• 文/圖 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 王印庚等

2020年春季,，新冠疫情正在全國各地肆虐,，對蝦苗種場“玻璃苗”現(xiàn)象也在沿海各地爆發(fā)。該現(xiàn)象主要在苗種場和標(biāo)苗場發(fā)生,，患病蝦苗表現(xiàn)為活力弱,、體色暗濁，肝胰腺輪廓模糊,、顏色變蒼白呈淡黃色,，組織解體呈玻璃樣病變，空腸空胃,，隨之呈現(xiàn)急性死亡,，養(yǎng)殖業(yè)者稱之為“玻璃苗”。自3月份,，該疾病首先在南方苗種場呈現(xiàn)爆發(fā)性趨勢,，并逐步在北方沿海一帶蔓延，導(dǎo)致我國春季蝦苗供應(yīng)嚴(yán)重不足,。同時(shí),，投放的劣質(zhì)蝦苗也導(dǎo)致早期對蝦養(yǎng)成率明顯下降，這勢必對對蝦產(chǎn)量產(chǎn)生重大影響,。4月初至6月,，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所水產(chǎn)動物藥理及疾病臨床團(tuán)隊(duì)對廣東、福建,、浙江,、山東、河北,、天津等地苗種場進(jìn)行樣品收集和致病因綜合分析,。

河北省滄州市坐落于渤海灣腹地，是我國最大的對蝦苗種繁育基地之一,，現(xiàn)有苗種場240余家,，每年育苗能力約300億尾。本團(tuán)隊(duì)對該地區(qū)多家對蝦育苗場開展了流行病學(xué)調(diào)查分析,。調(diào)查發(fā)現(xiàn),，發(fā)生對蝦“玻璃苗”現(xiàn)象的苗種場占該地區(qū)的60%以上；大多數(shù)苗種場是采購?fù)獾匚r苗（廣東,、福建,、山東等地）經(jīng)標(biāo)粗后再次銷售。一般標(biāo)苗后2~3d即出現(xiàn)玻璃苗現(xiàn)象,，隨即24h內(nèi)蝦苗大部分死亡并排塘處置,；甚至部分苗種抵運(yùn)當(dāng)天即出現(xiàn)該現(xiàn)象,。依據(jù)患病程度不同，出現(xiàn)明顯玻璃化癥狀的苗種數(shù)量可占個(gè)別苗池總數(shù)的80%,。

為進(jìn)一步查明該區(qū)域?qū)ξr“玻璃苗”的主要致病原,，選取了滄州市5個(gè)不同區(qū)位的苗種場，取患病和健康對蝦及其養(yǎng)殖水體進(jìn)行病原檢測分析,，編號依次為H1,、H2、H3,、H4,、H5（表1）。分別通過病毒檢測試劑盒,、弧菌和可培養(yǎng)細(xì)菌分離鑒定,、石蠟組織切片、超微病理學(xué)觀察等手段進(jìn)行病原及病理學(xué)分析,。

典型癥狀：

患病蝦苗表現(xiàn)為活力降低,、厭食甚至空腸空胃，蝦體消瘦,、暗濁,；肝胰腺輪廓模糊、組織解體萎縮,、顏色變淺呈淡黃色,，甚至肝胰腺區(qū)由正常的飽滿褐色組織變?yōu)榭瞻椎牟ＡЩ癄顟B(tài)，進(jìn)而使得頭胸甲區(qū)域甚至腹部呈現(xiàn)瘦小,、蒼白,、暗濁狀態(tài)（圖1）。

圖1,，對蝦“玻璃苗”臨床表觀癥狀（空心箭頭為健康蝦苗；實(shí)心箭頭為玻璃苗）

養(yǎng)殖系統(tǒng)細(xì)菌監(jiān)測：

通過使用對蝦病原（IHHNV/EHP）熒光定量檢測試劑盒（FRK-307）,、桃拉綜合癥病毒（TSV）核酸檢測試劑盒（DHelix）和對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）核酸檢測試劑盒（DHelix）進(jìn)行常見病毒和微孢子蟲攜帶情況分析,，發(fā)現(xiàn)患有典型“玻璃苗”癥狀的蝦苗均未檢測出上述相關(guān)病原的攜帶。

對五家育苗場共計(jì)10個(gè)單元的養(yǎng)殖水體及其蝦苗肝胰腺組織中可培養(yǎng)細(xì)菌和弧菌的數(shù)量和種類進(jìn)行檢測分析,，發(fā)現(xiàn)育苗水體的可培養(yǎng)細(xì)菌總量均在10³數(shù)量級,，弧菌占比高達(dá)40.2~97.4%（表1）。通過對不同場區(qū)患病蝦苗分離得到的優(yōu)勢菌株進(jìn)行分離鑒定表明,，5個(gè)育苗場內(nèi)的優(yōu)勢菌株均為弧菌,，其中新喀里多尼亞弧菌、溶藻弧菌的檢出率最高,，且優(yōu)勢度較大,；此外包括副溶血弧菌,、歐文氏弧菌、塔氏弧菌,、錫那羅州弧菌等不同種類的弧菌也被檢出,。

經(jīng)過初步的人工感染試驗(yàn)表明：新喀里多尼亞弧菌、溶藻弧菌兩種弧菌均對凡納濱對蝦的PL5,、PL20仔蝦以及幼蝦有很強(qiáng)的致病性,，并可出現(xiàn)自然發(fā)病的典型癥狀。藥敏試驗(yàn)分析表明,，上述兩種弧菌對常用的抗生素例如利福平,、吡哌酸、鏈霉素,、多粘菌素,、青霉素、復(fù)方新諾明等有明顯的耐藥性,。

表1.對蝦“玻璃苗”樣品采集信息及水體中可培養(yǎng)細(xì)菌檢測結(jié)果

石蠟組織切片表明,，患病對蝦肝胰腺萎縮，肝小管上皮細(xì)胞壞死,、脫落,，肝小管中充斥大量的碎片組織并逐步褐化、黑化,。隨著感染程度的加劇,，肝小管組織大面積壞死，殘存少量的纖維化細(xì)胞基質(zhì)結(jié)構(gòu),，甚至完全消失,，使得肝胰腺組織出現(xiàn)大面積空白區(qū)域，呈現(xiàn)玻璃化組織壞死（圖2a）,。

超微組織病理檢測表明,，患病對蝦肝胰腺和腸道內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量細(xì)菌，優(yōu)勢菌株為桿狀菌且呈弧形,。肝小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜消融,，細(xì)胞與細(xì)胞間界限模糊，細(xì)胞器解體,，細(xì)胞核固化,，細(xì)胞解體呈碎片并脫落到肝小管內(nèi)；壞死的組織聚集形成大量的電子密度較高的黑化顆粒,。腸道絨毛膜上皮細(xì)胞壞死,、脫落，僅留下殘存的固有層基質(zhì),，充斥著大量的組織碎片和細(xì)菌顆粒（圖2b）,；嚴(yán)重者,，腸道絨毛膜組織大面積脫落，導(dǎo)致腸壁變薄,。肌原纖維受損,、萎縮，導(dǎo)致肌束間間隙增大,，部分組織出現(xiàn)崩解現(xiàn)象,。經(jīng)過多種組織的觀察，未發(fā)現(xiàn)病毒粒子的存在,。

圖2,，對蝦“玻璃苗”病理特征

a：蝦苗HE染色，肝胰腺大面積壞死,，呈現(xiàn)玻璃化病變（實(shí)心箭頭）,；b：超微病理觀察，前腸絨毛膜周圍有大量細(xì)菌（空心箭頭）

通過對河北省滄州市五家不同區(qū)位苗種場蝦苗的細(xì)菌分離鑒定分析,，表明新喀里多尼亞弧菌（Vibrio neocaledonicus）和溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）檢出率和優(yōu)勢度最高,；同時(shí)，這兩種弧菌均對凡納濱對蝦的PL5,、PL20仔蝦以及幼蝦有很強(qiáng)的致病性,，并可出現(xiàn)自然發(fā)病的典型癥狀；超微病理檢測也未發(fā)現(xiàn)病毒粒子的存在,，由此排除了滄州地區(qū)發(fā)生的對蝦“玻璃苗”由病毒感染引起的可能性,。綜上所述，初步判定對蝦“玻璃苗”為細(xì)菌性感染引發(fā)的流行性疾病,，命名為“蝦苗細(xì)菌性?；Y”（Shrimp Postlarva Bacterial Vitrified Syndrome，BVS）,。

按照細(xì)菌性致病原的疾病特性,，以生物安保為指導(dǎo)，提出通過選購SPF親蝦,、加強(qiáng)苗種檢疫,、減少長距離苗種運(yùn)輸、做到提前預(yù)防,、高效治療等防控理念，以期實(shí)現(xiàn)對BVS的有效防治,，其具體措施如下：

（1）選購SPF親蝦：通過培育或選購SPF親蝦進(jìn)行苗種繁育,，可有效阻斷病原的垂直傳播途徑，降低苗種對特定病原的攜帶,，有助于提高后期標(biāo)苗和養(yǎng)殖過程中對蝦的成活率,。

（2）加強(qiáng)苗種檢疫力度：結(jié)合區(qū)域內(nèi)對蝦“玻璃苗”發(fā)生情況和苗種溯源調(diào)查,，嚴(yán)格檢測外來苗種特定病原及可培養(yǎng)病原菌的攜帶情況，并在苗種入池前進(jìn)行病原消殺工作,。

（3）減少長距離苗種運(yùn)輸：苗種長距離運(yùn)輸不僅會加大苗種應(yīng)激反應(yīng),，降低苗種存活率，同時(shí)也加快了病原在南北方,、不同區(qū)域間的傳播速度,。通過近距離運(yùn)輸或繁育本地苗種，不僅加強(qiáng)苗種對本地環(huán)境的適應(yīng)能力,，同時(shí)降低折損率和運(yùn)輸成本,。

（4）防止病原交叉污染：做好進(jìn)水、排水系統(tǒng)的管理,，避免進(jìn)水和排水系統(tǒng)的交叉污染,；在水質(zhì)管理上，不僅做到水質(zhì)達(dá)標(biāo),，更重要的是對有害微生物的嚴(yán)格消殺,，防止含有病原菌的外源水或池水在不同養(yǎng)殖區(qū)域的相互串通；同時(shí),，做好養(yǎng)殖器具的消殺和專池專用,，以降低病原的交叉性傳染風(fēng)險(xiǎn)。

（5）實(shí)現(xiàn)疾病的高效防治：針對特定病原研發(fā)專用防治技術(shù)手段,，在養(yǎng)殖水體中使用過硫酸氫鉀,、聚六亞甲基胍等控制池水的細(xì)菌總量，并采用專用口服藥物“玻立凈”,、“復(fù)合抗菌肽”等進(jìn)行蝦體內(nèi)有害菌的控制,。同時(shí)，定期檢測水體和蝦體中有害菌數(shù)量,，評估蝦體健康狀況和疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),，及時(shí)做到對疾病發(fā)生的預(yù)警預(yù)報(bào)和有效防控。

玻璃苗現(xiàn)象已在全國沿海普遍發(fā)生并對產(chǎn)業(yè)造成巨大的創(chuàng)傷,。面對這一產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀,，我們亟需從流行病學(xué)角度出發(fā)，全面調(diào)查了解多地苗種產(chǎn)區(qū)的致病原種類是否相同,，同時(shí)建立快速檢測技術(shù),，查明病原的傳播途徑；另外,，建立一套既實(shí)用且高效的疾病防控技術(shù)是其重中之重,，為徹底解決苗種細(xì)菌性玻化癥提供技術(shù)支撐和參考。