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編譯：微科盟達(dá)達(dá)兔，編輯：微科盟木木夕,、江舜堯,。 微科盟原創(chuàng)微文，歡迎轉(zhuǎn)發(fā)轉(zhuǎn)載,。 導(dǎo)讀重復(fù)接種是微生物接種在植物和土壤中持續(xù)發(fā)揮作用的有效方法,。到目前為止，單次接種對(duì)土壤中土著微生物群落的影響已有研究,，但是周期性接種對(duì)土著微生物的演替影響尚不清楚,，會(huì)影響多長(zhǎng)時(shí)間以及影響的程度尚不明確。本研究研究了植物生長(zhǎng),、土壤功能和土壤中土著細(xì)菌群落對(duì)單一或混合接種時(shí)磷酸鹽和固氮細(xì)菌的動(dòng)態(tài)響應(yīng),。與單一菌劑接種相比，混合菌劑接種對(duì)植物生長(zhǎng)和土壤養(yǎng)分有更好的促進(jìn)作用,。但是,，接種菌劑的有效性沒(méi)有隨接種次數(shù)的增加而增加，移栽到不同地點(diǎn)后有效性沒(méi)有得到維持。研究人員發(fā)現(xiàn)細(xì)菌群落組成對(duì)微生物接種劑反應(yīng)的三種變化模式（成倍增加,，成倍減少,，和恢復(fù)）。周期性接種影響了土壤微生物群落的演替,，主要受土壤pH和硝酸鹽的變化驅(qū)動(dòng),，在整個(gè)研究過(guò)程中形成了三種主要的聚類(lèi)類(lèi)型。單一菌劑和混合菌劑對(duì)土壤pH和C/N的變化有短暫的調(diào)節(jié)作用,，最終微生物群落對(duì)后續(xù)接種表現(xiàn)出恢復(fù)的作用,。所以，重復(fù)接種的必要性應(yīng)重新考慮,，不同的微生物接種劑對(duì)土著微生物群落演替有不同的影響,。原名：Succession of the Resident Soil Microbial Community in Response to Periodic Inoculations 譯名：土壤微生物群落對(duì)周期性接種反應(yīng)的演替 期刊：Applied and Environmental Microbiology IF：4.016發(fā)表時(shí)間：2021.2
通訊作者：洑香香 通訊作者單位：南京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院 苗圃地點(diǎn)是在中國(guó)南京白馬（31°35'N, 119°E）的一個(gè)半自動(dòng)植物生長(zhǎng)裝置中,，生長(zhǎng)地點(diǎn)位于中國(guó)臺(tái)州（32°37的N, 119°98 E）江蘇中醫(yī)藥科技園區(qū),。這些地點(diǎn)年降雨量1037 mm，日照2146小時(shí),，年平均氣溫15.4℃左右,。白馬的土壤特性是pH 5.98，總碳18.9 g/kg,，總氮1.61 g/kg,，總磷是0.42 g/kg，速效氮是12.68 mg/kg,。臺(tái)州土壤性質(zhì)是土壤pH值7.31,，總碳12.72g/kg，總氮0.88g/kg,，總磷是0.45 g/kg,，速效氮是88.35 mg/kg。實(shí)驗(yàn)處理為M：用芽孢桿菌（B. megaterium）接種,；C：用褐球固氮菌（A. chroococcum）接種,；MF：用芽孢桿菌（B. megaterium）和熒光假單孢菌（P. fluorescens）混合接種；CB：用褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種,；MFCB：用芽孢桿菌（B. megaterium）,、熒光假單孢菌（P. fluorescens）、褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種,。 2,、試驗(yàn)設(shè)計(jì)和樣品采集采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，分為5接種類(lèi)型（M,、MF,、C,、CB、MFCB）,， 3個(gè)區(qū)組,。本研究將未接種樣品作為對(duì)照。每個(gè)處理有60個(gè)青錢(qián)柳幼苗,。 在每個(gè)區(qū)塊處理中,，隨機(jī)采集5個(gè)0-10 cm的土壤樣品,，均勻混合到一個(gè)樣品中,，得到三個(gè)區(qū)塊的3個(gè)樣品。采樣時(shí)間是第一次接種的前一天（0天）,，第一次接種后10天（I-10）,，第一次接種后30天（I-30），第一次接種后45天（I-45）,，第二次接種后45天（II-45）,，第三次接種后45天（III-45），和第四接種后45天（IV-45）（圖6）,。
圖6 微生物接種,、土壤取樣和植物生長(zhǎng)測(cè)量的時(shí)間表。試驗(yàn)主要于2018年（接種期）在南京進(jìn)行,。2019年（移栽期）移栽臺(tái)州,。
分別在第一次接種前和接種后45,、90,、135、180,、360和540天測(cè)定健康苗的苗高和地徑（圖6）,。用pH電極測(cè)定土壤pH值,，用元素分析儀測(cè)定總碳和總氮含量,。采用Tabatabai和Bremner方法測(cè)定酸性磷酸酶活性。采用乙炔還原法測(cè)定土壤固氮酶活性,。5,、DNA提取和Illumina MiSeq測(cè)序根據(jù)制造商的規(guī)程，使用NucleoSpin?Soil DNA試劑盒提取土壤總DNA（0.5 g土壤）,。采用NanoDrop 2000紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定最終DNA濃度和純度,。利用PCR擴(kuò)增引物515F（5'-GTGCCAGCMGCCGCGG-3'）和907R（5'-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3'）擴(kuò)增16S rRNA基因的V4高變區(qū)。利用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,，包括植物生長(zhǎng)和土壤養(yǎng)分變量的多重比較,。采用雙因素方差分析（ANOVA）方法分析了不同接種劑和不同采樣時(shí)間對(duì)白馬地區(qū)株高和地徑的影響。采用單因素方差分析評(píng)價(jià)不同處理對(duì)臺(tái)州市株高和地徑的影響,?；贐ray-Curtis進(jìn)行主成分分析（PCoA）。采用線性判別分析（LDA）估計(jì)各指標(biāo)的效果評(píng)分,。1,、微生物接種劑對(duì)青錢(qián)柳（Cyclocaryapaliurus）生長(zhǎng)的影響在接種期（白馬苗圃）和移植期（臺(tái)州苗圃）對(duì)青錢(qián)柳的生長(zhǎng)指標(biāo)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。在白馬苗圃,，只有MFCB處理在第一次接種45天后顯著提高了幼苗高度,，在此期間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)地面直徑有顯著提高。第二次接種后,，結(jié)果表明,，添加芽孢桿菌和熒光假單胞菌的處理即MF和MFCB處理，株高生長(zhǎng)得到改善（圖1a,，d）,，但在其它處理中未發(fā)現(xiàn)明顯的影響。在臺(tái)州苗圃,，MF和MFCB處理顯著提高了株高,，但是接種苗與未接種苗的地徑差異不顯著。從高度相對(duì)生長(zhǎng)率（RGRh）和地徑相對(duì)增長(zhǎng)率（RGRd）來(lái)看,，在接種期間特別是MF,，CB和MFCB處理增加了白馬苗圃的青錢(qián)柳的高度相對(duì)生長(zhǎng)率和地徑相對(duì)增長(zhǎng)率，而在移植期間,，微生物接種的影響非常有限（圖1c,，f）。
圖1 白馬地點(diǎn)青錢(qián)柳苗高,、地徑動(dòng)態(tài)（接種期）（a,、d）。臺(tái)州（移植時(shí)期）青錢(qián)柳最終高度（b）和地徑（e）,。白馬和臺(tái)州的高度相對(duì)增長(zhǎng)率（c）和地徑（f）,。采樣天數(shù)分別為第1、2,、3,、4次接種后45天。M：用芽孢桿菌（B. megaterium）接種,；C：用褐球固氮菌（A. chroococcum）接種,；MF：用芽孢桿菌（B. megaterium）和熒光假單孢菌（P. fluorescens）混合接種；CB：用褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種,；MFCB：用芽孢桿菌（B. megaterium）,、熒光假單孢菌（P. fluorescens）,、褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種。CK：不接種,。
在接種期，分別在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)（I-10,、I-30,、I-45、II-45,、III-45和IV-45）采集土壤,，測(cè)定土壤的生化性質(zhì)。第一次接種后,，在10-90天內(nèi),，接種土壤的速效養(yǎng)分與對(duì)照顯著不同。土壤pH值在前10天和后90天均低于對(duì)照處理,。接種時(shí)間對(duì)土壤固氮酶和酸性磷酸酶活性有顯著影響。3,、基于16S rRNA基因測(cè)序的細(xì)菌多樣性研究在對(duì)115個(gè)樣本進(jìn)行等量的二次采樣后,，共獲得10978個(gè)OTUs，識(shí)別率為97%,，每個(gè)樣本的范圍為1952到2932個(gè)OTUs,。所有處理均獲得了近乎完整的細(xì)菌群落多樣性采樣。接種對(duì)I-45后的Shannon和Simpson指數(shù)無(wú)顯著影響,，但是在最初的45天,，對(duì)Ace和Chao1指數(shù)有顯著影響。在初始階段,，不同微生物類(lèi)群的影響各不相同,。與CK處理相比，接種四種菌株（MFCB）處理和兩種NFB（CB）處理使I-10的Simpson值增加,，而PSB處理（M和MF）的Ace指數(shù)較低（P<0.05）,。 4、微生物反復(fù)接種下土著細(xì)菌群落組成的變化前11個(gè)門(mén)的相對(duì)豐度約占總?cè)郝涞?6％,。實(shí)驗(yàn)土壤中的細(xì)菌序列大部分屬于變形菌（Proteobacteria）（42-54%）,、擬桿菌（Bacteroidetes）（5-10%）、放線菌（Actinobacteria）（5%）和酸桿菌（Acidobacteria）（5-21%）,；其余的（16-20%）屬于厚壁菌（Firmicutes）,、綠彎菌（Chloroflexi）、芽單胞菌（Gemmatimonadetes）,、疣微菌（Verrucomicrobia）,、浮霉菌（Planctomycetes）和環(huán)單胞菌（Armatimonadetes）,。前50個(gè)科在時(shí)間變異上對(duì)周期性接種的反應(yīng)表現(xiàn)出3種不同的變化模式：恢復(fù)性（a和c）、拮抗性（b）和協(xié)同性（d）（圖2）,。應(yīng)該注意的是,，在第一次接種后（I-10、I-30和I-45）的前45天,，處理間的差異顯著,。
圖2 周期接種，細(xì)菌群落在科水平（前50名）的熱圖,。黑方框表示各時(shí)間點(diǎn)處理間差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,。a、b和c顯示了不同采樣時(shí)間點(diǎn)細(xì)菌類(lèi)群的不同變化模式,。采樣天數(shù)為0d：微生物接種前一天,；I-10、I-30,、I-45分別為首次接種后10天,、30天、45天;II-45,、III-45和IV-45：分別在第二次,、第三次和第四次接種后45天。M：用芽孢桿菌（B. megaterium）接種,；C：用褐球固氮菌（A. chroococcum）接種,；MF：用芽孢桿菌（B. megaterium）和熒光假單孢菌（P. fluorescens）混合接種；CB：用褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種,；MFCB：用芽孢桿菌（B. megaterium）,、熒光假單孢菌（P. fluorescens）、褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種,。CK：不接種,。
5、微生物重復(fù)接種對(duì)細(xì)菌整體群落結(jié)構(gòu)的影響在OTU水平上基于Bray-Curtis差異進(jìn)行的PCoA排序表明了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中土壤細(xì)菌群落的演替情況（圖3a）,。為進(jìn)一步研究接種土壤與未接種土壤隨時(shí)間的變化,，利用PCoA中的Bray-Curtis差異進(jìn)行分型分析（圖3b和c）。圖3b和圖3c描述在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上簇類(lèi)型的組成,，表明與不接種處理相比,，重復(fù)接種改變了群落的演替。線性判別分析（LDA）揭示了接種土壤中3種聚類(lèi)類(lèi)型（接種0-10天,、接種30-45天,、接種90-180天）門(mén)豐度的差異（圖3d）。研究人員還測(cè)定了土壤性質(zhì)（碳,，氮,，硫,，碳/氮，硝酸鹽,，pH和酶活性）來(lái)解釋接種土壤中細(xì)菌群落的變化（圖4）,。
圖3 不同土壤管理方式下細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)隨時(shí)間的變化。（a）土壤中土著細(xì)菌群落的演替,。（b）未接種土壤在所有時(shí)間點(diǎn)上的細(xì)菌群落群集（PCoA圖）及其支配性（bar圖）,。不接種0-10天和不接種30-180天表明，從類(lèi)型分析中得出的兩種主要的未接種樣品集,。（c）所有時(shí)間點(diǎn)接種土壤演替中的細(xì)菌群落聚集及其優(yōu)勢(shì),。根據(jù)類(lèi)型分析，接種0-10天,、接種30-45天和接種90-180天表示接種樣品的三個(gè)主要聚集,。（d）通過(guò)線性判別分析（LDA）發(fā)現(xiàn)接種土壤中3個(gè)類(lèi)群的門(mén)豐度存在差異。采樣天數(shù)為0d：微生物接種前一天,；I-10,、I-30、I-45分別為首次接種后10天,、30天,、45天;II-45、III-45和IV-45：分別在第二次,、第三次和第四次接種后45天。M：用芽孢桿菌（B. megaterium）接種,；C：用褐球固氮菌（A. chroococcum）接種,；MF：用芽孢桿菌（B. megaterium）和熒光假單孢菌（P. fluorescens）混合接種；CB：用褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種,；MFCB：用芽孢桿菌（B. megaterium）,、熒光假單孢菌（P. fluorescens）、褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種,。CK：不接種,。
圖4 冗余分析說(shuō)明了環(huán)境因素對(duì)所有處理下細(xì)菌群落和前10個(gè)科演替的影響。采樣天數(shù)為0d：微生物接種前一天,；I-10,、I-30、I-45分別為首次接種后10天,、30天,、45天;II-45、III-45和IV-45：分別在第二次,、第三次和第四次接種后45天,。6,、群落變化的途徑由單一或混合微生物接種劑瞬間調(diào)節(jié)由于II-45、III-45和IV-45的細(xì)菌群落差異小于最初的45天,，所以我們選擇了最初45天和最后45天的5個(gè)時(shí)間點(diǎn)（圖5）來(lái)評(píng)估不同接種類(lèi)型對(duì)土壤中土著細(xì)菌群落的影響,。在5個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，群落類(lèi)型分為4類(lèi)（1,、2,、3和4型），群落由1型向4型的變化路徑因處理的不同而不同,?；旌暇辏∕F，CB,，MFCB）處理的接種途徑為1-2-4型,，單一菌株處理（M，C）是1-3-4型（圖5）,。對(duì)土壤因子進(jìn)行分析,，來(lái)確定潛在的非生物參數(shù)對(duì)微生物群落隨時(shí)間演替影響（圖5）。無(wú)機(jī)氮（硝態(tài)氮和銨態(tài)氮）,、固氮酶活性和酸性磷酸酶活性是影響微生物群落結(jié)構(gòu)變化的主要因素,，而土壤pH、C/N比和硝酸鹽含量是在I-30單一菌劑接種和混合菌劑接種處理之間差異的主要因素,。
圖5 I-10,、I-30、I-45和IV-45不同接種條件下細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的時(shí)間變化分型分析,。從類(lèi)型1到類(lèi)型4的不同路徑識(shí)別：類(lèi)型1-2-4（處理MF,、CB和MFCB）或類(lèi)型1-3-4（處理M和C）。柱狀圖顯示了單一,、復(fù)雜,、單一的變化模式，即在五個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn)存在四種聚類(lèi),。采樣天數(shù)為0d：微生物接種前一天,；I-10、I-30,、I-45分別為首次接種后10天,、30天、45天;II-45,、III-45和IV-45：分別在第二次,、第三次和第四次接種后45天。M：用芽孢桿菌（B. megaterium）接種；C：用褐球固氮菌（A. chroococcum）接種,；MF：用芽孢桿菌（B. megaterium）和熒光假單孢菌（P. fluorescens）混合接種,；CB：用褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種；MFCB：用芽孢桿菌（B. megaterium）,、熒光假單孢菌（P. fluorescens）,、褐球固氮菌（A. chroococcum）和巴西固氮螺菌（A. brasilense）混合接種。CK：不接種,。
1,、植物生長(zhǎng)和土壤功能對(duì)重復(fù)接種的響應(yīng)土壤中有益微生物與植物的根系相互作用，影響植物對(duì)生態(tài)環(huán)境的適應(yīng)性,。但是,，土地集約利用可能會(huì)削弱這些有益的影響，從而使植物應(yīng)對(duì)生物和非生物脅迫的能力降低,。我們發(fā)現(xiàn),，在最初的10-90天，周期性接種主要增加了土壤速效養(yǎng)分,。盡管在最后兩次采樣時(shí)MFCB處理和CB處理的優(yōu)勢(shì)明顯,，但是接種的好處一般會(huì)隨著時(shí)間的推移而減少。這表明,，在調(diào)查期間,，微生物接種劑對(duì)土壤功能的影響是短暫的，并不持久,。需要注意的是,，土壤的變化與根際土壤的變化不同，而且這些變化也會(huì)反過(guò)來(lái)影響微生物群落,。此外,，最后一個(gè)時(shí)間點(diǎn)的土壤養(yǎng)分含量呈下降趨勢(shì)可能是因?yàn)榧竟?jié)變化和植物對(duì)養(yǎng)分的吸收。之前的一些研究也表明了接種微生物菌劑可以增強(qiáng)植物養(yǎng)分吸收促進(jìn)植物生長(zhǎng)和生物量積累,。2、接種次數(shù)和類(lèi)型影響細(xì)菌群落的組成和演替自然條件下微生物入侵和人為的微生物入侵通常都是從主導(dǎo)微生物種群開(kāi)始的,，即使最終引入的種群可能減少,，但是入侵的微生物也會(huì)在土壤土著微生物群落上留下痕跡。此外,，關(guān)于引入植物促生長(zhǎng)根瘤菌（PGPR）的研究,，以往都是評(píng)價(jià)它對(duì)根際微生物群落的影響，很少關(guān)注它對(duì)土壤群落變化的影響,。為了解決這個(gè)問(wèn)題,，研究人員評(píng)估了重復(fù)接種（非原生）對(duì)土壤土著細(xì)菌群落的影響程度和持續(xù)時(shí)間。在重復(fù)接種中，細(xì)菌群落組成由三種變化模式（成倍增加,、成倍減少和恢復(fù)）,，其中處理間57%的顯著變異發(fā)生在接種的最初45天之內(nèi)。土壤養(yǎng)分的變化和細(xì)菌群落的變化一致,。土壤土著微生物群落對(duì)周期性接種引起的微生物干擾有較高的恢復(fù)能力,，但沒(méi)有抵抗能力。PCoA分析,、類(lèi)型分析和兩兩相關(guān)分析表明,，群落間的差異在最后90天內(nèi)呈下降趨勢(shì)。這表明,，在反復(fù)接種的干擾下,，土著微生物群落具有恢復(fù)能力。3,、微生物接種劑應(yīng)用過(guò)程中形成土著微生物群落的基本因素有益微生物接種對(duì)土壤化學(xué)因子（比如硝酸鹽和pH值）的影響是解釋土著微生物群落隨時(shí)間變化的主要因素,。研究表明，土壤pH顯著改變了微生物的二次演替軌跡,。在接種1次和4次后,，接種處理的土壤pH值與未接種處理有顯著差異，這證實(shí)了之前的結(jié)論,。目前研究表明,，第一次接種后，和對(duì)照處理相比無(wú)機(jī)氮的含量顯著增加,。在本研究中,，變形菌（Proteobacteria）擬桿菌（Bacteroidetes）在接種后的45天增加，這個(gè)時(shí)期也是土壤養(yǎng)分快速變化的時(shí)期,。藍(lán)藻（Cyanobacteria）是新發(fā)現(xiàn)的有益微生物,，它具有調(diào)控氮含量的能力和對(duì)施肥敏感的能力，而衣原體（Chlamydiae）和疣微菌（Verrucomicrobia）對(duì)土壤水分和時(shí)間（季節(jié)變化）敏感,。綠彎菌（Chloroflexi）和芽單苞菌（Gemmatimonadetes）在旱季土壤中富集,。不同菌劑的混合接種可以促進(jìn)植物生長(zhǎng)，提高土壤養(yǎng)分含量,，因此這一方法得到推廣,。本研究中，植物生長(zhǎng)對(duì)混合菌劑MFCB處理有強(qiáng)烈的偏好,，在整個(gè)接種期,，MFCB處理的株高和地徑最大。有人提出,，混合接種可以產(chǎn)生協(xié)同作用,，刺激物理或生化活動(dòng)，同時(shí)提高微生物活力，從而使土壤和植物的相互作用增強(qiáng),。在本研究中,，第一次接種30天后，不同的接種劑（單劑/混合劑）瞬間調(diào)節(jié)了土著群落的變化,。土壤pH值與C/N比是這種影響的主要因素,。總之，重復(fù)接種不能使微生物菌劑的效益提高到理想的條件下,，移栽到不同地點(diǎn)對(duì)植物生長(zhǎng)的有益影響也不能保持,。因此，重復(fù)接種的必要性需要再考慮,。土壤微生物群落對(duì)于重復(fù)接種表現(xiàn)出恢復(fù)力特性,，但沒(méi)有表現(xiàn)出抗性作用。研究表明,，土壤微生物群落的變化主要反映了接種劑的初始干擾,，部分解釋了土壤養(yǎng)分和植物生長(zhǎng)的變化。土壤細(xì)菌類(lèi)群對(duì)微生物接種劑的響應(yīng)取決于接種劑類(lèi)型（PSB或NFB）,。在群落演替過(guò)程中,，接種處理和不接種處理顯著不同，這導(dǎo)致了不同群落組成的變化,，從而為了解土著微生物與入侵者之間的相互作用提供了新的視角,。土壤pH和硝態(tài)氮含量是影響土著群落演替的主要因素。單一菌劑和混合菌劑均對(duì)土壤pH和C/N比值的變化有明顯的調(diào)節(jié)作用,。隨著時(shí)間的推移,，細(xì)菌群落顯示出高度的恢復(fù)能力。在植物-土壤系統(tǒng)中引入有益微生物是改善作物產(chǎn)量和土壤環(huán)境的一種環(huán)境友好方法,。許多研究已經(jīng)揭示接種對(duì)根際微生物群落的影響,，但是很少有人知道定期接種對(duì)土壤功能的有效性。此外,，重復(fù)接種對(duì)土著微生物群落的持續(xù)影響尚不清楚,。為保持微生物接種劑對(duì)植物和土壤的有益作用，重復(fù)接種是一種很有效的方法,。到目前為止,，單次接種對(duì)土壤中土著微生物群落的影響已有研究，但是定期接種對(duì)土著微生物的演替影響尚不清楚,，會(huì)影響多長(zhǎng)時(shí)間以及影響的程度尚不明確。本研究研究了植物生長(zhǎng),、土壤功能和土壤中土著細(xì)菌群落對(duì)定期單一或混合接種時(shí)磷酸鹽和固氮細(xì)菌的動(dòng)態(tài)響應(yīng),。與單一菌劑接種相比，混合菌劑接種對(duì)植物生長(zhǎng)和土壤養(yǎng)分有更好的促進(jìn)作用。但是,，接種菌劑的有效性沒(méi)有隨著接種次數(shù)的增加而增加,，移栽到不同地點(diǎn)后有效性沒(méi)有得到維持。對(duì)微生物接種劑的反應(yīng),，研究人員發(fā)現(xiàn)細(xì)菌組成的三種變化模式—成倍增加,，成倍減少，和恢復(fù),。周期性接種影響了土壤微生物群落的演替,，主要受土壤pH和硝酸鹽的變化驅(qū)動(dòng)，在整個(gè)研究過(guò)程中形成了三種主要的聚類(lèi)類(lèi)型,。單一菌劑和混合菌劑對(duì)土壤pH和C/N的變化有短暫的調(diào)節(jié)作用,，但是最終微生物群落對(duì)后續(xù)接種表現(xiàn)出恢復(fù)的作用。所以,，重復(fù)接種的必要性應(yīng)重新考慮,，不同的微生物接種劑對(duì)土著微生物群落演替有不同的影響。最后,，研究人員得出結(jié)論,，初始接種對(duì)整個(gè)系統(tǒng)的影響更為重要，土著微生物群落對(duì)后續(xù)接種有恢復(fù)性作用,，沒(méi)有抗性作用,。
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