美國加利福尼亞大學(xué)Christine A. Olson等人在Cell Host & Microbe（IF 21.023）發(fā)表題為“Alterations in the gut microbiota contribute to cognitive impairment induced by the ketogenic diet and hypoxia”的文章,，該研究通過無菌小鼠,、糞菌移植（Fecal microbiota transplantation，F(xiàn)MT）等實(shí)驗(yàn)證明了腸道菌群介導(dǎo)了生酮飲食和間歇性缺氧協(xié)同誘導(dǎo)認(rèn)知障礙,。此外,，16s測序鑒定了沃氏嗜膽菌（Bilophila wadsworthia）會破壞海馬突觸可塑性、神經(jīng)發(fā)生和基因表達(dá),。該研究提示復(fù)雜的遺傳,、環(huán)境和社會心理因素共同導(dǎo)致認(rèn)知障礙的發(fā)生發(fā)展過程中需要考慮腸道菌群的參與，為后續(xù)預(yù)防和治療認(rèn)知障礙提供了重要理論基礎(chǔ),。

研究材料

無特定病原微生物的小鼠（SPF）,、無菌小鼠（GF）、Th1 細(xì)胞敲除小鼠（T-bet 敲除,，T-bet-/-）

 技術(shù)路線

步驟1：生酮飲食和間歇性缺氧協(xié)同損害小鼠的認(rèn)知行為,；

步驟2：16s測序發(fā)現(xiàn)Bilophila wadsworthia對海馬體功能造成損傷，影響認(rèn)知行為障礙,；

步驟3：Bilophila wadsworthia促進(jìn)IFNg的Th1細(xì)胞的擴(kuò)增引起認(rèn)知行為障礙,。

 研究結(jié)果

1. 生酮飲食加劇了間歇性缺氧引起的認(rèn)知行為障礙

作者首先用常規(guī)飲食（CD）喂養(yǎng)SPF小鼠，分別放在正常供氧（Mock）和間歇性缺氧（Hyp）的常壓環(huán)境中,，4天后用巴恩斯迷宮（Barnes maze）測試,，對小鼠的認(rèn)知行為障礙進(jìn)行評估，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Hyp能夠引起小鼠的認(rèn)知行為障礙,。

接下來,，作者又喂養(yǎng)了一批生酮飲食（KD）的SPF小鼠，同樣放在Mock和Hyp環(huán)境中進(jìn)行觀察,。結(jié)果發(fā)現(xiàn),，在Hyp條件下，和CD小鼠相比,，KD小鼠的認(rèn)知行為障礙明顯更加嚴(yán)重,，KD加劇了Hyp引起的認(rèn)知行為障礙。

圖1 生酮飲食會增強(qiáng)缺氧引起的認(rèn)知行為障礙

2. 腸道菌群的變化與KD-Hyp協(xié)同引起的小鼠認(rèn)知行為障礙有關(guān)

環(huán)境因素,，包括飲食和壓力,，在塑造腸道微生物群的組成和功能方面發(fā)揮著重要作用。為了深入了解腸道微生物群是否會影響 KD-Hyp 誘導(dǎo)的認(rèn)知行為障礙,，作者給SPF小鼠喂食了抗生素（Abx）,，耗盡腸道菌群，然后再用KD喂養(yǎng)這些小鼠,，放在Mock和Hyp環(huán)境中進(jìn)行觀察,。結(jié)果發(fā)現(xiàn),，腸道菌群的缺失緩解了由KD-Hyp協(xié)同引起的小鼠認(rèn)知行為障礙。

為了進(jìn)一步驗(yàn)證該結(jié)果,，作者把不同飲食下的小鼠腸道菌群定植于無菌小鼠（GF）,，并放在Mock和Hyp環(huán)境中觀察。結(jié)果顯示,，生酮飲食下腸道菌群定植的小鼠且放在了Hyp環(huán)境中,，它們的認(rèn)知行為障礙更加嚴(yán)重。

圖2 腸道菌群的改變導(dǎo)致KD-Hyp引起的認(rèn)知行為障礙

3. 生酮飲食和間歇性缺氧引起Bilophila wadsworthia的富集

為了確定可能導(dǎo)致 KD-Hyp 引起的認(rèn)知行為異常的潛在微生物群,，對喂食 KD 并暴露于 Hyp 或 Mock 的小鼠的糞便微生物進(jìn)行16s擴(kuò)增子測序,。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Hyp的小鼠糞便中,，Bilophila wadsworthia豐度更高,，耳蝸形梭菌豐度更低。糞菌移植結(jié)果顯示,，Bilophila wadsworthia的富集對于KD-Hyp引起認(rèn)知行為障礙的作用是至關(guān)重要的,。

圖3 KD-Hyp引起B(yǎng)ilophila wadsworthia的富集

4. Bilophila wadsworthia調(diào)節(jié)海馬體功能

海馬體是學(xué)習(xí)和記憶的關(guān)鍵部位，對飲食和缺氧壓力的改變很敏感,，因此,，作者研究了KD-Hyp協(xié)同條件下以及微生物群菌群對海馬體功能的影響。從KD-Mock SPF小鼠和KD-Hyp SPF小鼠,，以及Bilophila wadsworthia定植的 GF 小鼠的海馬體切片獲得場電位記錄,，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Bilophila wadsworthia參與了KD-Hyp對海馬體生理的不良影響。

圖4 Bilophila wadsworthia參與KD-Hyp誘導(dǎo)的海馬體功能損傷

5. Th1細(xì)胞的擴(kuò)增促進(jìn)Bilophila wadsworthia誘導(dǎo)的認(rèn)知行為障礙

前人的研究表明,，Bilophila wadsworthia定植將促進(jìn)產(chǎn)生 IFNg 的T輔助 I 型 (Th1) 細(xì)胞的擴(kuò)增,，并且 IFNg與體內(nèi)平衡和慢性應(yīng)激反應(yīng)期間認(rèn)知行為和海馬生理學(xué)的損傷有關(guān)。因此,，作者通過流式細(xì)胞分選技術(shù)檢測了樣本中Th1細(xì)胞的水平以及在沒有Th1細(xì)胞（T-bet 敲除,，T-bet-/-）情況下，Bilophila wadsworthia對認(rèn)知行為障礙的影響,。這些結(jié)果表明,，Bilophila wadsworthia是通過引起小鼠體內(nèi)表達(dá)IFNg的Th1細(xì)胞增多，從而對海馬體功能造成損傷的,，進(jìn)而對認(rèn)知行為產(chǎn)生不良影響,。

圖5 Th1 細(xì)胞擴(kuò)增導(dǎo)致Bilophila wadsworthia誘導(dǎo)的認(rèn)知行為障礙

 小編小結(jié)

文章發(fā)現(xiàn)生酮飲食會加劇間歇性缺氧引起的認(rèn)知行為障礙，并且該過程是由腸道菌群所介導(dǎo),。在生酮飲食和間歇性缺氧的雙重條件下,，Bilophila wadsworthia顯著富集，并引起表達(dá)IFNg的Th1細(xì)胞數(shù)量增加，造成海馬體功能損傷,，最終引起認(rèn)知行為障礙,。