熒光定量PCR技術(shù)是普通PCR技術(shù)的改良和發(fā)展,，它提高了普通PCR技術(shù)的特異性和準(zhǔn)確性，能做到實(shí)時(shí)監(jiān)控和準(zhǔn)確定量,，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究,、臨床檢驗(yàn)、海關(guān)商貿(mào)檢疫等各個(gè)領(lǐng)域,。

l mRNA表達(dá)檢測(cè)

l MicroRNA表達(dá)和靶基因表達(dá)檢測(cè)

l SNP檢測(cè)

l 基因copy數(shù)檢測(cè)

l 病原微生物樣品檢測(cè) 

游離狀態(tài)下的SYBR Green分子發(fā)出微弱的熒光信號(hào),，當(dāng)與dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域結(jié)合時(shí)，則發(fā)出綠色熒光,，可在520nm波長(zhǎng)下檢測(cè)熒光信號(hào),，熒光信號(hào)的強(qiáng)度與dsDNA數(shù)量呈正相關(guān)。

SYBR Green Ⅰ染料法的特點(diǎn)：

高靈敏度,，低背景信號(hào),，操作簡(jiǎn)單，不影響酶促反應(yīng),，價(jià)格便宜,。

TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團(tuán)連接在探針的5`末端,，一般用FAM,、VIC、HEX,、Cy3,、Cy5等熒光基團(tuán)，而淬滅劑則在3`末端,，一般為TAMRA,、BHQ1、BHQ2等,，其中TAMRA發(fā)出黃色熒光,，BHQ1和BHQ2不發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,，探針完整時(shí),，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí),，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈,，就有一個(gè)熒光分子形成,，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。

TaqMan-MGB探針與普通TaqMan熒光探針相比具有更短的序列和更高的序列特異性,，常被用于SNP分型的研究中,，有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的首選技術(shù)平臺(tái)。

探針法的特點(diǎn)：

與染料法相比具有更低的背景信號(hào),，更高的靈敏度,，可以檢測(cè)低于10個(gè)分子的模板，更高的特異性,，結(jié)果也更準(zhǔn)確,。同時(shí)也具有染料法的操作簡(jiǎn)單，不影響酶促反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),。