二十年前,，當用作免疫治療劑的NK細胞在晚期白血病患者的治療中顯示出安全性和有效性時,，NK細胞療法獲得“入場券”。近年來,，隨著嵌合抗原受體（CAR）工程過繼性T細胞療法的成功以及可以將細胞轉化為強大的抗腫瘤武器技術的進步,，大家對NK細胞作為免疫療法候選者的興趣呈指數(shù)級增長。

自然殺傷（NK）細胞由獨特的先天淋巴細胞群組成,，具有識別和殺死病毒感染細胞和腫瘤細胞的潛在能力,。NK細胞具有多種細胞毒性機制，還可以分泌細胞因子調節(jié)免疫反應,，在抗癌免疫中起著關鍵作用,。在癌癥患者中，NK細胞通常表現(xiàn)出功能失調的表型,，其特征在于基因表達譜改變和細胞毒性功能降低,，從而降低了自體NK細胞治療應用的可行性。

NK-92是第一個獲得美國食品和藥物管理局（FDA）批準進行臨床試驗的NK細胞免疫療法,，是一種均勻的、永生的NK淋巴瘤細胞系,，可以離體擴增（表 1）,。NK-92細胞缺乏大多數(shù)KIRs的表達,，因此不太可能被抑制,。然而，它們的癌源性引起了安全性問題,，并且在患者給藥之前需要照射NK-92衍生的細胞產(chǎn)物,，這反過來又會對其體內的長期持久性和整體性治療潛力產(chǎn)生負面影響。另一個缺點是,，由于缺乏CD16表達,，NK-92細胞缺乏通過ADCC介導細胞殺傷的能力。

來自這些來源的NK細胞已被證明在過繼細胞治療應用中具有優(yōu)點和缺點,，應定制平臺以滿足每個患者群體和疾病適應癥的需求。

嵌合抗原受體（CARs）是合成的融合蛋白,，包括細胞外抗原識別域和觸發(fā)細胞活化的細胞內信號傳導部分,。CARs可以在免疫效應細胞上表達，以重新編程其對特定靶標的特異性（圖3a）,。CAR工程T細胞療法是第一個出現(xiàn)的,，為免疫腫瘤學應用開發(fā)了各種產(chǎn)品。此后,，該領域不斷擴大,，NK細胞也被整合到基因工程管道中。傳統(tǒng)上為T細胞設計的CAR已被用于CAR NK細胞的產(chǎn)生,，研究表明這些細胞可以靶向特異性腫瘤,，同時保持理想的安全性（圖4a）。細胞內抗原以肽-HLA復合物的形式存在,，通過TCR檢測,。工程NK細胞表達TCR可以檢測這種肽（圖3b）。TCR引導的NK-92細胞最近被證明可以引發(fā)抗腫瘤反應,。

NK細胞也可以通過銜接器引導到腫瘤部位,，通過觸發(fā)NK細胞上的激活受體來引發(fā)強烈的NK細胞介導的抗腫瘤反應，同時結合腫瘤細胞上的靶抗原（圖3c）,。開發(fā)策略包括三個特異性或四個特異性設計,，靶向腫瘤上的多種抗原，或通過交聯(lián)細胞因子部分,，促進NK擴張和存活,，旨在增強抗腫瘤作用。細胞銜接器的使用繞過了工程設計的需求,，不需要載體介導的基因轉移,，因此代表了一種更簡單，成本更低的制造工藝,，來提供能夠誘導CAR樣活性的產(chǎn)品,。

腫瘤通常表現(xiàn)出異常的代謝行為,，導致腫瘤生存環(huán)境中乳酸水平升高以及有毒分解代謝物,，腺苷和活性氧的濃度增加。此外,，TME內存在不斷增殖且功能失調的脈管系統(tǒng)和免疫抑制細胞亞群,，導致冒險進入TME的免疫效應細胞命運慘淡。為了克服代謝免疫抑制的有害影響,，目前的策略主要集中在兩個方面：改變腫瘤的代謝構成或修改免疫細胞中的基因表達程序,，以保護它們免受TME中抑制性代謝物的侵害,；通過小分子抑制劑或拮抗抗體阻斷腫瘤細胞上的CD73克服腺苷介導的免疫抑制,。此外，在臨床前研究中,，通過基因編輯刪除CAR T細胞和CAR NK細胞中的腺苷A2A受體,，顯示出抗腫瘤的功效。（圖5a）,。

腫瘤已經(jīng)進化出復雜的機制來逃避免疫監(jiān)視,，比如免疫檢查點的參與，使用相應單克隆抗體可以逆轉腫瘤引起的體外NK功能障礙,。然而依靠單克隆抗體來調節(jié)患者的免疫細胞,，由于其體內半衰期有限，需要多次輸注,。隨著基因編輯能力的進步,，NK細胞可以被穩(wěn)定修飾，以增強NK細胞功能,。一個例子是抑制性受體NKG2A的遺傳破壞,，這導致在接種HLA-E腫瘤的異種移植小鼠模型中具有更好的腫瘤抑制作用（圖5b）。此外,，在確定CISH（細胞因子誘導的含SH2蛋白）作為NK細胞功能的關鍵負調節(jié)蛋白后,，設計了缺乏這種細胞內細胞因子檢查點的CAR NK細胞，其代謝適應性和抗腫瘤活性明顯提升（圖5c）,。

NK細胞進入和穿透腫瘤床的能力是有效抗腫瘤免疫的關鍵,。NK細胞與其他免疫細胞類似，通過趨化因子受體及其在TME中分泌的同源配體的動態(tài)相互作用被引導到腫瘤部位。由于內化和降解導致趨化因子表達的迅速喪失,，因此越來越多策略采用基因工程來為NK細胞配備穩(wěn)定的異位趨化因子受體（圖5d）,。

CAR-T細胞治療已經(jīng)帶來了顯著的臨床結果，一些患者在CAR-T細胞持續(xù)存在的情況下實現(xiàn)了長達十年的有效治療,。這種新形式的細胞免疫療法也顯示出治療各種癌癥的潛力,，推動了越來越多新策略的發(fā)展。在過去的十年中,，該領域已經(jīng)看到NK細胞成為一種強大的候選藥物,，其生物特性可能有助于克服基于T細胞的方法所發(fā)現(xiàn)的一些局限性。一個值得注意的發(fā)現(xiàn)是,，早期臨床數(shù)據(jù)表明NK細胞非常適合用于異體治療環(huán)境,。雖然安全性結果令人鼓舞，但還需要進一步研究以闡明同種異體NK細胞是否能夠逃避T細胞的排斥反應以獲得長期持久性,。越來越多的臨床研究表明,，來自外周血單核細胞、臍帶血,、iPSCs和HSPCs的NK細胞在治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤方面具有安全性和有效性,。此外，NK細胞非常適合進行基因修飾,，并且已經(jīng)設計了許多臨床候選細胞,，以更精確地靶向腫瘤并增加持久性。此外,，持續(xù)努力加強腫瘤部位的運輸（通過趨化因子受體編輯）（圖5d）和屏蔽TME中的抑制因素（通過檢查點抑制,，代謝重編程（圖5a）和缺氧耐受性）可能會增加臨床益處。重要的是,，無論采用哪種方法,，NK細胞療法都一直顯示出良好的安全性，并且迄今為止,，沒有觀察到CRS或GvHD,。

盡管基于NK細胞的免疫療法作為一種安全的現(xiàn)成的抗腫瘤療法具有很好的前景,，但重要的問題仍然存在。首先,，闡明決定NK細胞效力和持久性的關鍵參數(shù)將非常重要,。其次，使用共刺激信號,，細胞因子或與其他治療方式組合,，將最大化延長過繼性NK細胞的壽命。最后,，開發(fā)和實施NK細胞擴增和冷凍保存的最佳方法，以維持產(chǎn)品的高質量,。從邏輯上講,，為了使新興的NK細胞治療計劃取得成功，必須建立由研究人員,，臨床醫(yī)生和監(jiān)管人員組成的多學科團隊,，共同搭建出臨床轉化的整體框架。