最近小編為了補(bǔ)充能量，徜徉在知識(shí)的海洋里,，偶然看到這一篇文章：《Exosomes derived from gemcitabine-resistant cells transfer malignant phenotypic traits via delivery of miRNA-222-3p》外泌體通過運(yùn)載miRNA-222-3p攻擊非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞并加重惡性的表型,。

對(duì)小編來說，花心的miRNA素來是吃著碗里看著鍋里的,，不僅與自家胞內(nèi)mRNA牽扯不清,，還希冀插足其他細(xì)胞內(nèi)mRNA家族?？墒?，胞內(nèi)的miRNA因缺車少馬，離開自家大本營(yíng)后,，只能寸步難行,。

所以只能說是空有一顆出去看看世界的心,，總歸是無法插足其他細(xì)胞內(nèi)miRNA與mRNA之間的老鐵關(guān)系?？珊鋈宦犝f,，miRNA搭上外泌體的快捷車后，竟然插足成功了,，目瞪口呆的小編則快馬加鞭,，以迅雷不及掩耳之勢(shì)研讀這篇文章，來看看miRNA坐上了外泌體這個(gè)傳送帶后,，人生是如何開了掛,？

外泌體(exosome)是多泡體(multivesicular body, MVB)限制性膜與細(xì)胞質(zhì)膜融合而釋放的脂質(zhì)雙層膜囊泡，直徑約30～100 nm,，電子顯微鏡下呈雙凹碟形或杯狀,，外泌體能夠運(yùn)載其內(nèi)源性的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、核酸等信息物質(zhì)參與細(xì)胞間相互作用,，通過靶細(xì)胞內(nèi)化、受體-配體間相互作用或脂質(zhì)膜融合方式,，將攜帶的信息物質(zhì)傳遞給靶細(xì)胞,，影響靶細(xì)胞生物學(xué)活性。

外泌體(exosome)所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,，在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平。

這篇文章的概況在這里先給大家介紹一下：

文章中使用通過PKH-67的染色和IF實(shí)驗(yàn)探索外泌體內(nèi)在化的機(jī)制,，分別用電子顯微鏡和蛋白技術(shù)觀察外泌體的碟形或者杯狀結(jié)構(gòu)和外泌體的表達(dá)量,。

外泌體所攜帶的小RNA可能與吉他西濱化療藥拮抗相關(guān)，作者通過芯片分析篩選出小RNA,，miR-222-3P,，并且建立體內(nèi)體外模型來分析miR-222-3P的作用機(jī)制。

最后,，分析外泌體的miR-222-3p和用完吉西他濱化療藥之后的病人之間的關(guān)系,。

那么就跟著小編來詳細(xì)分析這篇文章吧！

（一）A549-GR細(xì)胞來源的外泌體的內(nèi)在化是經(jīng)過小窩蛋白和脂筏依賴的內(nèi)吞作用

第一：當(dāng)將兩種細(xì)胞系用吉他西濱處理后,，觀察細(xì)胞的活性,。MTS比色結(jié)果和克隆形成實(shí)驗(yàn)分析 A549-GR細(xì)胞比A549p細(xì)胞更有拮抗能力。

第二：從兩種細(xì)胞系中分離出了外泌體,，用WB檢測(cè)其外泌體的標(biāo)記物蛋白的表達(dá)量,，以及用定量分析兩種細(xì)胞系中外泌體的表達(dá)差異。

第三：利用透射電鏡技術(shù)觀察到典型的外泌體大小的囊泡大多是具有脂分子雙層結(jié)構(gòu)的,。

第四：為了探索GR-Exo是如何潛入非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞內(nèi)的,，我們分別使用了小窩蛋白和脂筏的拮抗劑,，能夠抑制外泌體內(nèi)在化A549p細(xì)胞。PKH67染色分析出小窩蛋白和脂筏的拮抗劑明顯抑制了外泌體的內(nèi)在化作用,。另外,，當(dāng)使用胞吞的抑制劑和網(wǎng)格蛋白抑制劑后對(duì)外泌體的內(nèi)在化沒有明顯的抑制作用。

以上的結(jié)果表明,，外泌體內(nèi)入到非小細(xì)胞肺癌是通過小窩蛋白和脂筏的內(nèi)吞途徑,。

（二）外泌體能夠傳遞 miR-222-3p進(jìn)入到容易接受的細(xì)胞，并且增加癌癥的惡性表型

第一：miRNA array data分析出miR-222-3p在拮抗的外泌體中的表達(dá)量是非小細(xì)胞肺癌外泌體的16.7倍,。而且在這兩種細(xì)胞系中觀察分離出的外泌體和供體細(xì)胞兩者miR-222-3p的表達(dá)量,，結(jié)果顯示供體細(xì)胞中miR-222-3p的表達(dá)量是外泌體中的37倍。

第二：我們發(fā)現(xiàn)A549-GR的外泌體能夠誘導(dǎo)增加miR-222-3p的表達(dá)量,，而A549-P細(xì)胞的外泌體則不可以,，同樣在其他兩種細(xì)胞系中，也是如此,。

這些數(shù)據(jù)表明,，外泌體很有可能從GR供體細(xì)胞將miR-222-3p傳遞到拮抗劑敏感且易接受的細(xì)胞。

第三：觀察GR-Exo對(duì)細(xì)胞增殖,，浸潤(rùn)和遷移的影響,，結(jié)果顯示GR-Exo對(duì)細(xì)胞增殖沒有影響，但是增加了細(xì)胞浸潤(rùn)和遷移,。而且在miR-222-3p敲除的細(xì)胞內(nèi),，細(xì)胞增殖受到減少；對(duì)吉他西濱的敏感性增加,；顯然抑制了細(xì)胞的遷移和浸潤(rùn),。

綜上所述，GR-Exo能夠增加藥物的拮抗性,，促進(jìn)細(xì)胞的浸潤(rùn)和遷移,。

（三）外泌體的miR-222-3p抑制了SOCS3的表達(dá)通過直接與SOCS3的3'UTR區(qū)結(jié)合

第一：TargetScan和MicroRNA預(yù)測(cè)miR-222-3p的靶目標(biāo)SOCS3。

驗(yàn)證1：在GR的細(xì)胞內(nèi),，SOCS3的表達(dá)水平與A549-P細(xì)胞相比較低,。

驗(yàn)證2：當(dāng)過表達(dá)miR-222-3p后抑制了SOCS3的表達(dá)；當(dāng)利用miR-222-3p的抑制劑處理細(xì)胞后,，顯著增加了SOCS3的表達(dá),。

驗(yàn)證3：熒光素酶報(bào)告基因分析，miR-222-3p可以與SOCS3的3,，UTR區(qū)相互結(jié)合,。

第二：探索miR-222-3p可以與SOCS3的3'UTR區(qū)相互結(jié)合后，影響了SOCS3下游的因子,。過表達(dá)miR-222-3p后,，在容易接受的細(xì)胞A549內(nèi),，除了SOCS3的表達(dá)水平下降以后，還有激活了 p-Jak2和p-Stat3的磷酸化,，另外不管在不在外泌體的處理下,， Bcl-2/Bax的比例都增加。

第三：當(dāng)內(nèi)源性增加了SOCS3后,，抑制了GR-Exo導(dǎo)致的腫瘤惡性進(jìn)展,。

在兩種細(xì)胞系都內(nèi)增加了內(nèi)源性SOCS3的表達(dá)，并經(jīng)過GR-Exo的處理,，觀察細(xì)胞增殖,，細(xì)胞浸潤(rùn)和細(xì)胞遷移的表達(dá)變化，結(jié)果顯示其抑制了細(xì)胞增殖,，阻止了細(xì)胞浸潤(rùn)和細(xì)胞遷移,。

（四）在體內(nèi)敲除了miR-222-3p的表達(dá)后，抑制了非小細(xì)胞肺癌的轉(zhuǎn)移

第一:GR-Exo處理之后,，能夠誘導(dǎo)A549-P中miR-222-3p的表達(dá)增高,，而A549-GR組的miR-222-3p的表達(dá)只是稍微增加。

第二：在小鼠體內(nèi)注入A549-GR-luc2 細(xì)胞后,，觀察GR-Exo增加了腫瘤轉(zhuǎn)移到其他器官,；而同時(shí)敲除miR-222-3p之后抑制了腫瘤轉(zhuǎn)移到其他器官。

第三：生物體發(fā)光技術(shù)分析與體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致,，表明GR-Exo增加了腫瘤轉(zhuǎn)移到其他器官,，而敲除miR-222-3p之后抑制了腫瘤轉(zhuǎn)移到其他器官。

綜上所述,，miR-222-3p的敲除能夠減少腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,，而且即使是在GR-Exo處理的情況下，miR-222-3p的敲除也能夠減少腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,。

如果以上都算是紙上談兵，那么下面就亮出一點(diǎn)實(shí)際的了,。

非小細(xì)胞肺癌的病人在接受吉他西濱治療以后觀察腫瘤的代謝和診斷預(yù)后情況,，而外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)的miR-222-3p的表達(dá)水平與之息息相關(guān)。文章給出了50個(gè)人的具體情況列表,，如下：

非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞獲得性吉他西濱拮抗的外泌體能夠攜帶大量的miR-222-3p,，這導(dǎo)致了惡性的細(xì)胞表型變化還有不良的預(yù)后，尤其是接受吉他西濱化療藥物的病人,。

內(nèi)吞作用(endocytosis)又稱入胞作用或胞吞作用,，是通過質(zhì)膜的變形運(yùn)動(dòng)將細(xì)胞外物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞內(nèi)的過程。根據(jù)入胞物質(zhì)的不同大小,，以及入胞機(jī)制的不同可將內(nèi)吞作用分為三種類型:吞噬作用,、吞飲作用,、受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用。

caveolin小窩（caveolae)是一種特化的細(xì)胞質(zhì)膜結(jié)構(gòu),，主要由蛋白質(zhì)和脂類組成,，其中小窩蛋白（caveolin)是其主要的結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)成分，caveolae不僅參與跨膜物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn),，而且是細(xì)胞信號(hào)分子富集和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐,。