PD-L1(programmed death ligand 1)全稱程序性死亡受體配體1,，是PD-1（programmed cell death 1,程序性死亡受體1）的配體,。PD-L1屬于細(xì)胞膜上的一個跨膜蛋白，表達(dá)在T細(xì)胞,、B細(xì)胞等免疫細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞上,，研究表明當(dāng)腫瘤細(xì)胞膜上的PD-L1與T細(xì)胞等免疫細(xì)胞上的PD-1結(jié)合后，腫瘤細(xì)胞發(fā)出抑制性信號,，進而T細(xì)胞不能識別腫瘤細(xì)胞和對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用,，機體的免疫功能受到抑制。

如何篩選可能獲益于PD-1/PD-L1抑制劑療法的患者是臨床最關(guān)注的問題,。PD-L1免疫組化檢測是預(yù)測PD-1/PD-L1抑制劑療效的一種簡單有效的方法,。目前，已被FDA/NMPA批準(zhǔn)的PD-1/PD-L1抑制劑的適應(yīng)癥,、PD-L1檢測平臺和判讀方法見下表,。作為PD-1/PD-L1 免疫檢查點抑制劑藥物的療效預(yù)測標(biāo)志，PD-L1 檢測已經(jīng)獲FDA批準(zhǔn)作為免疫治療的伴隨診斷或補充診斷,。

目前,，PD-L1免疫組化檢測試劑盒/抗體主要有五種：22C3、28-8,、SP263,、SP142和73-10，分別在兩個免疫組化平臺Dako和Ventana進行檢測,。

FDA只批準(zhǔn)了Dako 22C3 pharmDx的PD-L1檢測作為K藥的伴隨診斷,，Dako 28-8和 Ventana SP142則分別為O藥和T藥（Atezolizumab）的補充診斷。Ventana SP263 被歐盟認(rèn)證作為三種免疫抑制劑的補充診斷,。

當(dāng)前面臨的檢測難題：

1 不同抗體要求使用不同的檢測平臺

主流檢測平臺為兩家公司的4種抗體檢測平臺，分別為DAKO 22C3和28-8檢測的AutoStainer Link 48平臺和Ventana SP142和SP263檢測的Ventana Benchmark Ultra平臺,。

2 不同的抗體檢測結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)不同

目前主要PD-L1檢測抗體使用的判讀方法有TPS,、CPS以及分別計算TC和IC判讀方法,，不同判讀方法的主要差異在與是否計算腫瘤區(qū)域陽性表達(dá)的免疫細(xì)胞數(shù)量。

3 同一抗體在不同的腫瘤中判讀方法不同

FDA批準(zhǔn)22C3抗體的說明書中指出針對非小細(xì)胞肺癌使用TPS的判讀方法,，但針對胃腺癌和胃食管結(jié)合部腺癌,，則建議使用CPS的判讀方法。同樣在宮頸癌和尿路上皮癌中亦推薦使用CPS判讀方法,。因此PD-L1的判讀需要專業(yè)的病理醫(yī)生經(jīng)過大量的訓(xùn)練才能保證判讀的準(zhǔn)確性,。

雖然已有研究證明28-8、22C3和SP263的檢測結(jié)果一致性較高,，但也僅是特定腫瘤類型的比較,，至本在28-8和22C3的大量檢測數(shù)據(jù)顯示，在個別瘤種間,，不同抗體型號的檢測結(jié)果仍有不小的差異,。此外，不同的樣本類型（新鮮標(biāo)本還是蠟塊切片）,、不同的樣本來源（原發(fā)部位還是轉(zhuǎn)移部位）,、腫瘤樣本的不同取樣位置等都會導(dǎo)致檢測結(jié)果也會存在一定的差異,。因此使用不同免疫治療藥物需要使用不同的抗體進行檢測,，同時對PD-L1的檢測平臺、質(zhì)控體系和人員的判讀經(jīng)驗要求較高,。

五大PD-L1檢測試劑盒/抗體所針對的免疫抑制劑

1 不同檢測試劑盒/抗體檢測的一致性研究

近幾年,，國際上對于不同抗體檢測的一致性研究已有不少報道,。

美國學(xué)者對90例NSCLC手術(shù)切除標(biāo)本分別用22C3、28-8,、SP142和E1L3N檢測腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞的PD-L1表達(dá)情況,，由13位病理學(xué)家評估染色百分比。結(jié)果顯示,，采用SP142抗體在腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞中檢測到的PD-L1明顯減少,，不同抗體檢測到的腫瘤細(xì)胞評分的一致性為0.813（95%CI: 0.815-0.839），而免疫細(xì)胞評分的一致性為0.277（95%CI: 0.222-0.334）,。

2016年德國進行了一項比較22C3,、28-8、SP142和SP263在肺腺癌和鱗癌的染色模式研究,。在15例手術(shù)切除標(biāo)本的染色中,，采用28-8和22C3單抗染色的標(biāo)本中腫瘤細(xì)胞染色比例相似；相比之下,，SP142在4例標(biāo)本中的腫瘤細(xì)胞染色較少,，SP263在9例標(biāo)本中顯示了更多的腫瘤細(xì)胞染色比例。

2017年同樣評估這4種抗體一致性的藍(lán)印計劃（The Blueprint Project）開展,，39例NSCLC標(biāo)本的實驗結(jié)果表明了當(dāng)使用22C3,、28-8和SP263分析時,，染色的腫瘤細(xì)胞百分比是可比的，而SP142的檢測結(jié)果顯示染色的腫瘤細(xì)胞整體較少,。

藍(lán)印計劃就是旨在探明不同免疫組化抗體檢測腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)是否具有較高的一致率,。

藍(lán)印計劃I期（Blueprint phase1，BP1）研究中對4個抗體（28-8,、22C3,、SP263和SP142）之間的一致性進行了評價。研究結(jié)果顯示：28-8,、22C3和SP263這三種抗體在腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)中具有較高的一致性,；而SP142的敏感性較低，與其他三種抗體的一致性較差,。

當(dāng)然,，藍(lán)印計劃 I期研究具有一定的局限性：首先所有的病例均是手術(shù)切除標(biāo)本，而真實世界中需要檢測的樣本大部分為活檢小標(biāo)本,，I期研究并未涉及,；其次I期研究僅有三個病理醫(yī)生參與PD-L1免疫組化的判讀，從統(tǒng)計學(xué)上可信度不夠,。

藍(lán)印計劃II期A部分（BP2A）由25位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)生進行評估,，標(biāo)本類型上除了手術(shù)切除標(biāo)本以外，增加了穿刺標(biāo)本和細(xì)胞學(xué)標(biāo)本,，在更大隊列的臨床實踐標(biāo)本中驗證了上述藍(lán)印計劃1期的研究結(jié)果,。

藍(lán)印計劃II期B部分（BP2B）邀請24位病理學(xué)家參與結(jié)果判讀，包含的抗體有五個：22C3,、28-8,、SP142、SP263,、73-10,。納入了31例病例，這些病例均包含有組織蠟塊,、空芯針或者鉗夾活檢以及細(xì)針穿刺細(xì)胞塊包埋這三種配對標(biāo)本,；結(jié)果顯示三種樣本一致性較好。

德國一致性研究和藍(lán)印計劃在SP263同22C3,、28-8單抗的可比性結(jié)論上有所出入,，可能是樣本量過少引起。同年,，Ratcliffe等用22C3,、28-8和SP263分別檢測500個NSCLC的存檔標(biāo)本，設(shè)定腫瘤細(xì)胞胞膜陽性染色百分比包括1%、10%,、25%和50%多個截斷值作為PD-L1陽性標(biāo)準(zhǔn),，不同單抗之間的總體符合率均>90%。

綜合以上結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),，22C3、28-8和SP263的檢測結(jié)果具有相似的腫瘤細(xì)胞陽性百分比,，一致性較高,，而SP142染色陽性的腫瘤細(xì)胞較少。

2 以22C3伴隨診斷為例

以K藥（帕博利珠單抗）為例,，目前獲批的適應(yīng)癥以及以22C3 作為伴隨診斷時的判讀標(biāo)準(zhǔn),。

**TPS：任何強度下