～某有機(jī)合成研究室,，一位碩士師兄和剛進(jìn)實(shí)驗室助研的本科師妹對話的一個場景～
師兄： ,。。,。像這樣萃取分液之后,，收集有機(jī)相,，然后用硫酸鎂干燥,。
師妹： 哦,，師兄，那然后呢,？
師兄： 然后把干燥劑過濾掉之后上旋蒸,。
師妹： 就是為了蒸出溶劑吧？
師兄：對對,，然后過柱子（指指實(shí)驗臺上還沒清理的色譜柱）,。
師妹： 哦，柱子,？,！師兄。,。,。那咋過“柱子”呢？
師兄：按照產(chǎn)物爬板子點(diǎn)的Rf值配制展開劑,，裝柱子,。
師妹： 哦。,。,。
師兄： 盡量平穩(wěn)上樣，要平,，粗產(chǎn)物上樣后加入展開劑,，用試管接取流出液。
師妹： 柱子選多粗的??？試管接多少大概到多少支的時候產(chǎn)物就出來了啊,？展開劑用多少,，流速什么的?
師兄： 。,。,。這個。,。哎呀,，都是實(shí)戰(zhàn)經(jīng)驗，教不了啊,，你過幾根就知道了嘛,。
師妹： 哦哦,，那，有沒有和架反應(yīng)時一樣的參考文獻(xiàn)??？
師兄： 沒有，咱們實(shí)驗室就是這么過的,。（有些不耐煩了）
師妹：哦,，好，好,，那我試試吧?。ㄍ耆珱]有底氣應(yīng)著，郁悶的走開了）
這樣的對話是不是挺熟悉??？過柱子貌似是有機(jī)合成實(shí)驗室中大家最常見卻又最不想弄的實(shí)驗操作之一吧，今天我們就來分享一下,，上面對話中那些含糊不清,，卻有必要深究一下的，有關(guān)柱層析色譜分離（傳說中的“過柱子”）的一些技巧吧,！
柱層析色譜是什么,？
文獻(xiàn)中最早關(guān)于柱層析色譜的記載是1903年由Michael Michael Tswett 發(fā)現(xiàn)的，用碳酸鈣作為固定相來分離植物色素,。[1]
在那以后,，1978年由 Clark Still發(fā)現(xiàn)的劃時代的“Flash Chromatography”也被報道。[2] 在那以后,，很多論文的實(shí)驗部分就有關(guān)于柱色譜分離的詳細(xì)討論了,。
硅膠柱層析色譜ー基本知識匯總
注：關(guān)于柱色譜的基本概念可以參考
1. 充填法： 濕法和干法
濕法???將硅膠和展開劑溶劑配成懸濁液（Slurry）裝柱。
干法???在柱子中裝入干硅膠填實(shí),，再加入展開劑流過浸潤硅膠,。
在柱子中裝入硅膠固定相雖然有這兩種不同的辦法，但是只要手法得當(dāng),，把硅膠填充實(shí),，兩種裝法的分離效果沒有明顯區(qū)別。
2.分離效果和流動向的極性
硅膠柱的分離效果與和他相同固定相的TLC一致,，洗脫（展開）距離變長,，分離效果(△Rf)變好。也就是說,，固定相長度越長,，分離效果越好。另外,，流動相極性越小,，產(chǎn)物流出的速度越慢,。[2]
3. open column chromatography和Flash chromatography
open column也稱常壓柱，是通過重力使展開劑流出,，F(xiàn)lash chromatography是由空氣泵[3]將流動相加壓流出,。
4.經(jīng)驗？理論,？
最開始過柱子的人,，成敗可能確實(shí)取決于個人運(yùn)氣和手法吧,？個人覺得經(jīng)驗和理論都很有必要,。
那么這里就給大家介紹一下Still的flash chromatography的要點(diǎn)吧。[2]
- TLC上想要物質(zhì)的點(diǎn)的Rf= 0.35～0.45的展開劑來洗脫效果最佳,。
- 參照列表中,，柱子的尺寸和所需的溶劑量。（ref: 2a, Table 1 ）
- 固定相(Silica gel)的長度（高度）在15cm（或以下）的話可以用干法裝柱,，流動相全部加入,，浸潤硅膠，此過程反復(fù)1～2次,。
- 粗產(chǎn)物用展開劑或者更小極性的溶劑溶解,，打開柱子下方活塞，輕輕上樣,。
- 在不破壞硅膠表面平整的情況下,，加入流動相，并用試管接取,。
- 能接20根試管的話,，可以用TLC檢測6～20根試管里有沒有所要物質(zhì)，當(dāng)然如果接到20根還有,，只能繼續(xù)直到?jīng)]有物質(zhì)流出,。
- 把相同的產(chǎn)物合并，然后旋蒸除溶劑,。
5．其他 ”主觀”經(jīng)驗
- Rf= 0.45時,，8±2根試管附近；Rf= 0.35時,，13±2根附近會開始有目標(biāo)化合物的點(diǎn),。
- △Rf= ~0.05時，固定相高是22cm左右,，Rf= 0.3的話,，25±2根就會有目標(biāo)化合物點(diǎn)流出。
- 原文中”5 cm / min” 程度的速度使流動相流動,，速度提高分離效果也不會有太大變化,。
- Flash chromatography中加壓后會導(dǎo)致柱子硅膠填充更緊實(shí),，流速變慢，尤其是濕法裝柱,，這一點(diǎn)要注意,，所以必要的時候也可以用干法裝柱。
＊上述的文獻(xiàn)中的表打印出來,，貼到試驗臺附近做參考非常便利,。（這么老的文獻(xiàn)，小編貼上來有點(diǎn)沒自信啊,，不過大家可以根據(jù)自己經(jīng)驗修正）
Aldrich 公司制的Flash Chromatography器具概要圖
（＊非常推薦有連接口的器具,，加壓時，一般的磨口固定不牢,，在加壓時容易溶劑噴出,，較危險！）
鼓氣泵3)和專用器具4)一起使用的話,，熟練的人一個半小時左右就能過完一根柱子拿到目標(biāo)產(chǎn)物,，新手的話，也能用最少的溶劑,，高效可重復(fù)的完成分離,。當(dāng)然，用一般的Open column或者雙連球,、魚缸空氣泵等也能分離,。
實(shí)驗記錄中最好能記下色譜柱的外徑(Φ)、流動相的組成?比例,，分離時第多少根開始有目標(biāo)產(chǎn)物流出,，這些具體細(xì)節(jié)信息，這樣的話以后放大實(shí)驗時可以用來參考,。
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