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色譜填料的基礎知識

 青島邦凱 2021-07-14

一. 色譜填料的基本特點:

1.五大類層析技術

①.凝膠過濾(GF)

②.離子交換(IEX)

③.親和層析(AC)

④.疏水層析(HIC)

⑤.反相層析(RPC)

2. 基架:顆粒越細,、大小越均勻,,分辨率越高,但反壓亦較高(SOURCE基架例外)

3. 物理穩(wěn)定性:新一代介質較堅固,,能承受高流速,,但反壓亦較高(SOURCE基架例外)

4. 化學穩(wěn)定性:新一代介質能承受極端PH,高鹽度,,促溶劑和有機溶劑,,利于開發(fā)分離條件和在位清洗(CIP),大大延長介質壽命并提高重復性,。

二. 如何選擇層析填料:

1. 按照層析技術原理分類選擇填料

2. 層析工藝不同階段選擇填料的一般規(guī)律

3. 根據(jù)目的物的性質選擇填料

4. 根據(jù)規(guī)模選擇合適的層析預裝柱

5. 層析空柱選擇

三. 按照層析技術原理分類選擇填料

1. 凝膠過濾填料選擇:

①. 原理:是根據(jù)分子量大小分離物質的一種層析方法

②. 精度:分子量差別一倍以上

③. 重點:選擇分離范圍

④. 類型:Sephadex,、Superdex、Sephacryl,、Sepharose,、Superose

2. 離子交換填料選擇:

①. 原理:根據(jù)生物分子的表面電荷性質進行分離純化,可以應用在層析的各個階段

②. 重點:在于選擇合適的分辨率

③. 基架類型:Sepharose,、Source,、Capto、Sephadex,、纖維素

3. 親和填料選擇

①. 原理:根據(jù)生物分子之間的特異相互作用分離純化蛋白質,,只要有合適的配基,即可采用親和層析

②. 重點:選擇合適的配基

③. 選擇:抗體以及Fc融合蛋白,、重組的標簽蛋白,、族特異性生物分子、預活化的親和填料

4. 疏水填料選擇

①. 原理:根據(jù)蛋白質上的疏水性質分離

②. 重點:選擇填料的疏水性強弱

③. 選擇:苯基高取代>苯基低取代>辛基>丁基>異丙基>醚基

5. 反相填料選擇(根據(jù)分辨率的高低依次為):

①. uRPC C2/C18:只有預裝柱形式,,HPLC分析柱

②. SOURCE 5RPC:只有預裝柱形式,,用于分析

③. SOURCE 15RPC:用于精細純化

④. SOURCE 30RPC:良好的可防性

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