如何選擇合適的親和純化二級(jí)抗體,？將分多部來講解。本文為第1部分內(nèi)容：選擇合適的類型,。

親和力純化的二級(jí)抗體有三種不同的形式,，好的選擇取決于預(yù)期的應(yīng)用。從整體IgG,、F（ab'）2片段或Fab片段抗體中選擇,。整個(gè)IgG形式的抗體適用于大多數(shù)免疫檢測(cè)程序。

Jackson F（ab’）2和Fab抗體可用于具有特定檢測(cè)要求的實(shí)驗(yàn),?？寡迳形催M(jìn)行親和純化。

圖：IgG的消化（大約MW=160 kDa）產(chǎn)生了許多不同的片段,。木瓜蛋白酶消化產(chǎn)生兩個(gè)單價(jià)Fab片段和一個(gè)Fc片段,，每個(gè)片段約50 kDa。胃蛋白酶消化降解Fc結(jié)構(gòu)域,，留下分子量約為110 kDa的二價(jià)F（ab’）2片段,。

整個(gè)IgG抗體

通過免疫親和層析從抗血清中分離出整個(gè)IgG抗體。它們有一個(gè)Fc區(qū)和兩個(gè)由二硫鍵連接在一起的抗原結(jié)合Fab區(qū)（上圖），因此它們是二價(jià)的,。據(jù)報(bào)道,，平均分子量約為160kDa。整個(gè)IgG形式的抗體適用于大多數(shù)免疫檢測(cè)程序,，并且J具成本效益,。

F（ab'）2片段抗體

F（ab’）2片段抗體是通過胃蛋白酶消化整個(gè)IgG抗體生成的，以去除大部分Fc區(qū),，同時(shí)保留部分完整的鉸鏈區(qū),。F（ab’）2片段有兩個(gè)通過二硫鍵連接在一起的抗原結(jié)合Fab區(qū)域,，因此它們是二價(jià)的,。平均分子量約為110kDa。它們用于特定的應(yīng)用,，例如避免活細(xì)胞的次級(jí)抗體與Fc受體或蛋白質(zhì)A或蛋白質(zhì)G結(jié)合,。

如果一級(jí)抗體是完整的IgG抗體，則也可能發(fā)生與Fc受體的結(jié)合,，無論二級(jí)抗體的形式如何,，都會(huì)產(chǎn)生背景。為了阻止整個(gè)IgG一級(jí)和二級(jí)抗體與Fc受體結(jié)合,，在含有5%標(biāo)記二級(jí)抗體宿主正常血清的緩沖液中培養(yǎng)細(xì)胞,。

為了防止活細(xì)胞上Fc受體的覆蓋、內(nèi)吞和再生,，在4°C下,，在含有5%正常血清的緩沖液中培養(yǎng)，并添加疊氮化鈉以抑制代謝,。關(guān)于避免背景的更多信息,。

Jackson Fab片段二級(jí)抗體

Fab片段抗體是通過木瓜蛋白酶消化整個(gè)IgG抗體產(chǎn)生的，以去除整個(gè)Fc部分,，包括鉸鏈區(qū)域（上圖）,。這些抗體是單價(jià)的，只含有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn),。Fab片段的分子量約為50kDa,。它們可用于阻斷細(xì)胞、組織或其他表面上的內(nèi)源性免疫球蛋白,，并在使用來自同一物種的初級(jí)抗體的多重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中阻斷暴露的免疫球蛋白,。

Jackson FabuLight抗體

FabuLight 抗體是特異于IgG或IgM一級(jí)抗體Fc區(qū)的Fab片段二級(jí)抗體。它們能夠在與細(xì)胞或組織孵育之前標(biāo)記一級(jí)抗體,，而不會(huì)損害一級(jí)抗體的活性部位,。它們也可用于標(biāo)記細(xì)胞表面免疫球蛋白，而無需交聯(lián)和激活B細(xì)胞。

抗血清

抗血清通常用于免疫沉淀分析,，如免疫擴(kuò)散和免疫電泳,，但不適用于包衣ELISA板或其他需要親和純化抗體的應(yīng)用。建議使用抗全I(xiàn)gG分子的抗血清（抗IgG（H+L））將PAP橋接至一級(jí)抗體,。