關鍵詞：植物生長調節(jié)劑,；槲蕨[Drynaria fortunei （Kunze） J.Sm]；離體培養(yǎng),；效應
　　槲蕨[Drynaria fortunei （Kunze） J.Sm]為槲蕨科（Drynariaceae）槲蕨屬（Drynaria）植物,，其根莖是中藥骨碎補的主要來源，具有補腎強骨,、續(xù)傷止痛等功效,，常用于 治療腎虛腰痛、耳鳴耳聾,、牙齒松動,、跌撲閃挫、筋骨折傷,、外治斑禿及白癜風等疾病,。槲蕨的多糖還具有一定的抗細菌和真菌活性。以槲蕨為原料的 強骨膠囊已獲國家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的中藥二類新藥證書和生產(chǎn)批文并開始生產(chǎn),。槲蕨主要分布在長江以南各省,，附生于低山丘陵的巖石或樹干上。槲蕨分 布和數(shù)量相對較少,，但需求量大,，槲蕨占骨碎補商品藥材的70%以上。近年來,，隨著人們保健意識的增強,，對原料的需求急劇增加,，加上生態(tài)環(huán)境的變化和 骨碎補的大量被采挖，使該植物的種類和數(shù)量越來越少,，在一些地區(qū)骨碎補瀕危滅絕,，野生槲蕨緊缺。目前,，國內(nèi)外對槲蕨的研究主要集中在化學成分,、藥理及生藥 鑒定等方面，有關于消毒方式,、光照度等對槲蕨組培快繁的影響的報道,，而對槲蕨不同部位離體培養(yǎng)的研究報道較少。本試驗通過研究植物生長調節(jié)劑對 槲蕨不同部位外植體離體培養(yǎng)的效應,，旨在為槲蕨的組培快繁以及開發(fā)利用提供技術參考,。
　　1 材料與方法
　　1.1 試驗材料
　　供試材料槲蕨孢子、塊莖采自廣西武鳴縣,、玉林市及四川等地,。2011年4月11日于廣西藥用植物園離體庫進行試驗。
　　1.2 試驗方法
　　1.2.1 外植體的消毒 取槲蕨幼嫩孢子,、塊莖,、葉片，先用洗潔精水溶液清洗塊莖表面污垢,，清除塊莖表皮毛,，置于燒杯中流水沖洗15 min，用軟毛刷輕輕去除表面塵土,，然后移至超凈工作臺上,，用75%乙醇滅菌25～30 s，無菌水沖洗1遍,，再用0.1% HgCl2消毒10 min,，無菌水浸泡4次，每次5 min,。用備用的無菌濾紙吸干外植體表面的水分后,，剪切成大小約1.0 cm×0.6 cm、厚為0.2～0.3 cm的塊莖,，葉片大小為1.0 cm×0.6 cm,，平放到培養(yǎng)基上，孢子用消毒好的解剖刀從葉片上刮到培養(yǎng)基中,，塊莖和葉片每瓶接種2～4個外植體,。每處理接種20瓶，3次重復,，取平均值,。
　　1.2.2 培養(yǎng)基的選擇 愈傷組織誘導及分化培養(yǎng)基是以MS為基本培養(yǎng)基,，設不同激素配比共12種，分別為：（0.5,、1.0） mg/L 6-BA +（0.5,、1.0、1.5）mg/L 2,，4-D；（0.5,、1.0） mg/L 6-BA+（0.1,、0.5、1.0）mg/L KT,；繼代增殖培養(yǎng)基設不同激素配比10種,，分別為：（0.5、1.0,、1.5,、2.0、2.5）mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA,；2.0 mg/L 6-BA +（0.1,、0.5、1.0,、1.5,、2.0）mg/L NAA；生根培養(yǎng)基以1/2 MS為基本培養(yǎng)基,，設不同激素配比4種,，分別為：0.5 mg/L IBA、0.5 mg/L NAA,、0.5 mg/L IBA+0.3 mg/L IAA,、0.5 mg/L NAA+0.3 mg/L IAA。
　　1.2.3 培養(yǎng)條件 接種后,，在溫度20～25 ℃,、光照度20～30 μmol/（m2·s）、光照時間12 h/d的條件下進行愈傷組織誘導分化,、繼代增殖與壯苗生根培養(yǎng),。
　　2 結果與分析
　　2.1 不同激素水平對槲蕨愈傷組織誘導的影響
　　采用12種不同的激素配比對消毒好的槲蕨幼嫩孢子、塊莖,、葉片進行愈傷組織誘導及分化,，首先將外植體接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)（圖 1A），再對愈傷組織進行分化培養(yǎng)（圖1B）,。經(jīng)試驗觀察發(fā)現(xiàn),，孢子培養(yǎng)（圖1C）7 d左右開始呈綠色,，隨后便長出大小不一的葉叢（圖1D）；葉片則逐漸褐化,；只有塊莖產(chǎn)生愈傷組織,。塊莖愈傷組織誘導效果見表1。
　　從表1可以看出,，A1-A12處理均能使槲蕨誘導產(chǎn)生愈傷組織并分化,，A1-A6處理是0.5、1.0 mg/L 6-BA分別與0.5,、1.0,、1.5 mg/L 2，4-D配合使用,，其中1.0 mg/L 6-BA和1.0 mg/L 2,，4-D配對組合槲蕨愈傷組織誘導率較高，為53.3%,，愈傷組織嫩綠（圖1A）,；繼續(xù)培養(yǎng)5～10 d愈傷組織便可分化出葉叢（圖1B）。
　　A7-A12處理是0.5,、1.0 mg/L 6-BA分別與0.1,、0.5、1.0 mg/L KT配合使用,，槲蕨產(chǎn)生的愈傷組織數(shù)較少,，最高愈傷組織誘導率僅為35.7%，相對而言,，愈傷組織質量變差,，部分出現(xiàn)淺黃色或褐化現(xiàn)象?？梢?，適當濃度的 2，4-D對槲蕨愈傷組織誘導效果優(yōu)于KT,。而在分化培養(yǎng)中,，KT對槲蕨愈傷組織的分化起到促進作用，其最高分化率可達75.0%,。
　　2.2 不同激素水平對槲蕨苗繼代增殖的影響    

　　均等切分誘導出的槲蕨葉叢,，將其接種在含不同外源激素水平的增殖培養(yǎng)基上，30 d后統(tǒng)計和觀察增殖情況,。試驗結果（表2）表明,，2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA配合使用對槲蕨葉叢的增殖有明顯的促進作用。在0.5、1.0,、1.5,、2.0 mg/L 6-BA的濃度梯度范圍內(nèi)，槲蕨葉叢增殖系數(shù)不斷增加,，試驗中觀察發(fā)現(xiàn)在B7培養(yǎng)基上槲蕨繼代苗生長良好,，葉片濃綠，苗生長較整齊一致（圖1E）,，且增殖 倍數(shù)達到最大,，為2.25倍；在6-BA濃度不變的情況下,，隨著NAA濃度的增加,，槲蕨葉叢增殖系數(shù)呈下降趨勢，且苗質量變差,，葉片枯黃現(xiàn)象較為嚴重。
　　2.3 不同激素水平對槲蕨繼代苗生根的影響
　　將槲蕨繼代苗接入含不同外源激素水平的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng),，20 d后觀察,，根據(jù)統(tǒng)計結果得出4種生根培養(yǎng)基上的誘導情況，槲蕨根粗大小依次為D4,、D3,、D2、D1,；4種生根培養(yǎng)基的苗都呈濃綠色,，有少數(shù)苗根部枯黃， 生根率均達90%以上,。從表3可以看出,，NAA誘導出的根無論根粗和苗高都優(yōu)于IBA，激素NAA和IAA配比對槲蕨壯苗生根的效果較好,，最佳生根培養(yǎng)基 為1/2 MS+0.5 mg/LNAA+0.3 mg/L IAA,。
　　2.4 試管苗的移栽
　　經(jīng)過壯苗生根培養(yǎng)后，選擇健壯,、根粗的試管苗進行煉苗,。打開培養(yǎng)瓶的蓋子，噴施少量水,，放入溫室內(nèi)自然光下煉苗7 d,，用鑷子取出試管苗，洗凈根部培養(yǎng)基,，移栽到基質約為5～8 cm厚的泥炭土,、樹皮等基質中，基質以排水良好、不易發(fā)霉為宜,。移栽至苗較粗壯,，長勢旺盛時，可移植到樹上（圖1F）,。
　　3 小結與討論
　　本研究分別采用槲蕨孢子,、塊莖和葉片進行愈傷組織誘導對比試驗，發(fā)現(xiàn)孢子放到培養(yǎng)基中培養(yǎng),，出現(xiàn)綠點進而形成葉叢團,；塊莖能夠誘導出愈傷組織，但愈傷組織誘導率較低,；葉片在誘導過程中易褐化,，未產(chǎn)生愈傷組織。
　　植物生長調節(jié)劑對槲蕨的離體培養(yǎng)有較大影響,，此外,，離體培養(yǎng)還受光照、溫度,、活性炭等因素的影響,，適當調整光暗條件進行培養(yǎng)對于塊莖愈傷組織的產(chǎn)生有促進作用，本試驗在槲蕨愈傷組織誘導初期進行了光暗交替培養(yǎng),，對于愈傷組織的產(chǎn)生有一定的促進作用,。
　　試驗中發(fā)現(xiàn)，在添加活性炭之前,，槲蕨苗培養(yǎng)1個月后底部逐漸黃化或褐化,，苗細弱；添加活性炭以后,，槲蕨苗褐化現(xiàn)象少,，且幼苗健壯。說明活性炭有利于壯苗及抑制褐化,。