第2節(jié) 微生物的培養(yǎng)技術及應用1.研究和應用微生物的前提（即發(fā)酵工程的重要基礎）：防止雜菌污染,，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物。（P9）(1)為微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件(培養(yǎng)基）,。(2)要確保其他微生物無法混入,，并將需要的微生物分離出來（無菌技術）,。（P9）1．培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。（P9）2.培養(yǎng)基作用：用以培養(yǎng),、分離,、鑒定、保存微生物或積累其代謝物,。（P9）3．培養(yǎng)基的分類（按照物理性質(zhì)分類）（P9）（1）液體培養(yǎng)基：不含凝固劑（如瓊脂）,，呈液體狀態(tài)。 用途：擴大培養(yǎng)獲得大量菌種,、常用于工業(yè)生產(chǎn),。（2）固體培養(yǎng)基：含凝固劑（如瓊脂），呈固體狀態(tài),。拓展了解：培養(yǎng)基的分類（按照化學成分分類）（1）天然培養(yǎng)基：含化學成分不明確的天然物質(zhì),。用途：工業(yè)生產(chǎn)。（2）合成培養(yǎng)基：培養(yǎng)基成分明確,。用途：分類,、鑒定。（1）選擇培養(yǎng)基：允許特定種類的微生物生長,，同時抑制或阻止其他種類微生物生長,。用途：培養(yǎng),、分離出特定微生物。（2）鑒別培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類的微生物,。用途：鑒別不同種類微生物,。4.怎樣將液體培養(yǎng)基制成固體培養(yǎng)基？加入適量瓊脂,。（P9）5.實驗室中最常用的培養(yǎng)基之一：瓊脂固體培養(yǎng)基,。（P9）6.微生物在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面或內(nèi)部生長，可以形成菌落,。（P9）7.培養(yǎng)基的基本成分：各種培養(yǎng)基一般都含有水,、碳源、氮源和無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì),，此外還需要滿足微生物生長對pH,、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。（P10）8.碳源:（1）概念：提供碳元素的物質(zhì),。（2）分類: 無機碳源,，如CO2、CO32-,、HCO3-等,。 添加無機碳源培養(yǎng)基用來培養(yǎng)自養(yǎng)微生物,； 添加有機碳源培養(yǎng)基用來培養(yǎng)異養(yǎng)微生物,。9.氮源:（1）概念：提供氮元素的物質(zhì)。（2）分類:無機氮源,，如N2,、NO3-、NH3,、NH4＋等,。 不添加氮源培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)固氮微生物,。 培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的,。11.含C,、H,、O、N的有機物可作為異養(yǎng)型微生物的碳源,、氮源,、能源。12.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基的主要差別在于碳源,。13.能否根據(jù)培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型,？ 可以，例如自養(yǎng)型微生物所需的碳源來自無機碳源,，異養(yǎng)型微生物所需的碳源來自有機碳源,。14.無機氮源能給自養(yǎng)型微生物提供能源嗎？ 可以,，例如NH3既作為硝化細菌的氮源,，也作為能源（NH3氧化釋放的化學能）。15.無機鹽除了可以調(diào)節(jié)酸堿平衡,、維持一定的滲透壓之外,，還能有什么功能？ 有些無機鹽離子可以作為化能合成菌的能源（如鐵細菌） 有些無機鹽離子可以激活某些酶（如Mg2+激活DNA聚合酶）16.在提供主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎上,，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH,、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。17.是否所有培養(yǎng)基中都必須添加碳源,、氮源,？ 不是，例如分離固氮菌不需要額外添加氮源,，其可以直接利用空氣中的氮氣。1．獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關鍵：防止雜菌污染,。（P10）2.無菌技術應圍繞如何避免雜菌的污染展開,。（P10）(1)對操作的空間,、操作者的衣著和手進行清潔和消毒,。(2)對用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌,。（P10）5.做好消毒滅菌工作后,，要注意：實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。（P10）6.為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,，應如何操作,？7.無菌技術除用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外,，還有什么作用,？無菌技術還能有效避免操作者被微生物感染,。8.消毒:(1)概念：是指使用較為溫和的物理、化學或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物,。（P10）(2)方法:a.日常生活中經(jīng)常用到煮沸消毒法,，操作方法：100 ℃煮沸5～6min；b.對于一些不耐高溫的液體如牛奶,，可使用巴氏消毒法,，操作方法：62～65℃消毒30min或80～90℃消毒30s-1min；c.生物活體,、水源等還可使用化學藥物進行消毒,，操作方法：用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等,；d.接種室,、接種箱或超凈工作臺在使用前，可以用紫外線照射,，操作方法：紫外線照射30min,。（P11）9.滅菌:（1）概念：是指使用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子,。（P10）（2）方法:a.培養(yǎng)基,、培養(yǎng)皿等一般用濕熱滅菌法，其中高壓蒸汽滅菌的效果最好,，操作方法：高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,，溫度121℃,15～30min。b.耐高溫的和需要保持干燥物品,，如玻璃器皿,、金屬用具等，可以用干熱滅菌法,，操作方法：物品放入干熱滅菌箱,160～170℃加熱2～3h,。c.接種過程中，微生物的接種工具,、試管口,、瓶口通過灼燒滅菌法來滅菌，操作方法：直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒,。（P11）10.使用高壓蒸汽滅菌鍋時,，能不能直接密封升溫,？ 不能,，一定要將鍋內(nèi)冷空氣徹底排出,，才能密封升溫，否則,，可能引起鍋內(nèi)壓力達到設定值而溫度不能達到要求,。11.高壓蒸汽滅菌鍋滅菌完畢后,，可以立刻放氣減壓嗎,？ 不能，若立即放氣減壓瓶內(nèi)液體會劇烈沸騰,，沖掉瓶塞而外溢,，甚至導致容器爆裂（須待滅菌鍋內(nèi)壓力降至與大氣壓相等后才可打開排氣閥開蓋）。12.酒精消毒的最適范圍是體積分數(shù)為70%-75%的酒精,。 原因：酒精濃度過高時,，菌體表面蛋白質(zhì)變性過快，從而凝固形成一層保護膜,，乙醇分子不能滲入其中,，酒精濃度過低時，殺菌能力減弱,。13.用紫外線進行消毒時,，可以怎么做來加強消毒效果？ 照射前,，適當噴灑酒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液,。14.高壓蒸汽滅菌使用的儀器為高壓蒸汽滅菌鍋，以水蒸氣為介質(zhì),，滅菌條件為壓力200kPa,、溫度121℃、時間15-30min,。15.干熱滅菌法使用的儀器為干熱滅菌箱,，以熱空氣為介質(zhì)，滅菌條件為溫度160-170℃,、時間2-3h,。16.灼燒滅菌是將需滅菌的用具直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，優(yōu)點是可以迅速徹底地滅菌,。1．純培養(yǎng)概念：在微生物學中,，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含特定種類微生物的群體稱為培養(yǎng)物,。（P11）2.純培養(yǎng)物概念：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體稱為純培養(yǎng)物，獲得純培養(yǎng)物的過程就是純培養(yǎng),。單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物,。（P11）3.純培養(yǎng)概念：獲得純培養(yǎng)物的過程。（P11）4.微生物純培養(yǎng)的步驟：微生物的純培養(yǎng)包括配制培養(yǎng)基,、滅菌,、接種、分離和培養(yǎng)等步驟。（P11）5.微生物純培養(yǎng)的原理：采用平板劃線法和稀釋涂布平板法將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上,，之后得到的單菌落一般是由單個微生物形成的純培養(yǎng)物,。（P12）6.菌落：分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構的子細胞群體,。（P12）8.菌落通常可以用來作為鑒定菌種的重要依據(jù),。9.獲得單菌落的方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法,。（P12）10.培養(yǎng)基的滅菌方法高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌法）； 培養(yǎng)皿的滅菌方法干熱滅菌（也可用濕熱滅菌法）,。11.倒平板時使培養(yǎng)基冷卻到50℃左右,，在酒精燈火焰附近倒平板。（P12）12.培養(yǎng)基滅菌后為什么要冷卻到50℃左右時開始倒平板,？ 瓊脂是一種多糖,，在44℃以下凝固，倒平板時,，若低于50℃不及時操作,，瓊脂會凝固。13.為什么倒平板和接種整個過程要在酒精燈火焰旁進行,？避免雜菌污染,。 通過灼燒滅菌,，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基,。15.在倒平板的過程中，若不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位,，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎,？不能。為什么,？因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,。16.倒平板時，能將培養(yǎng)皿的皿蓋拿下來放在一邊嗎,？不能,。 應如何做？用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,。17.剛倒完平板,，可以直接倒置嗎,？不能,，應等培養(yǎng)基冷卻凝固。 防止皿蓋上冷凝的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染（避免培養(yǎng)基水分過快蒸發(fā)）,。19.怎么確定所倒平板未被雜菌（主要是細菌）污染,？ 將未接種的空白培養(yǎng)基放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底(該操作也可確定培養(yǎng)基滅菌是否徹底）,。20.未接種的培養(yǎng)基直接培養(yǎng)起什么作用,？ 做空白對照，判斷培養(yǎng)基是否被污染,，判斷培養(yǎng)基滅菌是否徹底,；若培養(yǎng)后培養(yǎng)基表面無菌落，則說明培養(yǎng)基沒有污染,。21.若未接種的培養(yǎng)基表面出現(xiàn)菌落,，說明了什么？ 說明培養(yǎng)基被污染,，實驗組的菌落中可能存在雜菌,。23.連續(xù)劃線的目的：將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面,，經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)可以分離得到單菌落,。24.平板劃線法過程中，接種環(huán)蘸了1次菌液,； 若分五個區(qū)劃線,，則接種環(huán)共需灼燒6次；25.灼燒后的接種環(huán)可以直接劃線嗎,？不可以,。 應如何操作？待接種環(huán)冷卻后再劃線,。 為什么,？避免溫度過高殺死菌種。26.從第二次劃線開始,，都應從上一次劃線的末端開始往下一區(qū)域劃線,。（1）不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。（3）每次劃線前接種環(huán)進行灼燒滅菌,。（4）最后一次劃線結(jié)束也應該進行灼燒滅菌。28.整個操作中灼燒接種環(huán)的不同目的：取菌種前：殺死接種環(huán)上原有微生物,，避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染菌種,。每次劃線前：殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上一次劃線的末端,。接種結(jié)束后：及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種,，避免菌種污染環(huán)境和感染操作者。29.除第一次劃線外,，每次劃線都從上一次劃線的末端開始,，目的是什么？ 使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落（課本：將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面,，經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落）,。30.為什么劃線時要注意不能劃破培養(yǎng)基,？（1）一旦劃破，會造成劃線不均勻,，難以達到分離單菌落的目的,；（2）存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長,，會形成一個條狀的菌落,。31.培養(yǎng)酵母菌：完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收,，將接種后的平板（一般做三組,，目的：平行重復實驗）和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h,。（1）在實驗室中,，切不可飲食，離開實驗室時一定要洗手,，以防止被微生物感染,；（2）使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進行滅菌處理，以免污染環(huán)境,。二,、微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)根據(jù)微生物對生存環(huán)境的要求,，到相應的環(huán)境中去尋找,。2．水生棲熱菌的篩選：水生棲熱菌能在70～80 ℃的高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存,。（P16）3.從環(huán)境中獲得某種特定種類的微生物的原理：某些微生物適應某些特定的環(huán)境條件,，而絕大多數(shù)微生物在這種條件下不能生存，就可以從特定的環(huán)境中篩選得到特定種類的微生物,。（1）在被石油污染的土壤中可以篩選石油分解微生物,。（3）漆酶屬于木質(zhì)降解酶類，分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品是生活污水嗎,？不是,。4.實驗室篩選微生物原理：人為提供有利于目的菌生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度和pH等）,，同時抑制或阻止其他微生物的生長,。5．選擇培養(yǎng)基：在微生物學中，允許特定種類的微生物生長,，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基,。（P16）（1）利用營養(yǎng)缺陷進行選擇培養(yǎng)。（2）利用添加某種化學物質(zhì)進行選擇培養(yǎng),。 *添加殺傷性物質(zhì),，有抗性的可以生長，無抗性的死亡（3）利用改變培養(yǎng)條件進行選擇培養(yǎng),。 *調(diào)節(jié)溫度,、pH等生長條件，只有適應的可以生長（1）目的：分離酵母菌,、霉菌等真菌,，防止細菌生長。 配制：使用不加氮源（以N2為氮源）的培養(yǎng)基。 配制：使用不加有機碳源（以CO2為碳源）的培養(yǎng)基。 配制：使用將pH調(diào)至酸性的培養(yǎng)基。8.選擇培養(yǎng)基的制備原理：根據(jù)不同微生物的特殊營養(yǎng)要求或?qū)ζ淠骋换瘜W,、物理因素的抗性不同而制備選擇培養(yǎng)基,。9.如何設計培養(yǎng)基篩選分解尿素的細菌？ 以尿素作為唯一氮源設計選擇培養(yǎng)基,，只有能合成脲酶的細菌才能生長發(fā)育繁殖,。10.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點和不同點？ 除以尿素作為唯一氮源外,，該培養(yǎng)基的其他營養(yǎng)成分與普通培養(yǎng)基基本相同,。11.在選擇培養(yǎng)基上生長的一定是所選擇的目的菌嗎,？ 不一定，有些微生物可以利用目的菌的代謝產(chǎn)物來生長繁殖,，所以還需要進一步驗證,。12.怎么證明一個選擇培養(yǎng)基具有選擇性？ 應該設置基礎培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）或完全培養(yǎng)基作為對照,，若基礎培養(yǎng)基或完全培養(yǎng)基中生長的菌落數(shù)菌多于該選擇培養(yǎng)基，則該選擇培養(yǎng)基具有選擇性,。1.微生物的選擇培養(yǎng)方法：稀釋涂布平板法,。（P17）3.稀釋涂布平板法方法概述：由于土壤細菌的數(shù)量龐大,，要想得到特定微生物的純培養(yǎng)物,，必須要對土壤進行充分稀釋，然后再將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上,。（P17） 稀釋涂布平板法的作用：分離純化微生物、統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目,。 將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上,，經(jīng)培養(yǎng)得到單菌落（即純培養(yǎng)物）。（P18）7．分解尿素的細菌的分離：分解尿素的細菌能合成脲酶,，該酶能催化尿素分解產(chǎn)生NH3，以此作為細菌生長的氮源,。要將土壤稀釋液中能分解尿素的細菌分離出來,，培養(yǎng)基的配方設計思路是培養(yǎng)基中除含有細菌必需的碳源、水,、無機鹽外,，只含有尿素一種氮源。8．稀釋涂布平板法分離分解尿素的細菌操作過程如下：采集土樣→將10 g土樣加入盛有90 mL無菌水的錐形瓶中,，充分搖勻,。取1 mL上清液加入盛有9 mL無菌水的試管中，依次等比稀釋→取0.1 mL菌液,，滴加到培養(yǎng)基表面（多了不易被吸收）→將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中→將涂布器放在火焰上灼燒,，待酒精燃盡、涂布器冷卻后,，再進行涂布→用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面,。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻→涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后,，將平板倒置,，放入30～37 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)1～2 d,，在涂布有合適濃度菌液的平板上就可以觀察到分離的單菌落。（P17）1.微生物的數(shù)量測定方法：間接計數(shù)法——稀釋涂布平板法,、直接計數(shù)法——顯微鏡直接計數(shù)法,。（P18）2．稀釋涂布平板法原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落,，來源于樣品稀釋液中的一個活菌,。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌,。（P18）3.樣品的稀釋度將直接影響平板上的菌落數(shù)目,。（P18）（1）選擇菌落數(shù)為30-300的平板計數(shù)；（2）同一稀釋度下,，應至少對3個平板進行重復計數(shù),，然后求出平均值。（P18）（1）統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目少,；這是因為當兩個或多個細胞連在一起時,，平板上觀察到的只是一個菌落。（2）統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示,。（P18）6.C代表某一稀釋度下平板上生長菌落數(shù)的平均值,；V代表涂布平板時吸取的稀釋液體積數(shù)值(mL)；M代表稀釋倍數(shù),；則每g樣品中的細菌數(shù)=（C÷V）×M,。7.將1ml水樣稀釋100倍，在三個平板上用涂布法分別接入0.1ml稀釋液,；經(jīng)適當培養(yǎng)后,，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37,。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為(39+38+37)÷3÷0.1×100×1000,。8.恰當?shù)南♂尪取⑼坎际欠窬鶆蚴浅晒y(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵,。9．顯微鏡直接計數(shù)法原理：利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板在顯微鏡下觀察,、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量,。10.顯微直接計數(shù)法使用的計數(shù)工具： 血細胞計數(shù)板常用對相對較大的酵母菌細胞,、霉菌孢子等計數(shù)； 細菌計數(shù)板可對細菌等較小的細胞進行觀察和計數(shù),。11.顯微直接計數(shù)法優(yōu)點：快速直觀,。（1）統(tǒng)計結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。原因：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）個體小的細菌在顯微鏡下難以觀察,。（P18）1.實驗原理： 絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖,，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基,，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌,。（P18）土壤取樣→制備培養(yǎng)基→樣品的稀釋與涂布平板→微生物的培養(yǎng)與觀察。（P19）3.土壤取樣：（1）取樣地點要求：酸堿度接近中性的潮濕土壤,。 （P19） 原因：細菌適宜在該環(huán)境中生長,。 原因：細菌絕大部分分布在距地表3-8cm的土壤層,。（3）注意事項：取土樣時用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌,。4.制備培養(yǎng)基:（1）作對照：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。 （P19） 作用：作為對照組,，來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用。 KH2PO4和Na2HPO4的作用：提供無機鹽、調(diào)節(jié)pH,。（P19）  1.2.3平板是實驗組,，為選擇培養(yǎng)基，做3組的目的平行重復,。 不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。 目的：用來判斷培養(yǎng)基中是否含有雜菌（培養(yǎng)基滅菌是否合格）,。（3）為獲得菌落數(shù)在30-300之間適于計數(shù)的平板,，測細菌時，一般選用104,、105,、106倍稀釋的稀釋液進行平板培養(yǎng)。（4）在初次實驗中,，對于稀釋的范圍沒有把握,，怎樣才能保證能從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)？選用稀釋范圍更大的稀釋液進行平板培養(yǎng)（例如可以將1×103-1×107倍稀釋的稀釋液分別涂布平板上培養(yǎng)）。（5）本實驗使用的平板和試管較多,，為了避免混淆,，最好在使用前做好標記，例如,，在標記培養(yǎng)皿時應該注明組別,、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。（1）培養(yǎng)條件：細菌一般在30-37℃的溫度下培養(yǎng)1-2d。（2）觀察：每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目,，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果,。（3）為什么選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果？ 防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目,。（4）一般來說,，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征,，如形狀,、大小和顏色等。 3組接種的選擇培養(yǎng)基：對土壤中分解尿素的細菌分離和計,。 1組接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用,。 不接種的選擇培養(yǎng)基：驗證選擇培養(yǎng)基中是否含有雜菌。 不接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：驗證牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中是否含有雜菌,。（2）說出以下現(xiàn)象對應的結(jié)果分析： | | | | | | | 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目 | |
（3）樣品稀釋操作成功的標志是什么,？得到2個或2個以上菌落數(shù)在30-300的平板。（4）得到的菌落一定是分解尿素的細菌嗎,？不一定,，還需要進一步的鑒定。1.原理:細菌合成的脲酶將尿素分解為氨,，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強,，pH升高，因此可以通過檢測培養(yǎng)基pH的變化來判斷是否發(fā)生了該化學反應,，進而判斷該菌是否為尿素分解細菌,；2.方法: 在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細菌后,，如果pH升高,，指示劑將變紅。 *液體培養(yǎng)基可以直接看液體的變色情況,； *固體培養(yǎng)基上可以觀察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶,； *紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越強。
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