第一法 酸度計法

一、原理

利用氨基酸的兩性作用,，加人甲醛以固定氨基的堿性,，使羧基顯示出酸性。用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定后定量,，以酸度計測定終點(diǎn),。

除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682-2008規(guī)定的三級水。

二,、試劑

甲醛(36%~ 38%):應(yīng)不含有聚合物(沒有沉淀且溶液不分層),。

酚酞,。

乙醇,。

鄰苯二甲酸氫鉀:基準(zhǔn)物質(zhì)。

三,、試劑配制

氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(NaOH)-0.050mol/L]:經(jīng)國家認(rèn)證并授子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液或配制方法如下：

a)酚酞指示液:稱取酚酞1 g溶于95%的乙醇中,用95%乙醇稀釋至100 ml,。

b)氫氧化鈉溶 液[氯氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c(NaOH)=0.05 mol/L]：稱取 110 g氫氧化鈉于250mI的燒杯中，加100ml的水,，振搖使之溶解成飽和溶液,，冷卻后置于聚乙烯的塑料瓶中,密塞.放置數(shù)H ，澄清后備用,。取上層清液2.7 mL加適量新煮沸過的冷蒸餾水至1 000 mL,搖勻,。

c)氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的標(biāo)定：準(zhǔn)確稱取約0.36 g在105℃~110℃干燥至恒重的基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀,加80 mL新煮沸過的水,使之盡量溶解,加2滴酚酞指示液(10 g/L),用氫氧化鈉溶液滴定至溶液星微紅色,30 s不褪色。記下耗用氫氧化鈉溶液毫升數(shù),。同時做空白試驗(yàn),。

c-氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的實(shí)際濃度。單位為摩爾每升(mol/L)；

m-基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量,。單位為克(g),；

V1-氯氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量體積。單位為毫升(mL),；

V2-空白實(shí)驗(yàn)中氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量體積,。單位為毫升(mL)；

0.2042--與1.00 ml.氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[e(NaOH)= 1.000 mol/L]相當(dāng)?shù)幕鶞?zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量,。單位為克(g),。

四、儀器和設(shè)備

酸度計(附磁 力攪拌器),。

10 ml微量破式滴定管,。

分析天平:感量0.1 mg。

五,、分析步驟

1,、醬油試樣

稱量5.0g試樣于50mL的燒杯中,用水分?jǐn)?shù)次洗入100ml容量瓶中,加水至刻度，混勻后吸取20.0mL,，置于200 ml燒杯中,，加60 mL水,，開動磁力攪拌器,，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[e(NaOH)=0.050 mol/L3}滴定至酸度計指示pH為8.2,，記下消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù),，可計算總酸含量,。加入10.0 mL甲醛溶液,混勻,。再用氯氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液繼續(xù)滴定至pH為9.2,，記下消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù),。同時取80 ml水,。先用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[e(NaOH)= 0.050 mol/L]調(diào)節(jié)至pH為8.2,，再加人10.0 mL甲醛溶液.用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至pH為9.2，做試劑空白試驗(yàn),。

2,、醬及黃豆醬樣品

將醬或黃豆醬樣品攪拌均勻后，放入研缽中,，在10min內(nèi)迅速研磨至無肉眼可見顆粒,裝人磨口瓶中備用,。用已知重量的稱量瓶稱取攪拌均勻的樣品5.0g用50mL80℃左右的燕餾水分?jǐn)?shù)次洗入100ml燒杯中，冷卻后,，轉(zhuǎn)人100ml容量瓶中,，用少量水分次洗滌燒杯洗液并入容量瓶中并加水至刻度混勻后過能。吸取濾液10.0 mL置于200 ml燒杯中,，加60 ml水,，開動磁力攪拌器,，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[e(NaOH) = 0.050 mol/L]滴定至酸度計指示pH為8.2記下消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù),可計算總酸含量。加人10.0mI甲醛溶液混勻,。再用氣氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液繼續(xù)滴定至pH為9.2記下消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的毫升數(shù),。同時取80ml.水，先用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[e(NaOH)=0.050mol/L]調(diào)節(jié)至pH為8.2再加入10.0ml甲醛溶液,用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定至pH為9.2做試劑空白試驗(yàn),。

六,、分析結(jié)果的表述

試樣中氨基酸態(tài)氨的含量按式(2)進(jìn)行計算:

式中:

X一 試樣中氨基酸態(tài)氮的含量,單位為克每百克(g/100 g)；

V1一測定用試樣稀釋液加入甲醛后消耗氯氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,，單位為毫升(mL),；

V2-試劑空白實(shí)驗(yàn)加入甲醛后消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,單位為毫升(mL)；

C-氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度,單位為摩爾每升(mol/L),；

0.014--與1.00 ml氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[<(NaOH)= 1.000 mol/L.]相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量,，單位為克(g)；

m-稱取試樣的質(zhì)量,單位為克(g),；

V3一試樣稀釋液的取用量,單位為毫升(mL),；

V4一試樣稀釋液的定容體積.單位為毫升(mL)；

100一單位換算系數(shù),。

計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字,。

七、精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%,。