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手把手教你那篇2.5分不做實驗的文獻是怎么做差異基因分析的

 微笑如酒 2016-10-25


昨天那篇兩分半的文章(沒看過就點這里),有好多人覺得現(xiàn)在沒法發(fā)了,,但這篇文章就是今年八月份發(fā)表的,,所以也不是什么“最近”發(fā)不了啦。但這也需要有一定的運氣的,。不管這樣的思路是不是能發(fā)出什么文章,,但如果只有這樣的數(shù)據(jù)挖掘分析,其實并不是很有價值就對了,,因為基本上都是各說各話,,各找各媽。



如果在這個基礎(chǔ)上,,有一定的實驗驗證的話,,發(fā)個一兩分的應(yīng)該還是可以的。什么驗證,?比如免疫組化,,驗證一下是不是樣本中有這樣的表達現(xiàn)象啊,或者做個qPCR驗證驗證,,這都是比較快速的驗證方法,。今天我們就把這篇文獻到底是怎么做的,一步步分析一遍,。


首先,,在這篇文獻里,大家如果認真看的話,,會發(fā)現(xiàn)我平時教大家挖便宜數(shù)據(jù)的時候,,都讓大家去下載的GEO上的GDS數(shù)據(jù),,就是那種有熱圖的。那些,,可以直接在GEO的Analysis Tool里面進行分析,。但這篇文章用的是GSE的數(shù)據(jù),有什么區(qū)別呢,?


首先我們講GEO的數(shù)據(jù)有這么幾種:GDS,GSM,GSE和GPL,。GSM是單個樣品的表達數(shù)據(jù),這個樣品可能是某個芯片里的一個樣本,。GPL是表達檢測所用的平臺,,換句話說就是檢測方法,用的是基因芯片還是qPCR,,還是蛋白芯片,,基因芯片用的是哪個公司的那種芯片。GDS當然是我們最熟悉的,,某個題目下的多個樣本表達的集合,,由于使用的實驗平臺是一致的,所以可以形成熱圖,。GSE比較特殊,,是一個實驗中多個芯片的組合,可能是用的一樣的平臺,,可能是不同的平臺,。



好了,我們首先搜一下這個GSE的數(shù)據(jù),。



打開后,,我們會看到這個芯片的數(shù)據(jù),所使用的平臺,,包含的樣本情況等等,。接著,我們要下載這個“Series Matrix File(s).txt”文件,。



雖然是txt文件,,但其實很大。



用Excel打開后,,會看到這樣的數(shù)據(jù),,開頭幾行是對這個GSE的注釋,而下面是基因名和表達量,,基因名其實都是所用平臺的基因名,,所以我們需要搜索找到GPL的注釋文件。



打開剛才的GSE21815界面中的GPL的鏈接,可以看到里面有對所有這些基因的對應(yīng)基因名,、基因ID,、NM號以及探針序列之類的所有注釋。就下載下來就可以了,。



把對應(yīng)的基因名復(fù)制下來,,替換到剛才的表格中。



接著,,把GSE數(shù)據(jù)的表格中的數(shù)據(jù)部分復(fù)制下來,,貼到一個新建的txt文件里,這需要蠻多時間,,但只有這樣我們才能用Morpheus來分析,,雖然文獻里所采用的GeneSpring也還好啦,但是操作不是很方便,,所以我不喜歡用,,我們還是用Morpheus吧(不知道怎么用就點這里)。



導(dǎo)入到Morpheus后,,進行分析,,按照文獻里所說的,用T檢驗來分析,,就可以得到這樣的和文獻里差不多的芯片熱圖了,。


…華麗麗的分割線…


李莫愁博士:今天就先說到這里吧,說多了大家估計大概大家也接受不了,。和文獻里的這個對比一下,是不是差不多了,?我隨機挑了個比較了下(上面是文獻中的,,下面是我分析的):



明天繼續(xù)來接著將得到的數(shù)據(jù)他們是怎么來進行GO、Pathway和PPI分析的吧,。今天就先策到這里吧,。


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