一,、常規(guī)基因敲除鼠（ Conventional Knockout ）

常規(guī)基因敲除是通過基因打靶,，把需要敲除的基因的幾個(gè)重要的外顯子或者功能區(qū)域用 Neo Cassette 替換掉。這樣的小鼠其全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因產(chǎn)物,。此類基因敲除鼠一般用于研究某個(gè)基因在對(duì)小鼠全身生理病理的影響,，而且這個(gè)基因沒有胚胎致死性。

二,、條件性基因敲除小鼠（ Conditional Knockout ）

條件性基因敲除小鼠是通過基因打靶,，把兩個(gè) loxP 位點(diǎn)放到目的基因一個(gè)或幾個(gè)重要的外顯子的兩邊。該小鼠和表達(dá) Cre 酶小鼠雜交之前,，其目的基因表達(dá)完全正常,。當(dāng)和組織特異性表達(dá) Cre 酶的小鼠進(jìn)行雜交后，可以在特定的組織或細(xì)胞中敲除該基因,，而該基因在其他組織或細(xì)胞表達(dá)正常,。

條件性基因敲除鼠適用范圍為：（ 1 ）該基因有胚胎致死性；（ 2 ）用于研究該基因在特定的組織或細(xì)胞中的生理病理功能,。

三,、基因敲入小鼠（ Knockin ）

基因敲入小鼠是通過基因打靶，把目的基因序列敲入到小鼠的相應(yīng)基因位點(diǎn),，使用小鼠的表達(dá)調(diào)控元件指導(dǎo)目的基因表達(dá),。

此類基因敲入鼠一般用于藥物的篩選，信號(hào)通路的研究等,。

獲得嵌合體及之后品系純化詳細(xì)流程：

基因敲除其他方法：

一,、 ZFN 技術(shù)制作基因敲除鼠

ZFN 能夠識(shí)別并結(jié)合指定的基因序列位點(diǎn),，并高效精確地切斷。隨后細(xì)胞利用天然的 DNA 修復(fù)過程來實(shí)現(xiàn) DNA 的插入,、刪除和修改,，這樣研究人員就能夠隨心所欲地進(jìn)行基因組編輯。這在過去是無法想象的,，傳統(tǒng)的基因敲除技術(shù)依賴細(xì)胞內(nèi)自然發(fā)生的同源重組,，其效率只有百萬分之一，而 ZFN 的基因敲除效率能達(dá)到 10% ,。利用這些技術(shù)進(jìn)行小鼠基因的定點(diǎn)敲除和敲入，可以把時(shí)間從一年縮短到幾個(gè)月,。

這項(xiàng)技術(shù)中設(shè)計(jì)特異性的 ZFN 是最關(guān)鍵的環(huán)節(jié),，目前研究者采用計(jì)算生物學(xué)方法設(shè)計(jì)高特異性的 ZFN ，但 ZFN 的脫靶（ off target ）,，也就是把不該切的地方切了的問題仍是一個(gè)挑戰(zhàn),。也正因?yàn)檫@個(gè)原因，利用 ZFN 技術(shù)進(jìn)行小鼠的基因修飾還無法完全取代傳統(tǒng)技術(shù),。

二,、 TALEN 技術(shù)制作基因敲除鼠

TALEN 技術(shù)是一種嶄新的分子生物學(xué)工具?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn),，來自一種植物細(xì)菌的 TAL 蛋白的核酸結(jié)合域的氨基酸序列與其靶位點(diǎn)的核酸序列有恒定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。利用 TAL 的序列模塊,，可組裝成特異結(jié)合任意 DNA 序列的模塊化蛋白,，從而達(dá)到靶向操作內(nèi)源性基因的目的，它克服了 ZFN 方法不能識(shí)別任意目標(biāo)基因序列,，以及識(shí)別序列經(jīng)常受上下游序列影響等問題,，而具有 ZFN 相等或更好的靈活性，使基因操作變得更加簡單方便,。然而同樣因?yàn)槊摪械膯栴},，利用 TALEN 技術(shù)進(jìn)行小鼠的基因修飾仍然無法取代傳統(tǒng)技術(shù)。