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最近碰到了很多老師想要做細(xì)胞的體外培養(yǎng),，她們無一不面對一個問題,，我需要的目的細(xì)胞應(yīng)該如何提取出來呢？ 對某類特定細(xì)胞的提純提取,，我們常用的方法有兩大類： 1. 利用細(xì)胞的一些物理/生理特性進(jìn)行提純,； 2. 利用細(xì)胞的一些特定biomarker進(jìn)行抗原/抗體結(jié)合的提純,。 前者主要是進(jìn)行一些“粗提” 例如利用細(xì)胞密度不一致的原理，從外周血中提取淋巴+單核的混合細(xì)胞PBMC,，或者是直接提取粒細(xì)胞,；以及我們可以利用單核細(xì)胞的貼壁特性，從小鼠骨髓中提取pbmc,，然后保留培養(yǎng)后貼壁的細(xì)胞即為單核細(xì)胞,。 后者則是更加精確的提取，例如我們要分選小鼠的Th細(xì)胞,，可以用CD4標(biāo)記小鼠的細(xì)胞,，然后通過流式分選或者磁珠分選把CD4+的細(xì)胞拉下來，這樣就能得到更加純度高的Th細(xì)胞了,。 而在利用細(xì)胞特異性marker進(jìn)行細(xì)胞分離的方法上,，目前有2個大分支，分別就是上述提到的磁珠分選和流式分選,。 磁珠分選是基于抗體對抗原的特異性識別，使用磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上,，從而與細(xì)胞相連,，在高強(qiáng)度、梯度磁場中達(dá)到細(xì)胞磁性分離的一種實驗方法： 很多老師都會存在一個疑問,，到底是選用磁珠分選,，還是流式分選完成自己的細(xì)胞分選實驗?zāi)兀拷裉熘饕鶕?jù)這個給大家進(jìn)行解答,。 首先,，我們從實驗?zāi)康暮蛯嶒炐枨蟪霭l(fā)，如果我們分選下來的細(xì)胞后續(xù)需要進(jìn)行培養(yǎng)實驗,，也就是要求有一定的細(xì)胞活性和增殖力,，此時肯定是磁珠分選優(yōu)于流式分選的。 磁珠分選的細(xì)胞活力會更好,，并且因為磁珠分選的工具可以很好的放進(jìn)無菌臺中,，所以也不用太擔(dān)心細(xì)胞分選后的染菌問題。 而流式分選因為儀器環(huán)境的問題導(dǎo)致分選后很容易污染,，且細(xì)胞的狀態(tài)和活性都會很差（流式分選的原理是細(xì)胞過電）,，后續(xù)在培養(yǎng)就很難養(yǎng)好了，即便養(yǎng)起來對實驗結(jié)果的干擾也是不可預(yù)估的,。 那么 流式分選是不是就一無是處呢,？ 并不是,，我們從待分離細(xì)胞本身出發(fā)，舉例來說,，之前有老師要分選造血干,，lin(8-10個抗體) c-kit, sca-1 CD150 CD48CD135需要10－14個抗體同時染色，如果此時使用磁珠,，恐怕是相當(dāng)不靠譜的選擇,。 而選擇流式分選，就能更加精準(zhǔn)的得到目的細(xì)胞了,。 另外針對一些及其微量的細(xì)胞,，直接用磁珠分選出來的純度其實是打折扣的，我曾經(jīng)就碰到一例老師從充滿粒細(xì)胞的腹水樣本中分離CD4,，結(jié)果不論怎么分得到的CD4純度都達(dá)不到90%,，這是因為初始的CD4被大量其他雜細(xì)胞干擾，從而降低了磁珠分選的純度,。 而此時如果使用流式分選,，則就不會有這種困擾了。 所以究竟是選擇磁珠分選還是流式分選得到您的目的細(xì)胞,，還是要綜合細(xì)胞的marker是否足夠磁珠分選,，細(xì)胞在原始細(xì)胞群中的含量，細(xì)胞分離后的實驗?zāi)康牡榷鄠€方面進(jìn)行判斷,，從而選擇合適的方法進(jìn)行最終的實驗,。 |
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