次數(shù) 增加率 (% ) 空白對照組 … 5. 2 ± 2. 04 … 陽性組 1. 6 29. 2 ± 2. 44 b 461 CATA 120 15. 1 ± 3. 00 b 190 60 14. 8 ± 5. 05 b 185 30 9. 6 ± 1. 35 b 85 注 : 與空白對照組比較 , b P <0. 05 ,。 2. 4 抑制單胺氧化酶作用實驗 實驗證明 , 積雪草 總苷元對大鼠在注射鹽酸色胺后引起的拍打,、弓背、 陣攣程度有增強作用 , 見表 4 ,。 3 討論 3. 1 抑郁癥 (depression) 是由多種原因引起的以心 境障礙為主要特征的綜合征,。抑郁癥不但發(fā)病率高 影響人類身心健康 , 而且還能提高其他疾病的病死 率 , 使患者的生存率和生活質(zhì)量大大下降。抑郁癥 的發(fā)病機制至今尚未闡明 , 從最早的單胺假說 , 到下 丘腦 2垂體 2腎上腺 (HPA) 軸負反饋失調(diào) , 再到細胞 分子機制等都可能與抑郁的發(fā)病有關(guān),。按照抑郁癥 發(fā)病機理的單胺假說 , 抗抑郁藥的作用在于其能提 高中樞去甲腎上腺素能神經(jīng)功能和 / 或 5 2羥色胺能 神經(jīng)功能,。但是目前的抗抑郁藥普遍存在有效率 低 , 易復(fù)發(fā)的問題 , 且副作用多 [6 ] 。而中藥的特點 就在于其療效顯著并且副作用小 , 因此中醫(yī)藥治療 抑郁癥已廣泛被關(guān)注,。 表 4 CATA 對鹽酸色胺致癲癇樣作用的影響 ( x ± s, n =10) Tab 4 The effect of CATA on the eleptiform response evoked by tryptam ine hydrochloride( x ± s, n =10) 組別 劑量 (mg ? kg - 1 ) 評分 增加率 (% ) 空白對照組 … 1. 2 ± 0. 79 … 陽性組 100 2. 7 ± 0. 48 b 125 CATA 60 2. 2 ± 0. 63 83 30 1. 4 ± 0. 70 17 15 1. 3 ± 0. 48 8 注 : 與空白對照組比較 , b P <0. 05 ,。 3. 2 積雪草廣泛分布于世界各地 , 在我國主要分布 于長江流域以南的各地 , 資源穩(wěn)定 , 便于長期利用與 開發(fā)。我們的前期研究證明 , 小鼠灌胃積雪草總苷元 的最大耐受量 (MTD) 大于 10g ? kg - 1 , 大鼠灌胃積雪草 總苷元的 MTD 大于 4g ? kg - 1 , 并且對主要臟器無影 響 , 說明積雪草總苷元的毒性小 , 可以加以臨床應(yīng)用。 3. 3 本實驗表明 , 積雪草總苷元及氟西汀均可與 5 2 羥色氨酸產(chǎn)生協(xié)同作用 , 使小鼠甩頭次數(shù)明顯增加 , 提示 CATA 抗抑郁活性可能與其抑制 5 2羥色胺重攝 取,、增強腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì) 5 2 HT 神經(jīng)功能有關(guān),。而其 并不協(xié)同育亨賓致死和阿樸嗎啡致刻板運動 , 說明 積雪草總苷元抗抑郁活性與去甲腎上腺能神經(jīng)及多 巴胺神經(jīng)功能無關(guān)。正常狀態(tài)下 , 機體單胺氧化酶 活性較好能使鹽酸色胺等外源性胺類代謝失活 , 以 對抗其引起的癲癇樣作用 , 但是積雪草總苷元與陽 性藥均對鹽酸色胺的代謝有阻礙作用 , 說明其能夠 抑制體內(nèi)單胺氧化酶活性引起鹽酸色胺堆積 , 加重 了大鼠癲癇樣發(fā)作程度,。以上研究初步揭示了積雪 草總苷元對抗抑郁的作用機制,。 參考文獻 : [1 ] 徐 皓 , 李新生 , 吳三橋 . 積雪草藥理作用的研究 [J ]. 氨基酸 和生物資源 , 2005, 27(2) : 17 [2 ] Babu T. D, Kuttan G, Padikkala J. Cytotoxic and anti 2 tumour prop 2 ertyes of certain ta. xa ofUmbelliferae with special refemce to Cen 2 tella asiatica (L ) Urban [ J ]. Journal of Ethnopharm acology , 1995, 48(1) : 53 |
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