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引言  Signatera MRD檢測(cè)（華大基因獨(dú)家引進(jìn),，中文名：華見(jiàn)微?）以其高靈敏度和高特異性受到業(yè)內(nèi)廣泛認(rèn)可,。用該方法判斷術(shù)后ctDNA（即MRD）的陰陽(yáng)性狀態(tài)，是判斷I-III期結(jié)直腸癌預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素1,，并被美國(guó)國(guó)家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）結(jié)腸癌指南所引用,。一項(xiàng)前瞻性的研究中提到過(guò)該技術(shù)在ctDNA連續(xù)監(jiān)測(cè)的靈敏度達(dá)91.4%，特異性達(dá)93.3%,，陽(yáng)性預(yù)測(cè)試（PPV）達(dá)97%,，全面碾壓傳統(tǒng)的腫標(biāo)癌胚抗原（CEA）和ddPCR等監(jiān)測(cè)方法,，為腫瘤MRD檢測(cè)的性能評(píng)估和證據(jù)質(zhì)量設(shè)定了新標(biāo)準(zhǔn)，也為腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)和療效檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)2,。  2021年10月8日發(fā)表于Clinical Cancer Research雜志上的一項(xiàng)前瞻性,、國(guó)際多中心的臨床研究表明：通過(guò)對(duì)160名III期結(jié)直腸癌（CRC）患者中的ctDNA進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測(cè)（隨訪期3年），驗(yàn)證了術(shù)后（2-4周）ctDNA陽(yáng)性和輔助治療（ACT）后ctDNA陽(yáng)性與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的高度關(guān)聯(lián)（復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較ctDNA陰性患者分別7倍和50.76倍）,。此外,，更重要的是，該研究團(tuán)隊(duì)指出連續(xù)ctDNA監(jiān)測(cè)對(duì)于臨床預(yù)后有更多獲益,，超越MRD的檢測(cè),，其中包括來(lái)評(píng)估輔助化療的療效、早期復(fù)發(fā)檢測(cè),、ctDNA增長(zhǎng)率以及其與復(fù)發(fā)性疾病臨床行為的相關(guān)性3。  該文章第一作者,，丹麥奧胡斯大學(xué)醫(yī)院分子醫(yī)學(xué)系的Tenna Vesterman Henriksen博士指出：“該項(xiàng)研究是關(guān)于III期結(jié)直腸癌ctDNA檢測(cè)的最全面的研究之一,，并擴(kuò)展了之前在較小隊(duì)列中進(jìn)行的研究。該文重點(diǎn)介紹了幾種ctDNA的臨床應(yīng)用,，其中一些應(yīng)用目前正在IMPROVE-IT,， DYNAMIC-III，VEGA,，TRACC,，和 IMPROVE-IT2等隨機(jī)試驗(yàn)中進(jìn)行研究3?！?/span> 研究背景 III期CRC患者有很高的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn),，歐洲臨床腫瘤學(xué)會(huì)（ESMO）于2020頒布的臨床診療指南中推薦III期CRC患者使用手術(shù) 術(shù)后輔助化療（ACT）策略4。目前臨床上缺少準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)患者對(duì)輔助化療療效及耐受的生物標(biāo)志物,。多項(xiàng)研究指出,，術(shù)后MRD的狀態(tài)可以用于判斷預(yù)后和療效評(píng)估5。本研究主要臨床終點(diǎn)為無(wú)復(fù)發(fā)生存期（RFS）,，次要終點(diǎn)為復(fù)發(fā)率及總體生存期（OS）等指標(biāo)3,。 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法 -該項(xiàng)前瞻性、國(guó)際多中心研究在丹麥和西班牙共招募III期CRC患者168例,，最終入組患者160名（共166份腫瘤組織樣本及1,204份血液標(biāo)本）,。其中納入患者均符合治療計(jì)劃，且術(shù)前胸腔,、腹腔和骨腔CT結(jié)果均無(wú)轉(zhuǎn)移,。該研究采用標(biāo)準(zhǔn)的ACT治療策略（氟嘧啶 /-奧沙利鉑治療6個(gè)月），并進(jìn)行了長(zhǎng)達(dá)3年的臨床隨訪期監(jiān)測(cè)（圖1）,。 -技術(shù)方法：該研究采用Signatera MRD檢測(cè)技術(shù),，先對(duì)腫瘤組織進(jìn)行全外顯子組測(cè)序（WES）,，從中挑選16個(gè)主克隆突變（truncal SNVs）進(jìn)行個(gè)性化panel定制。在監(jiān)測(cè)節(jié)點(diǎn)時(shí),，對(duì)患者的個(gè)性化位點(diǎn)進(jìn)行超高深度ctDNA測(cè)序,。其中本文ctDNA的增長(zhǎng)率計(jì)算，是根據(jù)ctDNA水平對(duì)每位患者進(jìn)行l(wèi)og-linear對(duì)數(shù)線性回歸分析,，采用回歸線斜率計(jì)算得出,。  圖1.試驗(yàn)設(shè)計(jì) 關(guān)鍵結(jié)果 1 ● 術(shù)后ctDNA陽(yáng)性患者的復(fù)發(fā)率遠(yuǎn)高于陰性患者 在平均3年的隨訪中，160例患者中總體復(fù)發(fā)率為25%（40/160）,。共有140例患者被納入生存分析,，其中14%（20/140）的患者術(shù)后ctDNA呈陽(yáng)性。這些患者的復(fù)發(fā)率為80%（14/20）,，而ctDNA-MRD陰性患者復(fù)發(fā)率僅為18%（22/120）（圖2）,。陽(yáng)性患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是陰性患者的7倍。ctDNA在剔除其他高危因素后（年齡≥70歲,、四期,、腫瘤分化、CEA）,，依然是很強(qiáng)的預(yù)后預(yù)測(cè)標(biāo)志物（HR=30.97）,。  圖2.術(shù)后ctDNA監(jiān)測(cè)與RFS及復(fù)發(fā)率的關(guān)系 2 ● 經(jīng)輔助化療后依然保持ctDNA陽(yáng)性的患者，其復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)是陰性患者的50.76倍 在20位術(shù)后陽(yáng)性的患者中,，90%（n=18）的患者接受術(shù)后輔助化療,。多因分析中，傳統(tǒng)的年齡≥70歲及ACT治療后ctDNA的狀態(tài)依然可以作為無(wú)復(fù)發(fā)生存期（RFS）的預(yù)測(cè)指標(biāo),，但ctDNA的狀態(tài)（陰陽(yáng)性）是最重要的影響因素（HR= 94.25）,。 3 ● ctDNA監(jiān)測(cè)比傳統(tǒng)的影像學(xué)平均提前10個(gè)月發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)。（圖3）  圖3.ctDNA-MRD陽(yáng)性患者中,，ctDNA相較CT影像學(xué)平均提前發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)的時(shí)間,。 4 ● ctDNA的變化速率能夠?yàn)閏tDNA-MRD陽(yáng)性患者進(jìn)行預(yù)后分層（圖4） 可將患者分為快速增長(zhǎng)型（fast，47%,，8/17,，平均斜率±標(biāo)準(zhǔn)方差[SD]為2.37±0.5，每月增長(zhǎng)137%）和慢速增長(zhǎng)型（slow,，53%,，9/17，平均斜率±SD為1.27±0.13,，每月增長(zhǎng)27%）,。臨床復(fù)發(fā)及預(yù)后。其中連續(xù)檢測(cè)ctDNA增長(zhǎng)速度與較差的總生存期（OS）相關(guān)聯(lián)（HR=3, 95% CI 1.1-7, p=0.039）,?？焖僭鲩L(zhǎng)型患者的總生存期（OS）會(huì)顯著短于慢速增長(zhǎng)型患者（3年OS為37.5% vs. 100%）,；而慢速增長(zhǎng)型患者和無(wú)復(fù)發(fā)患者的預(yù)后基本無(wú)差別（p=0.18）。  圖4.復(fù)發(fā)患者的ctDNA水平變化,。每個(gè)患者的原始ctDNA測(cè)量值以單獨(dú)的顏色顯示（左）,。將這些患者歸為快速增長(zhǎng)型和慢速增長(zhǎng)型后的ctDNA水平變化趨勢(shì)（右） 5 ● 持續(xù)監(jiān)測(cè)ctDNA清除狀態(tài)用于判斷預(yù)后 ctDNA-MRD陽(yáng)性患者在ACT治療期間和之后的持續(xù)ctDNA清除后預(yù)后良好（n=3，3年RFS為100%）,，而ACT治療期間短暫ctDNA清除的預(yù)后較差（n=10,，3年RFS為0%）（圖5）。  圖5.術(shù)后輔助化療ACT前,、期間,、治療后及復(fù)發(fā)時(shí)或3年隨訪結(jié)束時(shí)的ctDNA水平 總結(jié) 該研究再次證明在III期結(jié)直腸癌患者術(shù)后采用Signatera (華見(jiàn)微?) 技術(shù)連續(xù)監(jiān)測(cè)ctDNA的水平可作為強(qiáng)有力的預(yù)后預(yù)測(cè)和輔助化療療效評(píng)估的工具，ctDNA水平的變化速率可以作為區(qū)分MRD陽(yáng)性患者預(yù)后有效指標(biāo),。 華見(jiàn)微? 腫瘤MRD定制化檢測(cè)產(chǎn)品 華大基因一直致力于推動(dòng)液體活檢和腫瘤基因檢測(cè)技術(shù)在臨床的應(yīng)用,，造福中國(guó)患者。2019年,，華大基因與美國(guó)著名的液體活檢公司-Natera公司簽訂了獨(dú)家技術(shù)引進(jìn)協(xié)議,，成為中國(guó)唯一提供Signatera? MRD檢測(cè)的機(jī)構(gòu)。結(jié)合華大基因的國(guó)產(chǎn)自主測(cè)序平臺(tái),，華大基因于2020年推出了華見(jiàn)微?-腫瘤MRD定制化檢測(cè)產(chǎn)品。  參考文獻(xiàn)： 1. Reinert T, Henriksen T V, Christensen E, et al. Analysis of plasma cell-free DNA by ultradeep sequencing in patients with stages I to III colorectal cancer[J]. JAMA oncology, 2019, 5(8): 1124-1131. 2. Loupakis F, Sharma S, Derouazi M, et al. Detection of molecular residual disease using personalized circulating tumor DNA assay in patients with colorectal cancer undergoing resection of metastases[J]. JCO Precision Oncology, 2021, 5: 1166-1177. 3. Henriksen TV, Tarazona N, Frydendahl A, et al. Circulating tumor DNA in stage III colorectal cancer, beyond minimal residual disease detection, towards assessment of adjuvant therapy efficacy and clinical behavior of recurrences[J]. Clin Cancer Res. 2021, clincanres.2404.2021. 4. Argilés G, Tabernero J, Labianca R, et al. 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