使用Spark 10M實(shí)時(shí)分析干細(xì)胞在分化過(guò)程中的細(xì)胞增殖1

生命科學(xué)及臨床診斷

    源自血管周祖細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）屬于多能成體干細(xì)胞，具有高度的自我更新能力,。在體外培養(yǎng)條件下,，它可以被定向誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞,、成骨細(xì)胞。

    通常,，向終末分化的細(xì)胞會(huì)失去自我更新的能力,，這個(gè)過(guò)程會(huì)阻礙細(xì)胞增殖。認(rèn)識(shí)細(xì)胞在分化和增殖間轉(zhuǎn)換的分子機(jī)制,，對(duì)人干細(xì)胞研究有舉足輕重的意義。

    在Spark 10M酶標(biāo)儀上,，結(jié)合PromoCell公司開(kāi)發(fā)的細(xì)胞學(xué)試劑,，可實(shí)時(shí)分析人干細(xì)胞的分化。整個(gè)實(shí)驗(yàn)方便快速,，可定量,、重復(fù)且高靈敏地檢測(cè)細(xì)胞活性，增殖以及凋亡,。最終結(jié)果表明,，在體外啟動(dòng)間充質(zhì)干細(xì)胞分化后，細(xì)胞分裂并沒(méi)有立即停止,，反而在某些特定條件下,，細(xì)胞增殖被短暫地誘導(dǎo)升高了。

    Spark 10M擁有非常適合細(xì)胞學(xué)研究的特點(diǎn)和功能,，如細(xì)胞明場(chǎng)成像,、氣體控制、溫度及獨(dú)特的濕度控制等,，滿足幾乎所有生命科學(xué)研究應(yīng)用,。

    本實(shí)驗(yàn)在96孔微孔板中進(jìn)行，間充質(zhì)干細(xì)胞過(guò)夜貼壁后,，我們將細(xì)胞培養(yǎng)液分組更換成以下四種定向誘導(dǎo)分化培養(yǎng)液：

Adipogenic（PromoCell C-28016）

osteogenic (PromoCell C-28013)

chondrogenic (PromoCell C-28012)

neurogenic (PromoCell C-28015)

    細(xì)胞板置于Spark 10M濕度控制盒中（ 37°C ,，5% CO2），在接下來(lái)的60個(gè)小時(shí)中監(jiān)測(cè)MSC的分化情況,。我們分別使用PromoCell的WST-8,、EdU試劑和Caspase-3三種試劑,，檢測(cè)細(xì)胞活性、增殖和凋亡情況,。

    干細(xì)胞的自我更新與分化間的平衡是受到精確調(diào)控的,，且其終末分化被認(rèn)為是會(huì)中止細(xì)胞增殖的。然而,，在體外培養(yǎng)時(shí),，干細(xì)胞對(duì)分化刺激的反應(yīng)有多快，我們知之甚少,。本實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)就是監(jiān)測(cè)MSC在體外分化早期的增殖特性,。

一．WST-8試劑對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，活細(xì)胞可以將其轉(zhuǎn)化成黃色的水溶性甲臜,，適合長(zhǎng)時(shí)間實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞活性,。下圖表明，在分化的初始階段,，活性的上升是由于活細(xì)胞數(shù)量或細(xì)胞活力的增加,。

圖1. 實(shí)時(shí)測(cè)量WST-8轉(zhuǎn)化獲得干細(xì)胞分化過(guò)程中的活細(xì)胞數(shù)