今天小編要給大家分享的題目是《2,5-Hexanedione induces autophagic death of VSC4.1 cells via a PI3K/Akt/mTOR pathway》(回復(fù)170807可下載文獻(xiàn),，一周有效),，由文章的題目可知該文章是一個(gè)常見(jiàn)信號(hào)通路的類型,，閱讀者從題目可熟知的信息量則為：

在該文章中自噬是主要事件，2,5-Hexanedione,，2,5-己二酮（HD） 是一個(gè)誘導(dǎo)劑,，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞自噬，VSC4.1細(xì)胞系是事件發(fā)生的主體,，而本文就是探討誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)主體發(fā)生主要事件的機(jī)制,，那快來(lái)跟著小編看看新鮮總結(jié)的吧!

首先：發(fā)現(xiàn)現(xiàn)象HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生自噬和死亡；

其次：HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡與信號(hào)因子PI3k之間的關(guān)系,；

再次：HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡與信號(hào)因子Akt之間的關(guān)系,；

第四：HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡與信號(hào)因子mTOR之間的關(guān)系；

最后：HD誘導(dǎo)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬和凋亡與 PI3K/Akt/mTOR通路之間的關(guān)系,。

為了方便大家理解,，小編特異搜索一個(gè)網(wǎng)站探索三者之間的信號(hào)網(wǎng)絡(luò)關(guān)系：

絲氨酸/蘇氨酸激酶 Akt（又稱作蛋白激酶 B 或 PKB）作為一種原癌基因，Akt 調(diào)控多個(gè)生物過(guò)程,，包括細(xì)胞存活,、增殖、生長(zhǎng)和糖原代謝,。PI3K 相關(guān)激酶 (PIKK) 家族成員,，包括 DNA-PK，也同樣能在 Akt 絲氨酸 473 位點(diǎn)將其磷酸化,。Akt 通過(guò)作用于 TSC1/TSC2 復(fù)合體以及 mTORC 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng),。

哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 是一種非典型的絲氨酸/蘇氨酸激酶,，存在于兩個(gè)不同的復(fù)合體中。第一個(gè)為 mTOR 復(fù)合體 1 (mTORC1),，乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白 (mTOR) 是一種非典型的絲氨酸/蘇氨酸激酶,，存在于兩個(gè)不同的復(fù)合體中。第一個(gè)為 mTOR 復(fù)合體 1 (mTORC1),，由 mTOR,、Raptor、GβL 和 DEPTOR 構(gòu)成,，受 rapamycin 抑制,。第二種復(fù)合體是 mTOR 復(fù)合體 2 (mTORC2)，由 mTOR,、Rictor,、 GβL、 Sin1,、PRR5/Protor-1 和 DEPTOR 構(gòu)成,。

發(fā)現(xiàn)2,5-己二酮誘導(dǎo)劑可以誘導(dǎo)VSC4.1細(xì)胞自噬

培養(yǎng)VSC4.1細(xì)胞,，并用三個(gè)不同劑量的2,5-己二酮（HD）處理之后，作者利用免疫印跡,，免疫熒光以及電鏡技術(shù)發(fā)現(xiàn)了HD誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的現(xiàn)象,，并且細(xì)胞自噬具有劑量依賴性。

LC3位于細(xì)胞質(zhì),，是自噬的標(biāo)記性蛋白

發(fā)現(xiàn)HD誘導(dǎo)自噬細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象

過(guò)度的自噬能夠誘導(dǎo)自噬細(xì)胞的凋亡,，為了檢測(cè)是否是HD誘導(dǎo)自噬細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡，用HD處理細(xì)胞24h后,，然后用乳酸脫氫酶（LDH）檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況,，結(jié)果顯示自噬的程度越高細(xì)胞凋亡的越多，兩者呈正相關(guān)的關(guān)系,。

美膩膩的分割線,。。,。,。。,。以上便是主要事件發(fā)生在主體上的過(guò)程-HD誘導(dǎo)了細(xì)胞發(fā)生自噬,，并且到一定濃度劑量時(shí)細(xì)胞發(fā)生死亡，那么接下來(lái)就看機(jī)制了,。,。。

HD與PI3K

在HD和PI3K共在的情況下,，細(xì)胞凋亡還是比對(duì)照組較高,，但是 HD誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在PI3K的存在下還是得到了緩解。利用免疫熒光和免疫印跡技術(shù)檢測(cè)這些結(jié)果表明HD誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡能夠被PI3K所阻斷,。

HD與Akt

在調(diào)節(jié)自噬神經(jīng)元死亡中 PI3K/Akt發(fā)揮了重要的作用,，而且Akt是PI3K的下游的重要因子。為了檢測(cè)PI3K/Akt的通路是不是受HD所調(diào)控和影響,，在VSC4.1細(xì)胞中加入HD分三個(gè)劑量濃度處理24h,，然后用蛋白檢測(cè)Akt的表達(dá)水平。

Akt的表達(dá)水平在HD處理后沒(méi)有發(fā)生變化,，但是磷酸化的Akt顯著的下降并且具有劑量依賴性,。為了深入了解以上的結(jié)果，HD處理 VSC4.1細(xì)胞之后,，然后分別加入或者不加入740Y-P,，740Y-P是PI3K的激活劑。在740Y-P存在的情況下,，下降的Akt水平被回升,。這表明HD阻止了PI3K/Akt的信號(hào)通路,。

HD與mTOR 

蛋白檢測(cè)在VSC4.1細(xì)胞中，HD誘導(dǎo)下mTOR以及磷酸化mTOR的變化,，結(jié)果表明磷酸化mTOR的水平與對(duì)照組相比顯著下降,，而且呈現(xiàn)劑量依賴性。為了檢測(cè)mTOR的下降活性與抑制PI3K/Akt的通路相關(guān),，HD誘導(dǎo)的VSC4.1細(xì)胞處理740Y-P或者SC79,。這些結(jié)果表明mTOR的失活抑制了PI3K/Akt通路。

備注：條形圖為蛋白灰度值統(tǒng)計(jì)結(jié)果圖

HD與PI3K/Akt/mTOR

為了檢測(cè)HD誘導(dǎo)的過(guò)度自噬能夠?qū)е录?xì)胞死亡是通過(guò)PI3K/Akt/mTOR通路,，作者將HD-極度興奮的細(xì)胞用 740Y-P或SC79或 3BDO處理,。用免疫熒光，免疫印跡及電鏡技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞自噬的活性變化,。

結(jié)果表明：與對(duì)照組相比,， 740Y-P和SC79以及3BDO組，LC3標(biāo)記的自噬細(xì)胞數(shù)目顯著減少,，LC3-II/LC3-I的表達(dá)比例顯著增高,。HD的誘導(dǎo)細(xì)胞自噬會(huì)被PI3K和Akt以及mTOR的激活因子所緩解，表明HD誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬之后的凋亡是通過(guò)抑制PI3K/Akt/mTOR 通路,。

以上便是該信號(hào)通路PI3K/Akt/mTOR的主要內(nèi)容,，本文通過(guò)分總的方式，以免疫熒光,，蛋白水平以及電鏡的主要實(shí)驗(yàn)方法證明這條通路,，怎么樣，有沒(méi)有套路到什么,？