常用酶的配制

　　1．溶菌酶

　　用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液,，分裝成小份并保存于-20℃,。每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。

　　2．蛋白水解酶類

　　a：鏈霉蛋白酶是從鏈球菌（Streptomyces griseus）中分離到的一種絲氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物,。

　　b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染,，經(jīng)自消化的鏈酶蛋白酶的配制方法如下：把該酶的粉末溶解于10mmol./l Tris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中,，配成20mg/ml濃度,，于37℃溫育1h。經(jīng)消化的鏈霉蛋白酶分裝成小份放在密封試管中,，保存-20℃,。

　　c：蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，從林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中純化得到,。該酶有兩個(gè)Ca²⁺結(jié)合位點(diǎn),，它們離酶的活性中心有一定距離，與催化機(jī)理并無(wú)直接關(guān)系,。然而,，如果從該酶中除去Ca²⁺，由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化,，催化活性將喪失80%左右,，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質(zhì)。所以，蛋白酶K消化過(guò)程中通常加入EDTA（以抑制依賴于Mg²⁺的核酸酶的作用）,。但是,，如果要消化對(duì)蛋白酶K具有較強(qiáng)耐性的蛋白，如角蛋白一類,，則可能需要使用含有1mmol/l Ca²⁺而不含EDTA的緩沖液。在消化完畢后,、純化核酸前要加入EGT（pH8.0）至終濃度為2mmol/L,以鰲合Ca²⁺,。

　　3．無(wú)DNA酶的RNA酶

　　將胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/l Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中,，配成10mg/ml的濃度,，于100℃加熱15min，緩慢冷卻至室溫,，分裝成小份保存于-20℃,。